萍鄉(xiāng)紅鯽卵膜糖蛋白ZP3基因的克隆與表達.pdf_第1頁
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1、南昌大學碩士學位論文萍鄉(xiāng)紅鯽卵膜糖蛋白ZP3基因的克隆與表達姓名：吳會芳申請學位級別：碩士專業(yè)：水生生物學指導教師：洪一江20081206ABSTRACTABSTRACTPingxiangredtransparentcmciancarp，CarassiusauratusvarPingxiangnensisisawildnessnaturaltripledcruciancarpmutantdistributedintheareaofPin

2、gxianginJiangxiProvinceIttakesbisexualandgynogeneticreproductionmodewhichissimilartothesilvercmciancarp。Carassiusauratusgibelio(B10ch)Zonapellucida(ZP)isthemarxglycoproteinextracellulararoundtheperipheraleggsZP3isamember

3、oftheZPfamilyExperimentsshowedthat，ZP3isthereceptorofprimarysperm，anditcouldcombinespermsandleadstoacrosomereactioninmammalsIts01inkedglycosylatedsidechainplaysakeyroleduringspermcombinationThemaincontentofthispaperinclu

4、destwopartsFirst：weclonedtheeDNAsequenceofZP3fromPingxiangredtransparentcmciancarpbyusingSMARTeDNAsynthesisandRACEPCRmethodsThesequenceweobtainedis1278bpIthascomplete3’endincludingterminalcodonTAA，atailingsignalAATAAAand

5、atailwith30bplongpolyAThepartialopenreadingframeofZP3isfrom16bpto1230bpanditencodes404aminoresiduesAnalysisofaminoacidsequencehomologyindicatedthatPingxiangred—transparentcmciancarpshowedthelligllesthomologwithsilvercmci

6、ancarpTIlisresultssuggestedtheymighthaveverycloserelationshipsSecond：ThecorefragmentofclonedeDNAsequencewassubclonedintopET32avectorTherecombinedvectorWastransformedintoBL21(DE3)Ecolicompetentcells。Theywereinducedbyisopr

7、opyl—p—thiogalactopyranoside(IPTG)，andthenexpressedafusionprotienThisprotienWaspurifiedwithaffinityresinNiNTA，analysisedthroughSodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDSPAGE)andquantitatedbyBrandfordmethodI

8、nresult，Weobtainedtherelativelypurifiedfusionprotienabout31KDawiththeconcentrationof3588mg／LTIlisresearchCanbeafoundationforpreparationofZP3polyclonalantibodyandfurtherstudyabouttheexpressioncharacteristiesofZP3intheproc

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