香芹酚對(duì)非小細(xì)胞肺癌1299細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的:肺癌是全世界癌癥相關(guān)死亡的主要原因，因缺乏有效的治療導(dǎo)致高發(fā)病率和死亡率，每年造成約150萬人死亡。肺癌分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)，其中NSCLC占所有肺癌的85％，約75％的NSCLC患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚。盡管基礎(chǔ)和臨床研究的進(jìn)步，但非小細(xì)胞肺癌的總體5年生存率僅為15％。NSCLC的發(fā)生與發(fā)展受多種因素影響，表現(xiàn)為多階段的復(fù)雜過程，發(fā)病機(jī)制至今尚未清楚。因此，探索肺癌發(fā)生、惡化和進(jìn)展的機(jī)制，尋

2、找有效的診斷和治療靶標(biāo)是必要的。從植物及中草藥中提取有效且毒副反應(yīng)小的成分作用于相應(yīng)靶點(diǎn)已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研發(fā)抗腫瘤藥物的新途徑。香芹酚(CV)，化學(xué)結(jié)構(gòu)為5-異丙基-2-甲基苯酚，是一種單帖酚，從許多植物中提取，包括水果，蔬菜，香料和草藥，香芹酚具有多種用途，如作為安全的添加劑用于化妝品和食品的生產(chǎn)過程中，是百里香油、香薰精油的主要成分。香芹酚已證實(shí)具有多方向的藥理作用。多項(xiàng)研究表明，CV具有多種生物學(xué)功能，如抗炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激及

3、抗腫瘤等，且對(duì)人機(jī)體組織細(xì)胞毒性較小。近年研究發(fā)現(xiàn)，香芹酚能抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，如肝癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞等，香芹酚對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的具有抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，然而香芹酚抗肺癌的機(jī)制尚未闡明。目前研究表明香芹酚對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549有顯著促進(jìn)凋亡的作用，但作用機(jī)制尚無報(bào)道。A549及NCI-H1299同屬非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，但NCI-H1299基因組DNA部分P53缺失，不能表達(dá)P53蛋白，故兩者的凋亡水平及機(jī)制有所區(qū)別，對(duì)抗癌治

4、療的敏感性及有效性亦存在差異。香芹酚針對(duì)NCI-H1299細(xì)胞功能的影響，國(guó)內(nèi)外尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。在此基礎(chǔ)上，將CV作用于非小細(xì)胞肺癌NCI-H1299細(xì)胞，選擇含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9（caspase-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制劑（TIMP-1）為作用靶點(diǎn)，觀察CV對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡侵襲作用的影響，并初步探討相關(guān)機(jī)制，為非小細(xì)胞肺癌的精準(zhǔn)治療提供新的策略。
　　方法:以不同濃度的香芹酚(0.00、20.0

5、、40.0、60.0、80.0μmol/L)處理NCI-H1299細(xì)胞后，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞活力;Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;流式細(xì)胞儀(FCM)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Quantitative Realtime-PCR及Western blot檢測(cè) caspase-9、MMP-9、TIMP-1在核酸及蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:香芹酚顯著抑制NCI-H1299細(xì)胞增殖，不表現(xiàn)為濃度依賴性及時(shí)間依賴性;