剛地弓形蟲(chóng)微線體蛋白3的高效表達(dá)及應(yīng)用.pdf

1、弓形蟲(chóng)（ToxopIasma gondii）是專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，能引起人獸共患弓形蟲(chóng)病。本實(shí)驗(yàn)以弓形蟲(chóng)RH株的基因組DNA為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增編碼去除了信號(hào)肽的MIC3基因片段，將其插入原核表達(dá)載體pGEX-4T-3上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（Eschericliacoli）中。含重組質(zhì)粒的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶融合的MIC3蛋白（rTgMIC3）。用谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B純化rTgMIC3，對(duì)其進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳和免疫

2、印跡分析鑒定。以純化的rTgMIC3做抗原，用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)人工感染剛地弓形蟲(chóng)弱毒株ME49株蟲(chóng)體的Balb/C小鼠的抗體，并追蹤單只小鼠IgG抗體的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。結(jié)果顯示：rTgMIC3分子量為61.2 kDa，與理論預(yù)測(cè)值一致；小鼠感染弓形蟲(chóng)ME49株后第七天開(kāi)始可測(cè)出特異性IgG抗體，在第三周抗體達(dá)到最高峰，然后維持在較高水平；rTgMIC3能夠被弓形蟲(chóng)的天然MIC3蛋白識(shí)別；通過(guò)間接免疫熒光抗體試驗(yàn)對(duì)弓形蟲(chóng)的

3、MIC3進(jìn)行定位，發(fā)現(xiàn)MIC3都集中在蟲(chóng)體的前端。以純化的rTgMIC3和截短的弓形蟲(chóng)表面抗原2為抗原建立的ELISA對(duì)福州某屠宰場(chǎng)的豬和羊弓形蟲(chóng)感染情況進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩種抗原對(duì)豬和羊的檢測(cè)結(jié)果一致。福州豬弓形蟲(chóng)的血清陽(yáng)性率為0.6％，羊的弓形蟲(chóng)的血清陽(yáng)性率為2.2％。此外，通過(guò)體外侵入實(shí)驗(yàn)觀察比較了抗rTgMIC3的鼠血清處理和未處理的弓形蟲(chóng)侵入宿主細(xì)胞的異同，發(fā)現(xiàn)抗rTgMIC3不能有效阻止弓形蟲(chóng)侵入宿主細(xì)胞。
　　 本實(shí)