H2S對脂多糖誘導PC12細胞凋亡的拮抗作用及其機制.pdf

1、目的：探討H2S對脂多糖（LPS）損傷PC12細胞的拮抗作用及其分子機制。
　　方法：(1)培養(yǎng)通過神經(jīng)生長因子刺激后高分化的腎上腺嗜鉻細胞瘤即PC12細胞。（2）采用 CCK-8法檢測不同濃度 LPS對 PC12細胞活力的影響，選擇合適的LPS損傷劑量；采用CCK-8法檢測不同濃度H2S對同一濃度LPS對PC12細胞損傷的拮抗作用，并選擇合適的劑量進行進一步研究。（3）在4中不同的因素處理下，用普通光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)學的變化

2、。（4）采用Hochest染色觀察H2S對LPS誘導PC12細胞神經(jīng)毒效應(yīng)的影響。（5）采用流式分析技術(shù)（FCM)檢測H2S對LPS誘導 PC12細胞損傷及拮抗作用引起的細胞周期變化。（6）用 western blot測定COX-2、裂解型Caspase-3、Erk1/2、phosph-Erk1/2、P38MAPK、phosph-P38MAPK、NF-kB、p-NF-kB的蛋白含量。
　　結(jié)果：(1)采用對數(shù)生長期PC12細胞進行

3、試驗。（2）采用CCK-8法檢測出LPS對PC12細胞活力損傷呈濃度增長依賴性； CCK-8法檢測出H2S對LPS損傷的拮抗作用也呈濃度依賴性，但是當達到或超過1000μg/ml時該拮抗作用消失，反而對PC12細胞產(chǎn)生損傷作用。（3）形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)，LPS處理24 h后部分細胞形態(tài)有所變化，突觸消失，由梭形變成了橢圓形，細胞的連接松散,但經(jīng)過H2S預處理30 min后再加 LPS的細胞組較只加 LPS細胞組橢圓形細胞減少，細胞相對連接緊

4、密。(4) Hoechst染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPS處理24 h后細胞核出現(xiàn)明顯固縮，但經(jīng)過H2S預處理后的核固縮細胞的數(shù)目明顯減少。(5)FCM分析發(fā)現(xiàn)LPS處理后的細胞S期比率下降， H2S預處理干預后比率明顯升高。(6)H2S可以抑制 COX-2、裂解型 Caspase-3、phosph-P38MAPK、p-NF-kB等蛋白的表達，但可上調(diào)phosph-Erk1/2的表達。
　　結(jié)論:H2S可抑制LPS誘導PC12細胞凋亡，表明H