小鼠類(lèi)乳腺干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、哺乳動(dòng)物的乳腺是唯一在動(dòng)物出生后可以多次再生、退化的器官.不同發(fā)育時(shí)期的動(dòng)物乳腺中都存在一定比例的干細(xì)胞,正是這些干細(xì)胞維持和保證了乳腺發(fā)育的特性.利用類(lèi)乳腺干細(xì)胞再生乳腺是近兩年來(lái)興起的一項(xiàng)高新技術(shù),具有以下四個(gè)方面的重要意義:為那些因乳腺腫瘤或癌癥而切除乳腺的婦女修復(fù)或再生功能性乳腺;為那些需要隆胸的女性提供安全可行的填充新材料;為將健康成年雌性家畜乳腺改造成為分泌藥用或保健用蛋白的乳腺提供一個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的技術(shù)平臺(tái);為其他器官的發(fā)育、

2、再生或修復(fù)提供方法、思路和理論借鑒.我們以小鼠為模型,運(yùn)用組織化學(xué)、免疫熒光組織(細(xì)胞)化學(xué)、流式細(xì)胞儀分選方法(FACS)以及分子生物學(xué)手段,研究了小鼠乳腺的發(fā)育規(guī)律;小鼠乳腺組織中類(lèi)乳腺干細(xì)胞;小鼠乳腺細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及類(lèi)乳腺干細(xì)胞的鑒定;小鼠類(lèi)乳腺干細(xì)胞分化的潛能;小鼠乳腺類(lèi)腺體體外短期培養(yǎng)富集類(lèi)乳腺干細(xì)胞體系的優(yōu)化等.研究結(jié)果表明:1.3周齡的balb/c小鼠是去除乳腺腺體的最佳時(shí)期;2.不同發(fā)育時(shí)期乳腺組織中都存在類(lèi)乳腺干細(xì)

3、胞;3.6~8周齡和懷孕期小鼠是獲得大量類(lèi)乳腺干細(xì)胞的理想時(shí)期;4.首次證明體外短期培養(yǎng)的乳腺類(lèi)腺體體系中,有一些細(xì)胞可以表達(dá)一定量的胚胎干細(xì)胞的特異性表達(dá)抗原基因Oct-4、Rex-1;上皮干細(xì)胞的特異性表達(dá)抗原基因integrinβ-1;大部分已知干細(xì)胞共表達(dá)的抗原基因bcrpl/acbg21;5.小鼠類(lèi)乳腺干細(xì)胞移植到去除乳腺腺體的小鼠乳脂墊中,可以再生功能性乳腺,因此,類(lèi)乳腺干細(xì)胞在體內(nèi)具有分化潛能;6.小鼠類(lèi)乳腺干細(xì)胞在體外誘

4、導(dǎo)泌乳體系中培養(yǎng)7天,可以表達(dá)β-酪蛋白及其基因,表明類(lèi)乳腺干細(xì)胞在體外具有分化潛能;7.首次建立了優(yōu)化的乳腺類(lèi)腺體體外短期培養(yǎng)富集類(lèi)乳腺干細(xì)胞體系,由此體系培養(yǎng)的類(lèi)腺體獲得類(lèi)乳腺干細(xì)胞(Scal-1+)的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報(bào)道使用體系獲得類(lèi)乳腺干細(xì)胞比例;8.小鼠乳腺類(lèi)腺體結(jié)構(gòu)體外短期培養(yǎng)獲得的細(xì)胞中有一定量的類(lèi)乳腺干細(xì)胞存在:優(yōu)化體系培養(yǎng)22小時(shí)獲得的細(xì)胞的類(lèi)乳腺干細(xì)胞(Scal-1<'+>)比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于培養(yǎng)72小時(shí)獲得細(xì)胞的比例;相

5、反,表達(dá)造血干細(xì)胞特異性抗原CD34的細(xì)胞(CD34+)比例在培養(yǎng)72小時(shí)比培養(yǎng)22小時(shí)高;同時(shí),培養(yǎng)的體系中還有一定比例的Scal-1<'+>/CD34<'+>細(xì)胞存在.總之,隨著對(duì)類(lèi)乳腺干細(xì)胞研究的深入,我們急需找到類(lèi)乳腺干細(xì)胞的特異性表達(dá)抗原.在此之前,仍然只能以造血干細(xì)胞的特異性表達(dá)抗原Scal-1作為一個(gè)標(biāo)記,進(jìn)行類(lèi)乳腺干細(xì)胞的分析和分選研究.進(jìn)一步研究類(lèi)乳腺干細(xì)胞的特異性表達(dá)譜,以期能夠找到類(lèi)乳腺干細(xì)胞的特異性表達(dá)抗原,分離