高羊茅內(nèi)生真菌的分離、鑒定及其生物防治的初步研究.pdf

1、禾草內(nèi)生真菌在寄主體內(nèi)渡過(guò)全部或幾乎全部生活周期而不表現(xiàn)任何癥狀，與宿主互惠互利，提高宿主對(duì)生物脅迫(抗蟲(chóng)、抗菌等)和非生物脅迫抗性的能力，使得共生體系具有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力。禾草內(nèi)生真菌產(chǎn)生豐富多樣的次生代謝產(chǎn)物，具有多種生物活性，對(duì)害蟲(chóng)和植物病原菌起到抑制和滅殺作用，這些優(yōu)良特征能夠使內(nèi)生真菌有望成為生物農(nóng)藥。因此對(duì)禾草內(nèi)生真菌在植物病害生物防治方面的研究不但具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)學(xué)意義，還有現(xiàn)實(shí)的理論意義。 本文從高羊茅交戰(zhàn)II的植

2、物組織中分離內(nèi)生真菌，利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法對(duì)之鑒定，篩選內(nèi)生真菌抑菌譜，并對(duì)抑菌機(jī)理做了研究，試驗(yàn)結(jié)果如下： 1．高羊茅內(nèi)生真菌的分離與鑒定 采用苯胺蘭染色法檢測(cè)多年生黑麥草和高羊茅部分商業(yè)品種的種子，高羊茅交戰(zhàn)II種子的內(nèi)生真菌感染率最高，達(dá)到73[％]。 用組織搗碎的固液分離法從高羊茅交戰(zhàn)II植株分離得到6株白色菌株，通過(guò)組織印跡以及孢子滅活試驗(yàn)證明所分離的菌株為內(nèi)生的。 從形態(tài)學(xué)和分子生

3、物學(xué)兩方面鑒定6株內(nèi)生真菌。6株真菌按形態(tài)劃分為2個(gè)菌群，菌l(J21、J22、J25、J26)電鏡掃描觀察孢子形狀為腎形，長(zhǎng)約6.4-10μm，分子生物學(xué)鑒定采用AP-PCR的方法，在0.7，0.9，2.1kb左右出現(xiàn)條帶。菌II(J23、J24)電鏡掃描觀察分生孢子形狀為長(zhǎng)卵形，4.1-7.2×1.2-1.5μm.，分子鑒定采用18SrDNA法，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。 綜合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，菌Ⅰ為禾草內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)菌株

4、Neotyphodium coenophialum，菌Ⅱ與Acremonium alternatum有非常高的相似性。本文首次從高羊茅株中分離得到Acremonium alternatum，Acremoniumalternatum-F.arundinace是一種新的穩(wěn)定的共生體系，這對(duì)于研究禾草及其內(nèi)生真菌的共生體系提供了寶貴的資料。 2．6株內(nèi)生真菌的生物學(xué)特征 對(duì)6株內(nèi)生真菌利用碳源的能力做了初步研究，結(jié)果表

5、明6株菌可以利用果糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖等碳源MS改良培養(yǎng)基，生長(zhǎng)良好。 牛奶石蕊試驗(yàn)菌落周圍無(wú)明顯的透明圈，說(shuō)明分離的內(nèi)生真菌不具備水解蛋白的能力。 3．內(nèi)生真菌抑菌譜試驗(yàn) 抑菌譜的篩選發(fā)現(xiàn)6株內(nèi)生真菌對(duì)核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、番茄灰霉病原菌(Botrytis cinerea)、番茄晚疫病原菌(Phytophthora infestans)等植物致病菌

6、有一定的抑制作用。其中J24對(duì)核盤菌抗性較為明顯，與核盤菌之間有明顯的拮抗帶，寬為13ram，可以作為潛在的生防菌深入研究。 4．J24對(duì)核盤菌抗性的初步研究 采用玻璃紙條法研究J24寄生能力，J24不是核盤菌的寄生菌。J24難揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的抑菌作用的研究(采用圓盤濾膜法)，發(fā)現(xiàn)可以抑制核盤菌菌絲生長(zhǎng)，抑制率達(dá)到69％：平板上形成菌核的重量減少率為49.7％，菌核萌發(fā)率為69.2％。 上述研究表明J24對(duì)核盤菌