miR-423、miR-18b、miR-129在老齡小鼠心衰過程中的表達.pdf

1、背景及目的：
　　隨著人口老齡化，心力衰竭（簡稱心衰）基礎(chǔ)疾?。ü谛牟?、高血壓病、心肌梗死等）的發(fā)病率逐年升高，心衰的發(fā)病率及死亡率也隨之不斷提高。尋找一種既能診斷心衰又能較好反映其嚴重程度的檢測指標有著重要的臨床意義。心衰發(fā)展過程中伴隨著多種結(jié)構(gòu)的改變，如心肌細胞肥大、凋亡、間質(zhì)纖維化、毛細血管數(shù)量減少及免疫系統(tǒng)的激活等，結(jié)構(gòu)的改變引起心臟功能的變化（如射血量降低、充盈壓增高等），但是潛在的分子機制尚未闡明。微小RNA（miRN

2、As）是具有21-25個核苷酸的內(nèi)源性小分子RNA。近年來，大量研究表明血清中的 miRNAs已作為多種組織損傷及病理過程的敏感和特異的生物標志物。miRNAs通過多種心臟病理改變引起心肌重構(gòu)、心功能降低，最終導(dǎo)致心力衰竭。因此，我們可以通過一些特定的 miRNAs水平來診斷心力衰竭。本研究包括：1）建立老齡小鼠心衰模型，觀察老齡小鼠心衰過程中miR-423、miR-18b、miR-129的表達差異。2）研究老齡小鼠在心衰發(fā)生發(fā)展過程中

3、，miR-423的表達趨勢，探討其與心衰的關(guān)系，為心衰的診斷或預(yù)后提供價值。
　　方法：
　　1.18月齡雄性健康小鼠共54只，按照投硬幣方法隨機分成2組。心衰組（n=38）：常規(guī)飼養(yǎng)，于腹部皮下注射異丙腎上腺素（ISO）持續(xù)14天，構(gòu)造老齡小鼠心力衰竭模型；對照組（n=16）：常規(guī)飼養(yǎng)，相同方法注射等量生理鹽水14天。注射后繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)4周。2.4周之后行超聲心動圖和心電圖，比較兩組心臟結(jié)構(gòu)、功能和心率。然后處死小鼠10只

4、（心衰4w組），取心臟標本，分別給予全心及左室稱重，計算出左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。心肌標本經(jīng)固定、脫水、包埋后，切得組織切片，分別給予常規(guī)HE染色。3.繼續(xù)飼養(yǎng)2周后處死小鼠10只（心衰6w組），剩余小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)2周后處死（心衰8w組）。處死后按壓小鼠的眼球取血4ml，離心后收集上清液。4.從血漿中提取總 RNA并進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得相應(yīng)miRNA的cDNA，以β-actin為內(nèi)參進行標定，采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)檢

5、測miR-423、miR-18b、miR-129在心衰小鼠及正常小鼠血清中的表達。5.用PCR檢測miR-423在各組血清中表達量，并進行對比。6.應(yīng)用 SPSS16.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用均數(shù)±標準差（x?s）表示，計量資料若滿足正態(tài)性，采用t檢驗，若不滿足正態(tài)性，采用秩和檢驗；多組比較用Kruskal-Wallis H檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI，mg/g)

6、比較：對照組為2.68±0.32，心衰組為5.70±0.54。與對照組比較，心衰組左室質(zhì)量指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.HE染色：正常對照組小鼠的心肌細胞輪廓完整，肌纖維布列一致；心衰組小鼠心肌纖維部分中斷，心肌細胞呈現(xiàn)不同程度的水腫、心肌細胞肥大，有局灶性或者片狀壞死灶。
　　3.心臟彩超：心衰組心室腔明顯增大，心率較快，左室短軸收縮功能障礙更明顯（P<0.05）。
　　4.心電圖：與對照

7、組相比，心衰組心率較快，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.miR-423、miR-18b、miR-129表達量比較：心衰小鼠血清中miR-423表達顯著高于對照組（P＜0.001）,miR-18b、miR-129的表達與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.心衰后不同時間，PCR檢測發(fā)現(xiàn)miR-423的表達量呈上升趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.與對照組相