簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多氨基酸與STAT5A基因互作對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳的調(diào)節(jié)作用及機(jī)理.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文人溶菌酶動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的研制姓名李國(guó)才申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師孫懷昌20040501II揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文克隆入自行構(gòu)建的乳腺表達(dá)載體P205C3、國(guó)外引進(jìn)的乳腺表達(dá)載體PBJ41和PBCI，獲得的重組質(zhì)粒分別命名為P205C3LYZ、PBJLYZ和PBCLYZ，經(jīng)多聚乙酰亞胺包裹后通過(guò)尾靜脈注射哺乳期小鼠，經(jīng)微球菌溶解試驗(yàn)證明三種重組載體不僅能在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，而且分泌在乳汁中的重組酶分別達(dá)到87、69、60MG／L。將基因注射小鼠撲殺，取其12種組織提取總RNA，經(jīng)DOTBLOUMG檢測(cè)證明，三種基因構(gòu)件除在乳腺中表達(dá)外，在脾、腸或腎中也有一定的異位表達(dá)。這些試驗(yàn)結(jié)果提示，自彳亍構(gòu)建的乳腺表達(dá)載體可以替代國(guó)外引進(jìn)載體進(jìn)行動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研究。用顯微注射法將重組表達(dá)載體P205C3LYZ注射入小鼠受精卵，獲得136只FO代小鼠，用PCR和SOU也EMBLOWING分別檢測(cè)到目的基因整合陽(yáng)性鼠7只2早56和4只1早36；在SOUTHERNBLOAMG檢測(cè)陽(yáng)性的4只FO鼠中，1只母鼠為HLYZ表達(dá)陰性，2只雄鼠與正常母鼠交配出生的FL代母鼠為HLYZ表達(dá)陰性，1只雄鼠的4只FL代母鼠乳汁中表達(dá)的RHLYZ分別為5M∥L、75MG／L、175M∥L和200MG／L；從FL代開(kāi)始，對(duì)表達(dá)陽(yáng)性鼠進(jìn)行兄妹交配，經(jīng)PCR檢測(cè)證明轉(zhuǎn)基因的遺傳符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律；目前轉(zhuǎn)基因純合鼠已傳到F7代，每代母鼠乳汁中的RHLYZ表達(dá)量基本穩(wěn)定，最高表達(dá)垂達(dá)750MG／L；將其中的3只母鼠撲殺，取其組織制各細(xì)胞裂解液和總RNA，經(jīng)微球菌溶解試驗(yàn)和DMNOTTING檢測(cè)證明，目的基因除在乳腺表達(dá)外，在脾臟和小腸也有一定的異位表達(dá)。取轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠的乳汁進(jìn)行WESTERNBLOAING分析，結(jié)果顯示乳中表達(dá)的RHLYZ與人初乳中天然的LYZ具有相同的分子量；將適當(dāng)稀釋的轉(zhuǎn)基因小鼠乳汁和人初乳在60℃、72℃、85℃、100℃水浴中孵育1、3、5、10、15、20、30MIN，經(jīng)微球菌溶解試驗(yàn)證明，RB_LYZ與天然HLYZ具有相似的熱穩(wěn)定性；將乳樣的PH調(diào)節(jié)為2、4、5、74、9、10，37℃作用30MIN后進(jìn)行酶活性測(cè)定，結(jié)果表明RHLYZ與天然HLYZ的PH活性范圍相近；將不同的金屬離子加入乳樣中，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定，結(jié)果證明RHLYZ和正常HLYZ對(duì)所試金屬離子具有相似的敏感性；通過(guò)瓊脂平板擴(kuò)散法檢測(cè)不同種類的細(xì)菌對(duì)RHLYZ和HLYZ的敏感性，檢出的敏感菌在37℃培養(yǎng)過(guò)程中每隔30MIN取定量混合液進(jìn)行瓊脂平板菌落計(jì)數(shù)和繪制抑菌曲線結(jié)果表明表達(dá)的RHLYZ與正常HLYZ具有相似的抑菌活性。用重組載體P205C3LYZ注射山羊受精卵，第一批試驗(yàn)使用的供、受體羊分別

簡(jiǎn)介：西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文人瘦蛋白乳腺表達(dá)載體的構(gòu)建及細(xì)胞表達(dá)的初步研究姓名劉金龍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師張涌20040601人瘦蛋白乳腺表達(dá)載體的構(gòu)建及細(xì)胞表達(dá)的初步研究7細(xì)胞表達(dá)的初步檢測(cè)表明，以奶牛13一酪蛋白基因調(diào)控成分作為指導(dǎo)序列，構(gòu)建的人瘦蛋白乳腺表達(dá)載體能夠通過(guò)脂質(zhì)體法成功轉(zhuǎn)染乳腺上皮細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)了報(bào)告基因的表達(dá)，證明了表達(dá)載體的合理性和使用價(jià)值。關(guān)鍵詞奶牛B一酪蛋白基因；克?。蝗诤?；人瘦蛋白表達(dá)載體；細(xì)胞表達(dá)

簡(jiǎn)介：內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛乳腺炎中藥復(fù)配物的研制姓名盧慧斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)物理化學(xué)指導(dǎo)教師牛雪平20040515內(nèi)蒙古大學(xué)額士學(xué)位論文前宙奶牛乳腺炎MASTITIS是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最常見(jiàn)的疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有2．2億頭奶牛，其中1／3患褥各靜類型載魏腺炎“1，每每因鼗瘸面弓L起的牛奶損失迭380萬(wàn)噸”’。奶牛乳腺炎已經(jīng)嚴(yán)重蠡壘影響至世界乳她的發(fā)展；該瘸所帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失氫舔普醫(yī)酶治療、牛奶的廢棄、勞動(dòng)量的增加、奶產(chǎn)量的下降、母牛豳泌乳機(jī)能喪失而過(guò)早地被淘汰、奶品質(zhì)的下降等。據(jù)國(guó)鄉(xiāng)}報(bào)道，奶牛乳腺炎的發(fā)病率約為2550％。在美國(guó)，每年100萬(wàn)頭泌乳奶牛約50％患旃乳腺炎，由戤造成酶經(jīng)濟(jì)損失達(dá)20億熒元。據(jù)JE窳、上海、廣州、西安、蘭州等城市的調(diào)斑，乳腺炎譙乳牛場(chǎng)中的發(fā)病率達(dá)20一70％。3。它給我國(guó)造成的經(jīng)濟(jì)損失每年達(dá)1．35億元“1。在畜數(shù)業(yè)先支柱產(chǎn)業(yè)之一的內(nèi)蒙古她聯(lián)奶牛乳腺炎發(fā)病搴普遍鑣搿，李云章等予2002年對(duì)呼和浩特地區(qū)的奶牛乳腺炎發(fā)病情況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)采襲明，臨床濺巍腺炎平均發(fā)病率36％，在泌乳期奶牛隱性乳腺炎平均陽(yáng)性檢出率為73％，乳區(qū)陽(yáng)性平均檢出率為45％。1。奶牛乳腺炎不僅影響勰牛豹產(chǎn)奶量，造戲經(jīng)濟(jì)上的凝失，更重要靜是影響牛奶齙晶矮，危害入類的健康。其防治問(wèn)題穗閏益為入們所關(guān)注。奶牛乳腺炎是其乳腺受到病原微生物感染而引起的一種炎癥，根據(jù)瘸原體的不同，可分為卡媳瞧、漿液性、紓維蛋白挫、純菰牲等乳腺炎，多發(fā)予泌乳期或產(chǎn)鼷囂始泌乳階段，影響泌乳豐幾能和產(chǎn)巍熬，有時(shí)甚至使乳房失去泌魏機(jī)能。發(fā)瘸籍病原體可從一個(gè)乳區(qū)傳到勇一個(gè)乳醫(yī)，也可在牛群中傳染O’”。逸今為止，融發(fā)現(xiàn)的奶牛乳腺炎致病菌迭80多種，大體可分為濺類溯一類是接觸性黃染瘸綴鐓生物，穗子乳豫并邋遺擠奶工或揍嬈楓傳播，霞搓鏈球菌、金黃色葡萄球菌和支原體；另一類是環(huán)境性病原俸，包括大腸杼薅、沙雷氏蘸、綠膿桿菌以及其它革蘭氏陰性菌，此類病原菌常寄艇在牛體及周圍環(huán)境中，通過(guò)進(jìn)入乳池引起乳豫豹感縶。在上述瘸琢螢中，以鏈球菌、金麓藏露大揚(yáng)杼贛強(qiáng)主。據(jù)牛黥艨炎病原魏分離鑒定的研究表明，金藹菌和鏈球菌約占總襝出率的74％。1，國(guó)內(nèi)約占90％N“。根據(jù)其致病原因，通常的治療措施為抗菌消炎、改善環(huán)境、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的抵抗力。近些年，戇善穆技豹發(fā)矮以及對(duì)該瘸豹深入研究，在治療方蕊取得了顯萋瓣成果，出現(xiàn)了縭照因子法、免疫遺傳選擇法等先進(jìn)的免疫控制投術(shù)方法玨11。德這些方法難予推廣且費(fèi)用較高，所以現(xiàn)在在治療方瑚仍以便于操作、療效顯蓍的化學(xué)藥物治療為主。常用的化學(xué)藥物有抗生素、磋較類蓊甥秘矮港醞類藥物麓，其中抗生綮終為治療船牛翼稼炎鮑烹要藥物，置竅半個(gè)2

簡(jiǎn)介：奶牛乳房炎多聯(lián)疫苗的研制研究生王贊指導(dǎo)教師靳亞平副教授摘要奶牛乳房炎是奶牛的一種多發(fā)病，特別是隱性乳房炎，它造成的經(jīng)濟(jì)損失非常巨大。盡管各國(guó)獸醫(yī)工作者多年來(lái)對(duì)該病的預(yù)防與治療研究付出了極大的努力，但仍無(wú)滿意的結(jié)果，至今仍以抗生素治療為主。由于抗生素殘留和耐藥菌株的出現(xiàn)造成奶品質(zhì)下降和治療困難，所以迫切需要進(jìn)行新的預(yù)防與治療方法的研究和應(yīng)用。各國(guó)研究證實(shí)乳房炎重在預(yù)防。而目前只有大腸桿菌的研究取得成功。J5菌苗對(duì)于G一桿菌引起的乳房炎保護(hù)率在85以上。但有關(guān)G菌苗少見(jiàn)報(bào)道，而在我國(guó)，奶牛隱性乳房炎的主要病原菌即是G菌，因此，對(duì)于G菌苗的研究具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究在總結(jié)國(guó)內(nèi)外研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合乳腺生理研究進(jìn)展，進(jìn)一步通過(guò)分離病原菌，調(diào)查西安、楊凌等地奶牛乳房炎的主要病原菌探討不同病原菌對(duì)乳腺局部免疫的影響，研制一種疫苗用于預(yù)防和治療乳腺炎。主要內(nèi)容包1休細(xì)胞計(jì)數(shù)方法的改進(jìn)由于乳汁中體細(xì)胞的變化與炎性反應(yīng)密切相關(guān)，體細(xì)胞計(jì)數(shù)SCC被好多國(guó)家認(rèn)為是監(jiān)控乳汁質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)方法。但由于乳汁中脂肪的影響，使得SCC常用方法不好操作，尤其無(wú)法對(duì)初乳和泌乳期末乳汁中體細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。我們經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期摸索，總結(jié)了一套較好的方法，并且用本方法在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了一些新的現(xiàn)象，2病原菌的分離調(diào)查從2002年10月起，應(yīng)用LMT及體細(xì)胞計(jì)數(shù)SCC方法，從西安及其周邊地區(qū)1000頭奶牛中抽取了48頭共184個(gè)乳區(qū)，進(jìn)行了奶牛隱性乳腺炎的調(diào)查及病原菌的分離鑒定。結(jié)果西安及其周邊地區(qū)患隱性乳腺炎奶牛占總頭數(shù)的667，患隱性乳腺炎乳區(qū)占總?cè)閰^(qū)的354?個(gè)乳區(qū)全陽(yáng)性者占152。共分出菌67株，其中葡萄球菌41株。鏈球菌20株，二者共61株，占總檢出菌91。值得注意的是表皮葡萄球菌及肺炎鏈球菌占總檢出菌的比例較大，分別占到167和83。而未分離到大腸桿菌。由葡萄球菌造成患隱性乳房炎的?？偱?shù)458。鏈球菌造成患隱性乳房炎的?？偱?shù)333，二者共占791。其中分得一株非常典型的金黃色葡萄球菌，鮮血瓊脂平板培養(yǎng)24H后出現(xiàn)明顯的溶血環(huán)，寬度達(dá)8MM左右，呈雙環(huán)。里圈為約4MM的完全溶血環(huán)，外圈為約3MM的不完全溶血環(huán)，40C冰箱過(guò)夜后出現(xiàn)第三圈完全溶血環(huán)，寬約152MM左右。同時(shí)分出三株G芽抱桿菌，經(jīng)鑒定初步認(rèn)為其為蘇云命芽抱桿菌，蘇云金芽抱桿菌引起奶牛乳腺炎在國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)報(bào)道，該菌培養(yǎng)特性及染色鏡檢又與蠟樣芽抱桿菌極為相似。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證明該菌經(jīng)腹腔注入小鼠，其毒素可致死小鼠，同時(shí)證明該菌具有很強(qiáng)毒素DEVELOPMENTOFBOVINESUBCLINICALMASTITISMULTIVACCINEPOSTGRADUATEWANGYUNSUPERVISORASSOCIATEPROFESSORJINYAPINGABSTRACTBOVINEMASTITISESPECIALLYSUBCLINICALMASTITISISHIGHFREQUENCYDISEASEINDAIRYWHICHCANCAUSEHEAVEECONOMICALLOSSALOUTHRESEARCHERWORKHARDALLOVERTHEWORLDTHEREISNOGOODMETHODTOCONTROLITTHEMOSTCONTROLMETHODISUSINGANTIBIOTICSITISNECESSARYTOCREATENEWMETHODINORDERTOCONTROLMASTITISBECAUSEANTIBIOTICSNOTONLYHAVEBYEFFECTALSOITCANDECREASEMILKQUALITYCERTAINLYVACCINEPREVENTIONISTHEBESTWAYFORCONTROLLINGBUTTILLTODAYONLYECOLIFORMJ5VACCINEISSUCCESSFULLYDEVELOPMENTITSPRETECTIONRATIOISMORETHAN85BUTTHEDOMINANTPATHOGENSAREG十GERMSINOURCOUNTRYSOITISIMPORTANTTODEVELOPMENTGGERMSVACCINEOURGOALISTOINVESTIGATEANDISOLATEDOMINANTPATHOGENSOFMASTITISINTHEAREANEARBYXIANANDDEVELOPMENTGGERMSVACCINEBASISONTHOSEWORKALLOVERTHEWORLDSCCISTHOUGHTASASTANDARDMETHODINMONITORINGMILKQUALITYINMANYCOUNTRIESBECAUSEITISCLOSELYRELATEDTOIMITHEREGULARMETHODISHARDTOPRACTICEOWINGTOFATINMILKESPECIALLYTOCOLOSTRUMSANDENDINGMILKTHISREPORTINTRODUCEANEWMETHODWHICHISINDUCEDFROMTHEREGULARMETHODTHISNEWMETHODISSIMPLEANDCONVENIENTFORPRACTISEBYUSINGTHISNEWMETHODWEFOUNDSOMEFACTSTHATWERENOTREPORTEDINTHEPAST1MAKEPROGRESSINSCCMETHODSCCISTHOUGHTASASTANDARDMETHODINMONITORINGMILKQUALITYINMANYCOUNTRIESBECAUSEITISCLOSELYRELATEDTOIMITHEREGULARMETHODISHARDTOPRACTICEOWINGTOFATINMILKESPECIALLYTOCOLOSTRUMSANDENDINGMILKTHISREPORTINTRODUCEANEWMETHODWHICHISINDUCEDFROMTHEREGULARMETHODTHISNEWMETHODISSIMPLEANDCONVENIENTFORPRACTISEBYUSINGTHISNEWMETHODWEFOUNDSOMEFACTSTHATWERENOTREPORTEDINTHEPAST2ISOLATIONANDIDENTIFICATIONOFBOVINESUBCLINICMASTITISPATHOGENSWEHAVEINVESTIGATEDINFECTIONRATIOOFDAIRYSUBCLINICALMASTITISINXIANAREAOFCHINASINCEOCT2002WEGOT48SAMPLESFROM1000COWSANDDIAGNOSEDTHOSETOTAL184QUARTERSBYLMTANDSCCTHERESULTSREVEALEDCOWINFECTEDSUBCLINICALMASTITISTOTALTO

簡(jiǎn)介：摘要為研究牛乳腺上皮細(xì)胞BMEC增殖和分化特性及為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物創(chuàng)造條件，建立了適合BMEC體外增殖的培養(yǎng)體系。基礎(chǔ)培養(yǎng)液用DMEMF12，含胎牛血清100ML，青霉素005GL及鏈霉素005GL。在此基礎(chǔ)上，以不同的組合分別添加胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉LOMLL170一雌二醇5MGL氫化可的松5MGL，表皮生長(zhǎng)因子20UGL配成AAZAA4種不同的培養(yǎng)液。從細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞群體倍增時(shí)間、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線等方面考察了不同生長(zhǎng)因子對(duì)BMEC的促生長(zhǎng)作用。通過(guò)有效的細(xì)胞培養(yǎng)方法獲得牛乳腺上皮細(xì)胞系，系統(tǒng)觀察了乳腺上皮細(xì)胞的長(zhǎng)出、貼壁、聚集、遷移、分裂、分化、調(diào)亡等一系列形態(tài)變化。其結(jié)果如下1胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉ITS是原代培養(yǎng)和傳代BMEC所必需的表皮生長(zhǎng)因子EGF可以明顯促進(jìn)BMEC的生長(zhǎng)增殖。在該培養(yǎng)體系中，BMEC的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)均不需要生長(zhǎng)基質(zhì)的作用。2細(xì)胞生長(zhǎng)曲線表明，傳代培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞在接種后有2D的滯留期，之后為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，持續(xù)4D左右，第7D進(jìn)入平臺(tái)期。3BMEC的適宜凍存液為DMEMFZ，添加30?S和10的二甲基亞諷DMSO，適宜的冷凍降溫方法是以一10CMIN的速度從4℃降至一250C30MIN后投入液氮進(jìn)行低溫保存。4用含胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉、氫化可的松、孕羊血清的DMEMF12做為細(xì)胞分化誘導(dǎo)液，誘導(dǎo)BMEC分化，用間接ELISA法進(jìn)行BMEC的酪蛋白分泌的檢測(cè)。結(jié)果表明，培養(yǎng)的是牛乳腺上皮細(xì)胞，該細(xì)胞系保持了分泌酪蛋白的功能。5BMEC和成纖維細(xì)胞混生時(shí)分區(qū)生長(zhǎng)，界限明顯。傳代的乳腺上皮細(xì)胞呈島嶼狀聚集生長(zhǎng)?？梢孕纬删W(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，圓頂形結(jié)構(gòu)。細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，核仁24枚。6雌激素具有誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的BMEC發(fā)生癌變的可能。BMEC出現(xiàn)多核，多核仁現(xiàn)象，但細(xì)胞之間仍表現(xiàn)一定的接觸性抑制。7，多次傳代后的BMEC含不同的細(xì)胞類型。關(guān)鍵詞牛，乳腺上皮細(xì)胞，體外培養(yǎng)，增殖，分化獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，并符合關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，如果違犯此規(guī)定，一切后果均由本人承擔(dān)盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材桿與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的鑄到可貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說(shuō)明并表示了謝憊研究生T姍T時(shí)間WL年6月，刀日導(dǎo)師承諾本人承諾我的研究生斤呈交的學(xué)位論文是在我指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，屬于我現(xiàn)崗職務(wù)的成果，并符合關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定如果違犯關(guān)于規(guī)范西能農(nóng)林科枝大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師責(zé)任，導(dǎo)師簽一終TS時(shí)間LOW年了月護(hù)日關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明任何收存和保管本論文各種版本的單位和個(gè)人未經(jīng)本論文作者或?qū)熓跈?quán)，不得對(duì)本論文進(jìn)行復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權(quán)益的行為，否則，將追究并承擔(dān)法律責(zé)任經(jīng)本論文作者及其導(dǎo)師同意，授權(quán)西北農(nóng)林科技大學(xué)可向主管上級(jí)有關(guān)單位送交論文的紙質(zhì)件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用復(fù)印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文研究生簽名導(dǎo)師簽名4牛捧臨時(shí)間W八I月，時(shí)間RA尹年了月戶聲

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文犬乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)因子及細(xì)胞系性狀解析姓名崔文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉云20070620Ⅱ狂ANAIYSISOFME磷ST婭CFACTIRSANDCELLLINECHARACTERS0NTHECA卜心IE僵A心僵ARYGIANDTI瓜們IRABSTRACTINVETERINARYCLINICSCANINEBREASTTUMORWASAGOMNLONTUNLORDISEASEINFEMALEDOGSITSHAREDMANYSIMILARITIESWITHTHEBREASTTUMORINHUMANS，SUCH齬THEETIOLOGYTHECHARACTERISTICSOFTUMORTISSUETHETHERAPEUTICINMEDICINE，THEMAMMECTOMYANDTHEPROGNOSISTHEREFORE，CANINEOFSPONTANEOUSBREASTTUMORHADBECOMETHEMOSTEXCELLENTMODELSFORHUMANSTUDYINGBREASTTUMORDISEASEN圮PATHOHISTOLOGYMETHODTHEIMMTMOHISTOCHEMISTRYMETHODANDTHECYTOBIOLOGYTECHNIQUESWEREEMPLOYEDINTHEEXPERIMENTTOCARRYOUTTHEINVESTIGATIONS∞THESPONTANEOUSCANINEBREASTTNMORANDTHESPONTANEOUSEELLLINESINORDERTOPROVIDETHEDIAGNOSISESANDTHETREATMENTBASISESTOGANINEBREASTTULTLORITWASADOPTEDINTHEEXPERIMENTTHATFOUREELLLINESOFCHMPCHMRNCIPPANDCIPMWHICHWEREISOLATEDANDCULTUREDFROMTHEPRIMARYLESIONSANDTHEMETASTATICLESIOMINTHESPONTANEOUSCASESWITHBREASTTUMORSNLCRESEARCHOBJECTSWERESELECTEDFROMTHEEELLLINESWITHABOVE120GENERATIONSANDSTEADYGROWTHTRAITSN圮CELLSWERECULTUREDWITHTHEDIGESTIONMETHODANDTHERESULTSINDICATEDTHATTHEGROWTHCURVEACCORDEDWITH’‘‘S”SHAPEANDTHEDOUBLINGTIMERESPECTIVELYIS213H353H423LL491HNLECELL’SMORPHOUSWASNOTSIGNIFICANTLYDEVIATEDAFTERHIGHPASSAGESUSINGTHEMTTEXAMINATIONMETHODANDTHESOFTAGARAGARCULTURECOMPARATIVEANALYSISINDICATEDTHATCHMP，CHMMWEREBETTERTHANCIPP，CIPMINTHECOLLVIGORANDINTHEINCREASINGABILITYN地RESULTSINDICATEDTHATTHEREWERESIGNIFICANTDIFFERENCESONTHEEELLBIOLOGICALCHARACTERSINDIFFERENTCELLLINESOURCES10CASESOFSURGICALOPERATIONSEXCISEDDOUBTFULCANINEBREASTTUMORSPECIMENSW91“ECLASSIFIEDBYTHEPATHOHISTOLOGICALOBSERVATIONTHEIMMUNOHISTOCHEMISTRYMETHODWASUSEDINTHEEXPERIMENTWHICHUSEDTWODIFFERENTKINDSOFRABBITANTIMOUSEPOLYCLONALANTIBODYTODETECTSPECIMENSANDCOMPAREANTIBODYEXPRESSIONSANDPATHOLOGYTYPES11LERESULTSINDICATEDTHATMALIGNANTBREASTTUMORWASTO50％INWHICHMAMMARYINTITMTINGDUCTALCARCINOMAWASTO30％BENIGNTUMORWAST030％INWHICHNONBREASTTUMOR20％11垃RESULTSSHOWEDTHATTHERABBITANTIMOUSEPOLYCLONALANTIBODYP53COULDIL

簡(jiǎn)介：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛乳腺炎三聯(lián)苗田間試驗(yàn)及牛源無(wú)乳鏈球菌CAMP因子的克隆表達(dá)姓名王向柳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師阿合買提買買提20080601ABSTRACTAPPROPRIATEADJUNVANTWASSELECTEDTOMAKETRIPLEINACTIVATEDVACCINEAGAINSTMASTIFFSOFDAIRYCOWSANDTHENEWVACCINEWASTESTEDWITHSTABILITYSTERILITYANDSAFETYTHERESULTSSHOWEDTHEVACCINEAGAINSTMASTITISOFCOWSEMULSIFIEDWITHOILADJUVANTWASSTEADYGERMFREEANDSAFEINTHEMOUSETESTMODESEROLOGYTESTANDCHALLENGETESTWEREPROCESSEDAFTERTHREETIMESIMMUNIZATIONWITHTHENEWVACCINE，THERESULTSSHOWEDAFTERTHREETIMESINOCULATIONWITHTHENEWVACCINEHI曲SPECIFICANTIBODYTITERSCOULDBEELICITEDANDEFFECTIVEPROTECTIONAGAINSTHOMOGENATEANDHETEROGENATESAULELLSECOLISAGALACTIAECOULDBEGAINEDTOEVALUATETHEEFFECTOFTHENEWINACTIVATEDVACCINE，F(xiàn)IELDTRIALWASCARDEDONTHEWHOLEBACTERIALCELLSOFSAUREUSECOLISAGALACTIAEANTIGENBASEDINDIRECTELISAWASESTABLISHEDTODETECTTHEANTIBODYTITERSOFSERAOFDAIRYCOWSAFTER3TIMESVACCINATION，THEANTIBODYTITERSWEREEVALUATED，ANDTHERESULTSINDICATEDTHATTHEANTIBODYFITERSOFSERAOFTESTEDCOWSWEREDRAMATICALLYHIGHERTHANTHOSEOFCONTROLLEDCOWSRESPECTIVELYFROMTHEBACTERICIDALACTIVITYOFMILKWHEYINVITRO，ITCOULDBECONCLUDEDTHATINTHEMILKWHEYTHEHI曲ERSPECIFICANTIBODYTITERISATTAINED，THEHIGHERBACTERICIDALACTIVITYISEXPECTEDCAMPFACTORGENEWASCLONEDFROMGENOMEDNAOFSTREPTOCOCCUSAGALACTIAEBYPC艮ANDTHEPCRPRODUCTWASINSERTEDINTOVECTORPMDL8TSEQUENCEANALYSISSHOWEDTHATTHESTREPTOCOCCUSAGALACTIAECAMPGENECFBWASCOMPOSEDOF768NUCLEOTIDESENCODINGAMATUREPOLYPEPTIDE255AMINOACIDSCOMPAREDTOOTHERSTREPTOCOCCUSAGALACTIAECAMPGENE∞THATREPORTEDSHAREDTHEIDENTITYOF984％THEPOSITIVECOLONYWHICHWEREIDENTIFIEDBYDIGESTIONANDPERSHOWEDTHATTHERECOMBINANTPLASMIDPET32A／∞WASCONSTRUCTEDSUCCESSFULLYSDSPAGERESULTSHOWEDTHATRECOMBINANTPROTEIN，WITHAMOLECULARWEIGHTOF48KD，WASEXPRESSEDININCLUSIONBODIESINECOLIANDTHERECOMBINANTPROTEINACCOUNTEDFOR527％OFTHETOTALPROTEINSTHISSTUDYPROVIDESCONDITIONSFORTHERESEARCHOFPATHOGENICANDIMMUNEMECHANISMANDVACCINEDESIGNKEYWORDSTRIPLEINACTIVATEDVACCINE，F(xiàn)IELDTRIAINDIRECTELISA，CAMPFACTORCLONINGANDEXPRESSIONII

簡(jiǎn)介：西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文7，12二甲基苯蒽（DMBA）體外誘導(dǎo)山羊乳腺上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)化姓名孫蘇軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師張涌20050501生芏塾壁圭鏖塑墮竺撞鲞望壁些一一TRANSLATIONOFGOATMAMMARYEPITHELIALCELLBY9，10一DIMETHYLI，2BENZANTHRACENEINVITROABSTRACTTHEREAREMANYREPORTSONESTABLISHMENTOFGOATMAMMARYEPITHELIALCELLLINEANDDESCRIPTIONOFITSCHARACTERSINVITROTHEEXPERIMENTAIMS10ESTABLISHAGOALMAMMARYCELLLINEUSINGTWOSTEPCARCINOGENESIS9，10DIMETHYL1，2一BENZANTHRACENEDMBAASTHECARCINOGENAND12OTETRA6ECANOYLPHORBO13AEE切AE仃P(guān)AASTHEPROMOTER，THEMETHODSOFCELLFEULGENDYEINGANDMEASURINGDNACONTENTOFCELLWEREALSOSTUDIEDTHERESULTSASFOLLOWS1PRIMARYCULTUREOFGOATMAMMARYGLANDCELLSCOULDBEDERIVEDBYTISSUECULTUREANDENZYMESDIGESTF弛FOBLASTANDEPITHELIALCELLSCOULDBEPINEDACCORDING42THEIRDIFFERENTSENSIBILITYTOTRYPSINCOMPLEXCULTURESTREATEDBY025％TRYPSININHANKS’AT37“CFIRSTLYTHEDISPERSEDCELLSWEREMAINLYFFBROHLASTS，THEPUREDMAMMARYEPITHELIALCELLCOUL4BEOBTAINEDA舭R23PASSAGES2USINGADDED100ML／LDMSOTODMEM／F12AND10％FCSASCRYOPROTECTANTS，蓼OUPTHETISSUESTOTHINEO3MMO3枷5MMAND05M0咖一THERECOVEREDTIMEWERE0、6AND12HOURSTHESTUDYSHOWEDUSINGADDED100RNL／LDMSOTODMEM／F12ASCRYOPROTECTANTS，KEEPINGTHESIZEOFTISSUEFRAGMENTLESSTHAN03MMAND6HOURS’EQURI_HRAT20NBEFOREFREEZINGHADBETTEREFFECTOUTHEFREEZINGOFGOATMAMMARYTISSUE3THEPURIFIEDGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSKEPTNORMALCHARACTERISTICSUNTILNINTHPASSAGESMAJORITYOFTHECELLSWERESHORTSHUTTLELIKEORGUBOIDALWHICHLOOKEDLIKEBEEBIVE；PARTOFCELLSLOOKEDLIKEBIGROUNDFLATCAKES；PARTOFTHECELLSWERELONGSUPEMATANLPROTEINSOFGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSWERESEPARATEDBYSDSPAGEANDFOUNDTHEREHADTHREESTRIPESINACCORDANCEWITHTHREESTANDARDPROTEINSTRIPESTHERESULTSPROVEDTHATTHECULTUREDEPITHELIALCELLSINL矗TROCOULDEXPRESSGOATCASEIN，4EXPOSEDTHECELLSFROMTISSUECULTUREANDENZYMEDIGESTIONTODMEM／F12CONTAINED5UG／ML，10UG／MLAND15UG／MLDMBAFOR36H，24HAND12HRESPECTIVELYTHENCULTUREDTHECELLSINDMEM／F12CONTAINED25NG／MLTPAFORTWOWEEKSTHERESULTSHOWEDTHATTHEGROUPCONTAINED15UG／MLDMBAWASALMOSTDEAD；THEGROUPCOMALNED5UG／ML

簡(jiǎn)介：西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文人TPA指形區(qū)缺失體乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建及細(xì)胞表達(dá)研究姓名楊瑞鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師張涌20050601腺特異性表達(dá)載體PBEBT和PHEBT。目的是通過(guò)核基質(zhì)附著區(qū)克服位置效應(yīng)，轉(zhuǎn)染后可獲得高效表達(dá)株。7采用分段PCR法，分三段克隆了長(zhǎng)約97KB的牛B一酪蛋白基因序列。包括17KB的5側(cè)翼序列、前八個(gè)外顯子及第八個(gè)內(nèi)含子的部分序列。經(jīng)NCBIBLASLN軟件進(jìn)行同源性序列分析，結(jié)果表明，所克隆的片段與奶牛CSN2全基因?qū)?yīng)區(qū)段的同源性分別為99O％、980％和980％。所克隆的三個(gè)片段加上實(shí)驗(yàn)室已有的600BP加尾信號(hào)，包含了完整的奶牛B一酪蛋白基因全序列，以此為基礎(chǔ)可構(gòu)建高效的乳腺特異性表達(dá)載體。關(guān)鍵詞TPA指形區(qū)缺失體，乳腺特異性表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染，牛乳腺核基質(zhì)附著區(qū)，牛0一酪蛋白

簡(jiǎn)介：Y774885分類號(hào)密級(jí)單位代碼10019學(xué)號(hào)26020飛嚼差遺夭等’學(xué)位論文復(fù)方蜂膠擦劑治療奶牛乳腺炎的研究ATHERAPEUTICALSTUDAYONDAIRYCATTLEMASTITISAPPLYINGOFCOMPOSITIVEPROPLISPREPARATIONEXTERNALLY研究生塞劍墓指導(dǎo)教師壺篷明麴援合作指導(dǎo)教師申請(qǐng)學(xué)位類別?？镓綄I(yè)領(lǐng)域名稱直鏖獸醫(yī)研究方向動(dòng)物痊痘隨渲所在學(xué)院動(dòng)物醫(yī)堂暄2005年5月ABSTRACTSTHECOMMPOUNDPROPLISSOLUTIONWITHGOODANTIBACTERIAACTION，STRENGTHYSKINPENETRATION，NOTOXICANDHIGHSTABILIZINGWASPREPAREDINTHISTESTTHETESTRESULTSSHOWEDTHATTHEPREPARATIONWASBETTERTHANHIGHLYSENSITIVEANTIBIOTICSINTREATINGNEGATIVEMASTITISOFDAIRYCATTLEPO05BUTITWASWORSETHANSENSITIVEANTIBIOTICSINCURINGCOW’SCLINICALMASTITISP001WHENITCOUSEDWITHANTIBIOTICS，THECLINICECLCURERESULTCOULDENHANCEDANDTHEAVERAGETREATMENTDURATIONCOULDSHORTENSIGNIFICANTLYPO01THETESTINDICATEDTHATTHEPREPARATIONCOULDBEUSEDINTREATINGNEGATIVEANDSUBCLINICALMASTITISOFDAIRYCAHLEANDTHETREATMENTMETHODOWEDTHECHARACTERISTICSOFHI曲CURERATEANDNONDRUG’EXISTIONTHECOMBINEDAPPLICATIONOFCHINESEMEDICINEANDCHEMISTRICALDRUGMUSTBEUSEDINTHETREATMENTOFCLINICALMASTITISOFDIARYCATTLETHEABOVERESULTSWILLHELPUSHOWTOEXPLORATETHENATURALAMIOTICSPROPLISKEYWORDSCOMPOUNDPROPLISPREPARATION，MASTIFFS，DAIRYCATTLE，CUREEFFECTH

簡(jiǎn)介：9T74GG西池農(nóng)林針捉大學(xué)2006屆攻讀碩士學(xué)住研究生學(xué)位畢業(yè)論文人胰島素基因乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建學(xué)科專業(yè)蝤壓量匿堂研究方向』絲絲鲴鮭旦墅一研究生』L艷』L一指導(dǎo)教師』LJ豇童■L完成時(shí)陽(yáng)JGQ鰻生旦FOQCONSTRUCTIONOFMAⅣMARYGLANDSPECIFICVECTORFORH1『LⅥANINSULINGENEABSTRACTINORDERTOCONSTRUCTAHIGHEFFICIENTMAMMARYGLANDSPECIFICVECTORFORUSINGMAMMARYGLANDBIOREACTORTOPRODUCEHUMANINSULIN，USINGLONGPCRTECHNOLOGYWECLONEDTHE5’REGULATIONREGIONOFGOATBCASEINGENECSN2ANDHUMANINSULINGENEINS，BASEONTHEHUMANINSULINGENEWECLONED，WECONSTRUCTEDAEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORPBLGFPWHICHINCLUDINGTHE5’AND3’REGULATIONREGIONOFBOVINEBCASEINTHEEXPRESSIONSEQUENCEOFHUNANINSULINGENE，ANDTHEREPORTGENEEGFPTHESERESULTSWEREEXPECTEDTOLAYFOUNDATIONFURTHEPRODUCTIONOFHUMANINSULINUSINGANIMALMAMMARYGLANDBIOREACTORTHERESULTSOFRESEARCHISASFOLLOWING1HUMANINSULINGENEWASCLONEDFROMHUMANGENOMEWITLLLONGPCR。WHICHWAS1624BPANDCOMPRISEDINTACTCODINGREGIONSSEQUENCEANALYSISDEMONSTRATEDTHATITSHOMOLOGYWITHTHERELATIVEREGIONOFHUMANINSULINGENEONGENBANKWAS99％WITHINTHESEQUENCEWECLONED，THREESITEMUTATIONSOCCURREDWHICHCOULDNOTALTERPROTEIN’SFUNCTION2APAIROFPRIMERWASDESIGNEDACCORDINGTOMULTIPLECLONINGSITSOFPEGFPC1VECTORANDTHERESTRICTIONENDONUCLEASESITEOFTHE13CASEINPROMOTERSEQUENCETHEHUMANINSULINWASADDEDRESTFICTIONENDONUCLEASENHEIANDBAMHISITE3USINGTHESTRATEGYOFDIRECTIONALCLONEAFTERDOUBLEDIGESTIONBYDIFFERENTENDONUCLEASES，WHILEUTILIZINGAEUKARYOTICVECTORPEGFPC1，THENONFUSIONTYPEOFMAMMARYGLANDEXPRESSIONVECTORPBIGFPFORHUMANINSULINWASCONSTRUCTED，WHICHALSOINCLUDEDANTIBIOTICSGENEKANA／NEOANDREPORTGENEEGFP4TWOFRAGMENTSOFGOAT13CASEINGONE57REGULATIONREGIONWASCLONEDBYLONGPC＆USINGWHICHWECONSTRUCTTHEVECTORPGGC67GFE5THEPLASMIDPGGC67一GFPWASTRANSFECTEDINTOMAMMARYEPITHELIALCELLSCULTUREDINVITROUSINGLIPOSOMEAFTERPRELIMINARYSCREENINGBYG418，THEEXPRESSIONOFREPORTGENEEGFPMAINLYINCYTOPLASMWASOBSERVEDUNDERFLUOROSCOPEKEYWORDSHUMANINSULINGENE，CLONE，MAMMARYGLANDSPECIFICEXPRESSIONVECTORGOAT13一CASEINGENE5’REGULATIONREGION，TRANSFECTION

簡(jiǎn)介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NONOCODE10224NO1209124DISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREE14337REGULATESMILKPROTEINSYNTHESISANDCELLPROLIFERATIONINDAIRYCOWMAMMARYEPITHELIALCELLSCANDIDATEYUCUIPINGSUPERVISORPROFESSORGAOXUEJUNDEGREECATEGORYDOCTOROFSCIENCECOLLEGECOLLEGEOFLIFESCIENCEFIRSTLEVELDISCIPLINEBIOLOGYSECONDLEVELDISCIPLINEBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYHARBINCHINAJUNE2015東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)博士學(xué)位論文2521433丫與ELFIAX、RPS7和ELF5互作的WB驗(yàn)證232531433Y與ELFLAX、RPS7和ELF5的共定位分析23254FRET分析1433丫的相互作用蛋白23255WB檢測(cè)MET對(duì)互作蛋白表達(dá)的影響24256IF檢測(cè)MET對(duì)互作蛋白表達(dá)的影響一24257WB檢測(cè)1433Y過(guò)表達(dá)對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響一24258IF檢測(cè)1433丫過(guò)表達(dá)對(duì)互作蛋白表達(dá)的影響24259WB檢測(cè)1433Y抑制對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響一252510IF檢測(cè)1433Y抑制對(duì)互作蛋白表達(dá)的影響～25251L互作蛋白過(guò)表達(dá)對(duì)翻譯和細(xì)胞增殖的影響2526數(shù)據(jù)分析253結(jié)果與分析2731乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)純化與鑒定2732添加MET對(duì)1433T表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響一283。21WB檢測(cè)MET對(duì)1433丫和P一酪蛋白表達(dá)的影響28322IF檢測(cè)添加MET對(duì)14。33丫表達(dá)的影響29323添加MET對(duì)細(xì)胞增殖的影響303。31433丫過(guò)表達(dá)對(duì)泌乳信號(hào)通路及細(xì)胞增殖的影響32331PGCMVIRESEGFP一1433丫過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染3233214331，過(guò)表達(dá)對(duì)相關(guān)蛋白的影響343331433丫過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響37341433R抑制對(duì)泌乳信號(hào)通路及細(xì)胞增殖的影響403411433Y抑制對(duì)相關(guān)蛋白的影響403421433丫抑制對(duì)細(xì)胞增殖的影響443514331，的互作蛋白分析46351免疫共沉淀分析14331R的互作蛋白463521433’，與EIFLAX、RPS7和ELF5的共定位分析48353FRET驗(yàn)證1433丫的相互作用蛋白49354WB檢測(cè)添加MET對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響54355IF檢測(cè)添加MET對(duì)互作蛋白表達(dá)的影響一5535614331，過(guò)表達(dá)后對(duì)相關(guān)蛋白的影響573571433丫抑制后對(duì)相關(guān)蛋白的影響6L358互作蛋白過(guò)表達(dá)后對(duì)相關(guān)蛋白的影響一64361433Y調(diào)節(jié)乳蛋白合成和細(xì)胞增殖的機(jī)理704討侖7L41蛋氨酸對(duì)1433丫表達(dá)的影響71II

簡(jiǎn)介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NONOCODE10224NO120910804DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEGIYRSREGULATESTHEMILKPROTEINSYNTHESISBYINTERACTINGWITHELP4INDAIRYCOWMAMMARYEPITHELIALCELLSCANDIDATEWEICHENGJIESUPERVISORPROFESSORGAOXUEJUNDEGREECATEGORYMASTEROFSCIENCECOLLEGECOLLEGEOFLIFESCIENCESFIRSTLEVELDISCIPLINEBIOLOGYSECONDLEVELDISCIPLINEBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYHARBINCHINAJUNE2015東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文254免疫熒光共定位分析蛋氨酸對(duì)ELP4與GLYRS相互作用的影響25255GLYRS過(guò)表達(dá)后CSN2和ELP4的表達(dá)25256GIYRS抑制后CSN2和ELP4的表達(dá)26257GLYRS對(duì)PNFR_B1與ELP4啟動(dòng)子結(jié)合的影響2626數(shù)據(jù)分析283結(jié)果與分析2931奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)與泌乳模型的建立29311奶牛乳腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)與純化29312奶牛乳腺上皮細(xì)胞的鑒定30313體外泌乳模型的建立3L32ELP4在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)32321添加蛋氨酸對(duì)ELP4表達(dá)的影響32322奶牛ELP4基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定32323ELP4過(guò)表達(dá)后對(duì)CSN2的影響3533GIYRS通過(guò)ELP4調(diào)控奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳蛋白的合成36331免疫共沉淀COIP分析ELP4與GIYRS的相互作用36332熒光能量共振轉(zhuǎn)移FRET分析ELP4與GIYRS的相互作用373。33蛋氨酸對(duì)CSN2、ELP4與GLYRS的影響4L334定量COIP分析蛋氨酸對(duì)ELP4與GIYRS相互作用的影響42335免疫熒光共定位分析蛋氨酸對(duì)ELP4與GIYRS相互作用的影響42336GIYRS過(guò)表達(dá)對(duì)ELP4的影響一43337GIYRS抑制對(duì)ELP4的影響一43338GLYRS對(duì)PNFRZBL與ELP4啟動(dòng)子結(jié)合的影響444討論Z1741奶牛乳腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)、純化、鑒定以及加蛋氨酸泌乳模型的建立4742ELP4與奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳蛋白合成的關(guān)系4843GLYRS通過(guò)ELP4對(duì)CSN2合成的調(diào)控一4844ELP4和GLYRS與PNFRBL的關(guān)系495結(jié)J淪50蜀【謝51參考文獻(xiàn)52攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文一6L

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文防治奶牛乳腺炎基因藥物的臨床試驗(yàn)與安全評(píng)價(jià)姓名薛方明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師孫懷昌20050501薛方明防治奶牛乳腺炎基因藥物的臨床試驗(yàn)與安全評(píng)價(jià)防治奶牛乳腺炎基因藥物的臨床試驗(yàn)與安全評(píng)價(jià)研究生薛方明導(dǎo)師孫懷昌教授摘要奶牛乳腺炎是最常見(jiàn)、防治最難、花費(fèi)最多的奶牛疾病之一，至今仍無(wú)有效的根治手段。目前奶牛乳腺炎的防治主要依賴抗菌素等常規(guī)藥物，雖有一定的效果，但也日益暴露出抗菌素殘留和耐藥菌株流行等危害人畜健康等嚴(yán)重問(wèn)題。近年來(lái)，雖然不斷有用新的藥物或方法進(jìn)行奶牛乳腺炎防治的嘗試，但目前還沒(méi)有真正能替代抗菌素的有效藥物。前期研究結(jié)果表明，含人溶菌酶1LLYZ基因的乳腺特異表達(dá)載體不僅能在動(dòng)物乳腺中表達(dá)，而且表達(dá)的重組酶對(duì)金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌鋅奶牛乳腺炎常見(jiàn)致病菌具有明顯的抑制作用，重組載體注射對(duì)奶牛乳腺炎具有明顯的治療效果，相關(guān)研究成果已獲國(guó)家發(fā)明專利專利號(hào)ZL02148545，3。為了進(jìn)一步提高基因藥物治療奶牛乳腺炎的效果和安全性，本研究對(duì)原重組載體進(jìn)行了優(yōu)化和改造，獲得新的重組載體命名為乳腺特異表達(dá)載體P215C3LYZ，并用HLYZ基因構(gòu)建成真核表達(dá)載體PCDNAKLYZ，將獲得的重組載體用于奶牛乳腺炎的預(yù)防和干乳期的治療。經(jīng)體內(nèi)外試驗(yàn)證明兩種重組載體均能獲得正確表達(dá)，采用不同注射途徑、劑量、次數(shù)等方案，將兩種重組載體分別注射奶牛乳腺，對(duì)其乳汁中暫態(tài)表達(dá)的重組人溶菌酶含量及動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了系統(tǒng)測(cè)定，建立了行之有效的重組載體注射方法，為臨床治療奶牛乳腺炎提供了依據(jù)。本研究將乳腺特異表達(dá)和真核表達(dá)重組載體分別用于泌乳期奶牛乳腺炎的治療和干乳期的預(yù)防，田問(wèn)試驗(yàn)結(jié)果表明，兩種載體在不同階段對(duì)奶牛乳腺炎的防治均有較好的療效。此外，對(duì)基因藥物的安全性問(wèn)題進(jìn)行了初步探討，進(jìn)一步證實(shí)了該基因藥物對(duì)動(dòng)物、人類及環(huán)境等的安全性。同時(shí)，對(duì)基因藥物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明，該基因藥物的生產(chǎn)開(kāi)發(fā)符合相應(yīng)的規(guī)定、標(biāo)準(zhǔn)。由此可見(jiàn)，該基因藥物不僅在實(shí)際應(yīng)用中具有安全可靠的療效，而且在大規(guī)模生產(chǎn)開(kāi)發(fā)方面也具有很好的可行性。因此，該基因藥物可以作為替代抗菌素等常規(guī)藥物用于防治奶牛乳腺炎的新型藥物加以開(kāi)發(fā)應(yīng)用。