兩株柳珊瑚來源真菌次級代謝產(chǎn)物及生物活性研究.pdf

1、近30年來，柳珊瑚、軟珊瑚已成為海洋天然產(chǎn)物化學(xué)研究的熱點資源領(lǐng)域，從中發(fā)現(xiàn)了大量的活性次級代謝產(chǎn)物，并發(fā)現(xiàn)了多個藥物先導(dǎo)化合物。珊瑚體內(nèi)和表面存在著大量的微生物，近年來從珊瑚來源微生物的發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得了越來越多的具有抗菌活性、細(xì)胞毒活性及抗病毒活性的次級代謝產(chǎn)物，使得珊瑚來源微生物次級代謝產(chǎn)物的研究受到極大關(guān)注，已成為海洋天然產(chǎn)物化學(xué)研究的新熱點。本研究對兩株中國南海柳珊瑚來源真菌的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分離鑒定，獲得了抗病毒、細(xì)胞毒

2、等活性化合物。
　　運用化學(xué)篩選和活性篩選的方法，從本實驗室柳珊瑚來源真菌庫中篩選活性菌株;運用大米固體培養(yǎng)基對兩株活性菌株:柳珊瑚來源枝孢屬真菌Cladosporium sp(RA07-1)和黑曲霉Aspergillus niger(TA01-24)進(jìn)行培養(yǎng);對發(fā)酵產(chǎn)物綜合運用各種色譜分離技術(shù)（正反相硅膠柱層析，凝膠柱層析以及半制備高效液相色譜等）分離純化單體化合物;綜合運用現(xiàn)代波譜分析技術(shù)（核磁共振，質(zhì)譜，紅外光譜，紫外光譜，

3、圓二色譜等）對所獲得的單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析。采用抗菌、腫瘤細(xì)胞抑制、抗病毒及鹵蟲致死活性模型測試化合物的生物活性。
　　從Cladosporium sp（RA07-1）發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了8個單體化合物(1-8)，包括雙環(huán)內(nèi)酰胺類化合物1個(1)、大環(huán)內(nèi)酯類化合物6個(2-7)及五元內(nèi)酯化合物1個(8)?；衔?是一個結(jié)構(gòu)非常特殊的二環(huán)內(nèi)酰胺類化合物，結(jié)構(gòu)確定時運用了NMR化學(xué)定量計算法驗證了其平面結(jié)構(gòu)，用實測的旋光值與其計算

4、的旋光值進(jìn)行比較確定了化合物1 C-8的絕對構(gòu)型為8S,化合物2的絕對構(gòu)型的確定是通過改良的Mosher方法得到確定的其絕對構(gòu)型為4R、5R、11R。
　　從A.niger(TA01-24)發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了14個單體化合物(9-22)，包括萘并吡喃酮類化合物7個(9-15)、香豆素二聚體化合物3個(16-18)、環(huán)肽等其他化合物4個(19-22)?；衔?-15為萘并吡喃酮類化合物，是真菌Aspergillus niger主要

5、的次級代謝產(chǎn)物。其中化合物9、10為萘并吡喃酮類化合物的單體，11-15為二聚體，由萘并吡喃酮類化合物單體9、10以不同形式聚合而成。萘并吡喃酮二聚體雖然沒有手性碳，但是由于其結(jié)構(gòu)中存在一個手性軸，使得每個化合物都有兩種可能的構(gòu)型(R和S)。通過圓二色譜(CD)測試并與文獻(xiàn)報道的該類化合物CD曲線相比較，確定了5個萘并吡喃酮二聚體手性軸的絕對構(gòu)型均為S構(gòu)型。
　　運用鹵蟲致死活性、細(xì)胞毒活性、抗病毒活性及抗菌活性模型，對從柳珊瑚來

6、源真菌Cladosporium sp(RA07-1)和Aspergillus niger(TA01-24)分離得到的22個化合物（1-22）進(jìn)行了生物活性測試。抗菌活性結(jié)果顯示化合物4和5對四聯(lián)球細(xì)菌T.halophilus顯示出了較強(qiáng)的活性，其最小抑制濃度MIC值均為3.13μM?？共《净钚越Y(jié)果顯示，化合物9、10和12對手足口病病毒(EV71)有顯著的抑制活性，IC50分別為43.9μM、10.3μM和54.7μM，活性明顯高于陽性

7、對照藥(陽性藥利巴韋林對EV71的IC50為256μM)，化合物17、21對單純皰疹病毒(HSV)有選擇性抑制作用，IC50分別為42.3μM和117.5μM(陽性藥利巴韋林對HSV的IC50為128μM)。細(xì)胞毒活性測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物1對HeLa、P388、HT-29、A549腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性IC50分別為，0.76μM、1.35μM、2.48μM、3.11μM，化合物19對所測腫瘤細(xì)胞株均有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，對HeLa

8、、Hep-2、RD、A549和Vero的IC50分別為2.30μM、0.88μM、0.034μM、0.83μM和3.08μM，比陽性藥阿霉素活性好很多(0.43μM、0.36μM、0.99μM、14.29μM、2.03μM)。
　　本研究從柳珊瑚來源枝孢屬真菌及黑曲霉中獲得二環(huán)內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、萘并吡喃酮二聚體、香豆素二聚體等結(jié)構(gòu)類型的化合物，測定了化合物的抗病毒和細(xì)胞毒活性，為相關(guān)活性海洋天然產(chǎn)物的開發(fā)應(yīng)用提供了基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)資