5-氮雜-2’脫氧胞苷對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系增殖及IGFBP7表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　子宮內(nèi)膜癌（Endometrial cancer，EC）是全球范圍內(nèi)女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于子宮頸癌居于第二位，且呈逐年上升趨勢(shì)。在中國(guó)，僅2012年就有62000個(gè)新發(fā)病例，居于女性惡性腫瘤的第九位。但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7（Insulin-like growth factor binging protein7，IGFBP7）是分子量為30-kDa的一種分泌蛋白，

2、研究發(fā)現(xiàn)，其在前列腺癌、惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌等多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)下降或缺失，其異常表達(dá)與CpG島高甲基化導(dǎo)致基因沉默相關(guān)，應(yīng)用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’脫氧胞苷（5-aza-2 deoxycytidine，5-Aza-dC，decitabine)處理后其表達(dá)上調(diào)，并發(fā)揮抑癌功能。課題組前期研究結(jié)果顯示，IGFBP7在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中表達(dá)下降或缺失，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中IGFBP7的表達(dá)上調(diào)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)子

3、宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖速率降低，凋亡率增加；另外，向子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞培養(yǎng)基中加入人重組IGFBP7，發(fā)現(xiàn)其能通過調(diào)控MEK/ERK信號(hào)通路，抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用5-氮雜-2’脫氧胞苷處理子宮內(nèi)膜癌 HEC-1A及 Ishikawa細(xì)胞，觀察其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖及對(duì)IGFBP7表達(dá)的影響，探討其治療子宮內(nèi)膜癌的可能性。
　　方法：
　　（1）四種不同濃度5-Aza-dC（2.5μmol/L、5μmol/L、10μ

4、mol/L、20μmol/L）分別刺激子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞24、48、72h。應(yīng)用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測(cè)不同濃度5-Aza-dC在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)子宮內(nèi)膜HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞增殖活性的影響，并計(jì)算其對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率。
　?。?）應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)5μmol/L5-Aza-dC處理72小時(shí)前后HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞中

5、IGFBP7 mRNA的表達(dá)變化。
　?。?）應(yīng)用免疫蛋白印跡（Western blot）法檢測(cè)5μmol/L5-Aza-dC處理72小時(shí)前后HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞中IGFBP7蛋白的表達(dá)變化。
　?。?）應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定量資料以x?s表示，符合正態(tài)分布的兩組獨(dú)立數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的多組定量資料采用單因素方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t法，以

6、?=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)
　　結(jié)果：
　　1 CCK-8法檢測(cè)不同濃度5-Aza-dC對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞增殖活性的影響
　　結(jié)果顯示，四種不同濃度5-Aza-dC（2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）作用24、48、72h均能抑制HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞的增殖。相同的藥物濃度，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖率明顯降低，抑制率增加，呈時(shí)間依賴性，差異具

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；相同的作用時(shí)間，隨著藥物濃度的升高，細(xì)胞增殖率明顯降低，抑制率增加，呈劑量依賴性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　25-Aza-dC對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7 mRNA表達(dá)的影響
　　結(jié)果顯示，應(yīng)用5μmol/L5-Aza-dC處理HEC-1A細(xì)胞72小時(shí)后，IGFBP7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量為19.81±0.80，與處理前相比較，mRNA的表達(dá)量明顯

8、上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。5μmol/L5-Aza-dC處理Ishikawa細(xì)胞72h后，其IGFBP7mRNA的表達(dá)量為9.39±0.94，與處理前相比較，表達(dá)明顯上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　35-Aza-dC對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7蛋白表達(dá)的影響
　　結(jié)果顯示，經(jīng)5μmol/L5-Aza-dC處理72小時(shí)后，HEC-1A細(xì)胞中IGFBP7蛋白的相對(duì)表達(dá)

9、量為1.64±0.02，與處理前0.74±0.13相比，其表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。相同條件處理Ishikawa細(xì)胞后，IGFBP7蛋白的相對(duì)表達(dá)量為0.92±0.15，與處理前0.57±0.01相比，其表達(dá)水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.5-Aza-dC對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞具有增殖抑制作用；
　　2. IGFBP7在子宮內(nèi)膜癌