痛瀉要方對(duì)IBS模型大鼠FOS蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1.IBS是一種以平滑肌功能失調(diào)、內(nèi)臟高敏感性、腸道菌群失調(diào)作為重要臨床特征的慢性疾病。據(jù)報(bào)道歐美地區(qū)發(fā)病率為10％-20％,我國(guó)發(fā)病率為5％-12％。其發(fā)病原因復(fù)雜，罹及全身多臟器病變涉及腸道動(dòng)力障礙、內(nèi)臟感覺(jué)異常、腦腸軸紊亂、心理因素、腸道菌群失調(diào)，從而出現(xiàn)腹痛、腹脹、排便行為和大便性狀異常。多年來(lái)，IBS研究發(fā)展緩慢而不盡如人意。究其原因，IBS研究多采用急性應(yīng)激動(dòng)物模型，單純性地對(duì)胃腸動(dòng)力和內(nèi)臟感覺(jué)等進(jìn)行癥狀化

2、地描述，這就在某種程度上阻礙了IBS治療學(xué)的發(fā)展。對(duì)于臨床研究的不足我們采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)彌補(bǔ)，特別是有關(guān)倫理問(wèn)題和隨后可能會(huì)出現(xiàn)偏倚的臨床研究。因此，表現(xiàn)直觀、可反復(fù)構(gòu)建的IBS動(dòng)物模型對(duì)進(jìn)一步研究、了解IBS的易感因素、發(fā)病機(jī)制和疾病預(yù)防都有非常積極的作用。建立一個(gè)涉及消化道動(dòng)力改變、感覺(jué)和行為異常等多因素同時(shí)存在的動(dòng)物模型，不僅可以為探討這種疾病的發(fā)病機(jī)理創(chuàng)造有利條件，還可以驗(yàn)證中樞神經(jīng)系統(tǒng)在IBS發(fā)病中的意義。本研究采用中西醫(yī)結(jié)合的

3、方式構(gòu)建一種新型IBS大鼠模型，目的為IBS這種臨床常見(jiàn)病的基礎(chǔ)研究提供更完善的動(dòng)物模型。
　　2.對(duì)于IBS的治療，臨床上西醫(yī)無(wú)特效藥，治療方面，認(rèn)為IBS癥狀是由鈣通道被異常的激活、增加的鈣內(nèi)流導(dǎo)致的動(dòng)作電位增多的結(jié)果，所以臨床采用鈣通道阻滯劑使病人癥狀緩解，但實(shí)際效果不盡人意。但中醫(yī)采用辯證的方法治療IBS具有深厚的歷史且效果明顯，但機(jī)制不清。本研究采用中醫(yī)治療泄瀉型IBS的經(jīng)典方，即痛瀉要方，對(duì)IBS泄瀉型大鼠進(jìn)行治療，闡

4、述中藥防治IBS的科學(xué)性和作用靶點(diǎn)，即中藥治療為身心同治，使大鼠的泄瀉癥狀有所緩解并且使大鼠的腦部海馬區(qū)FOS蛋白含量有所下降，可為IBS防治與藥物研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.本研究采用已被廣泛應(yīng)用的慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激的方法構(gòu)建的經(jīng)典IBS腹瀉型大鼠模型，即經(jīng)典的抑郁模型。并根據(jù)呂紅、譚潔描述的方法進(jìn)行整合，盡量模擬臨床IBS病因與發(fā)病癥狀，復(fù)合情志與證候多因素建立慢性多因素應(yīng)激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型。

5、慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激讓大鼠難以預(yù)料將會(huì)面臨何種刺激，而處于焦慮兼恐懼狀態(tài)；高糖高脂飼料、高溫高濕環(huán)境加酒精刺激，是較為成熟的脾胃濕熱造模方法。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合上述兩種方法，運(yùn)用中西醫(yī)結(jié)合的方式，制作新型IBS大鼠模型，這種大鼠模型可以較好地模擬人類脾胃濕熱腹瀉型IBS病因病機(jī)及發(fā)病癥狀。
　　2.本研究以痛瀉要方為治療藥，對(duì)泄瀉型IBS模型大鼠進(jìn)行治療，對(duì)大鼠的腦、腸進(jìn)行HE染色，對(duì)腦部情緒中樞海馬區(qū)進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，用平均光密度對(duì)免

6、疫組化結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，揭示痛瀉要方調(diào)控IBS模型大鼠腦部海馬區(qū)內(nèi)FOS含量的影響，闡述中藥防治IBS的科學(xué)性和作用靶點(diǎn)。
　　3.本研究對(duì)治療后的大鼠腦部海馬區(qū)及結(jié)腸組織進(jìn)行病理檢測(cè)及免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)IBS病理結(jié)果和正常組對(duì)比并無(wú)差異，說(shuō)明IBS是一種功能性疾病并無(wú)器質(zhì)性改變。另外IBS泄瀉型大鼠經(jīng)中藥痛瀉要方治療后腦部海馬區(qū)FOS含量有所下降，說(shuō)明痛瀉要方治療本病的作用靶點(diǎn)不只在腸部而且作用在腦，這與西醫(yī)一直以來(lái)認(rèn)定的IBS病理

7、機(jī)制即腦-腸軸機(jī)制基本吻合。
　　結(jié)果：
　　1.本實(shí)驗(yàn)在一定時(shí)間內(nèi)綜合運(yùn)用糞便性狀評(píng)分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實(shí)驗(yàn)、糖水?dāng)z取量等)等檢測(cè)方法，獲得每只造模動(dòng)物的5項(xiàng)指標(biāo)。其中的各項(xiàng)指標(biāo)與正常組比較，慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激模型組和慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱動(dòng)物模型組有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01)；與慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激模型組比較，慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱動(dòng)物模型組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

8、<0.01)。
　　2.經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組比較，模型組各項(xiàng)指標(biāo)如糞便性狀評(píng)分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為、心理等，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01)，痛瀉要方組和雙歧桿菌組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05)；與模型組比較，痛瀉要方組及雙歧桿菌組體重有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05)；與痛瀉要方組比較，雙歧桿菌組體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05)。
　　3.通過(guò)大鼠的腦、腸進(jìn)行HE染色，對(duì)腦部進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，平均光密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

9、發(fā)現(xiàn)，組與組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），顯示痛瀉要方能降低海馬FOS表達(dá)，推測(cè)痛瀉要方對(duì)中樞FOS變化有調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)論：
　　1.本研究制作新型IBS大鼠模型，即慢性多因素應(yīng)激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型，能較好地模擬IBS的病因病機(jī)及臨床表現(xiàn)，該復(fù)合模型與人類脾胃濕熱泄瀉型IBS的病因病機(jī)及臨床表現(xiàn)，有較好的可重復(fù)性，并且可以持續(xù)數(shù)月?？捎糜谥嗅t(yī)、西醫(yī)基礎(chǔ)研究。
　　2.本研究中痛瀉要方在IBS治療

10、中注重疏肝健脾、心身同治，分別從癥狀、病機(jī)等角度入手，充分展示了IBS的情志病因和心身整體特征。當(dāng)大鼠出現(xiàn)情志抑郁、焦慮、飲食減少、體質(zhì)量減輕、倦怠乏力、排便次數(shù)增加及大便稀軟等癥狀表現(xiàn)時(shí)可能與海馬FOS表達(dá)升高有關(guān)。痛瀉要方能降低海馬FOS表達(dá)，推測(cè)痛瀉要方對(duì)中樞FOS變化有調(diào)節(jié)作用。中樞FOS的變化可能參與了IBS泄瀉型腦-腸互動(dòng)機(jī)制。
　　3.本研究對(duì)腦部海馬區(qū)FOS蛋白表達(dá)進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)治療后大鼠海馬FOS蛋白表達(dá)