簡介：分類號S855密級公開不加密UDC619編號2015120906010862012級攻讀碩士學位研究生畢業(yè)論文青海部分地區(qū)藏羊膈肌住肉孢子蟲感染情況調查青海部分地區(qū)藏羊膈肌住肉孢子蟲感染情況調查及分子生物學種屬鑒定及分子生物學種屬鑒定INFECTIONINVESTIGATIONANDMOLECULARIDENTIFICATIONOFSARCOCYSTISFROMDIAPHRAGMOFTIBETANSHEEPINPARTSOFQINGHAIPROVINCE論文起止時間20121020154指導教師康明教授學生姓名張洪波張洪波學科專業(yè)名稱學科專業(yè)名稱基礎獸醫(yī)學基礎獸醫(yī)學研究方向高原畜禽生理學高原畜禽生理學學院學院系、部系、部農牧學院農牧學院

簡介：東北農業(yè)大學博士學位論文豬囊尾蚴發(fā)育過程中的超微形態(tài)學和膜分子生物學及其藥物影響姓名郝艷紅申請學位級別博士專業(yè)基礎獸醫(yī)學指導教師李慶章20000101翌笙羔～墨一蘭塑蘭～。翌簍LTRAMICROMORPHOLOGYANDMEMBRANEMOLECULARBIOLOGYOFCYSTICERCUSCELLUTOSAEANDEFFECTSOFDRUGSABSTRACLQV口LERCOSIACEHDOIOEISANL硝事洲撕虻P瑟ASITICZOONOSTSENDANGEANGTHEHCAL蕩EFHUMA“ANDDEVEIOPALENT0RP哩BREEDINGNORA凼。PCR蠡搿PREY髑“。NANDTHERAP3，DRUGSSAITLLACKTH。AUTHORSTUDIEDFIRSTHSSTEMATLCALLANDREUNDL4OILTHEULTRAMICROMORPHOLOGYANDMEMBRANEMOLECULARBIOLCGJ毹CVS“C2WSCELLULOSAEANDEFFECTSOFDRUGSDURINGDEVELOPMENT㈤ITREA娃D弧”VOT汝RESULTSW∞SHOWEDAS科】O、惦L弧ES靠W。LU津OFLHEEMBRYOMERABRMM。F稚￡H口踟蹦豫囂SWASDEFINEDFIRSTLYIT啪4LAYERSINCLUDINGCUTERMEMBRANEIAYERIOMLVITELLINE1A、’EFVL，EMBVOPHONELAYERET1ANDONCOSPHERALMEMBRANELOM，ANDTHEOUTERLAYER、、。ASAFIBRWNLELUBLRRETOPROTECTTHEEGGS2THESCOLEXWITHHOOKSOFTGENLA5鎦7F口|NONOOSPHEREWAS小C。、一ORODFIRSTLYAFTERCULTARED島R5DAYS3確SURFACEU1RAMIEROMARPHOLEGY靠QLLHCERCWSCELLOSAEWASOBSERVEDFIRSTH；S3STEMTLAALL3ANDMUNDL3’I【、’ASFOUNDTHATITSCER、’IXMIEROPROCESSESDISTRIBUTEDENFLIENGA們幽8IOFTHEBLADDERCLUSTERTHEBLADDERH，89OOMPOSEDOFTWODISTRICTS、NOARTHECERVLXANDFARFROMTHEE群V伐。ANDTHEMO嬸FOOESSESTILE出STRICTILEBT“譙ECERVIXDLS峨BNTEDDENSENESSLYTHEOUTWARDHOIEOFSHEDRAINAGESYSTEMOFCYSTICEMUSCEFSSOEWASDISCOVEREDANDHEHOLEⅥASMORELLLTHEDISLRIETEARFROMTHECE“，IXTHISJNDICALEGTHATTHE如NOTIONOF“VODISTRI文SLODLFIERENT4弧ESLRAEPDREOFTHEBLADDERWASDEFIN耐FIRSTIXTOBE6LAYERS，TUGUM黜“T，EXTERIORMESENEHYMAEM，PNCNCHYR“AIAYERPL，IRTTERIOR諾CS鼢C盼MAL融，IMERIORM砸XZ∞瑚固ANDINTERIORLAYERILTHEGTRNETUREOFTHECERVIXWAS3LAYERSTEGUMENTD，MESENEHYM截MANDPARENEH、，MAPL5THEAUTHORSTUDIEDFISTHS、STEMTICALL3RANDROUNDH，ONTHEMEMBRANEMELEEUIARBLUING醯C％T。TC∞CERULOSAEDUNNGDEWLOPMENKANDPILLFONVARDTHEBIOMEMHRNNESYSTEMEHEMIEAT。OMP。5皂THEPITTASS。F毋ESPHORLAAME|ABRAIXM嘲BIOMEMHRANEC醅疆?？dES矗魯黼DTHEIRCHANGESDURINGDEVELOPMENT6THEAUTHORSELECTEDTHEDRUGSAGAINSTCEELH_FSAEANDSTUDIEDITSMACKAUISMOFACTIONON轡。ULTRAMICROMORPHO。GYANDMTRNBRATMME|EEUARBIOLOGYIEVETTHERESUHSSHOWEDNXLWSEFFECTIVEAGAINSTIMMATUREANDMANLRECCEHFLOSAEITMTFIBITEDTHEPHESPHOIIPIDMCTABOHSMOFFWOSTAGESNX。WASONLYEFFCCTLXCAGAINSTMATURECCE，／MSOE，ITDAMAGEDDIRECTHTHESTRTLEEUREOFTHESOLEXNXTWASINCFROCLNE

簡介：浙江大學博士學位論文果樹提早開花的分子生物學基礎研究姓名劉淑芳申請學位級別博士專業(yè)果樹學指導教師陳力耕200151■構特性，分別用XHOI單酶切、XHOI和NOTI雙酶切，結合圖譜分析得到的是部分插入的LFY基因片段。亞克隆后連接到PBS質粒中，得LFY同源基因片段CSLFY9914。序列測定結果反應仍然是終止在342BP后的高GC區(qū)，且這段序列與用UNEVENPCR得到的克隆片段序列互相重疊。在己知的342BP序列中不存在內含予，且根據(jù)外顯子序列推導的氨基酸序列與已知的其它幾種植物LEAFY及其同源基因的同源性高達8098％，核苷酸序列達88％左右。，1基因轉化方面建立了葡萄高效穩(wěn)定的離體再生系統(tǒng)，為開展LFY基因對葡萄遺傳轉化研究奠定基礎。F分別采用葉片和帶芽莖段為外植體，接種于添JI；FET同成分的培養(yǎng)基GSZT20ME／LIBA0IMG／LPH60中，25℃，光照強度約20003000LX，光暗周期為16H／8H條件下培養(yǎng)2周后，發(fā)現(xiàn)葉片做外植體以生根為主，且根系長勢很好，而以帶芽莖段為外植體則可誘導成完整植株，且根、莖生長平衡且長勢良好。實驗使用了ZT和6一BA兩種細胞分裂素，同時使用了IBA、NAA和IAA三種生長素，不同激素配比對莖段繼代10天后生長情況的影響表明，培養(yǎng)基GSZV20ME／LIBA01ME／LPH6062中激素比例既適合莖段增殖，也利于根系生長，后續(xù)實驗的基本轉化培養(yǎng)基。此外，根據(jù)資料還建立了高效穩(wěn)定的柑桔再生體系。7。利用已知全序列的擬南芥菜LEAFY基因序列，設計合成兩個特異性引物。匍用凍融法，將攜帶有擬南芥的LEAFY全長EDNA基因的載體PDC202，轉化到土壤農桿菌GV3103中，用葉盤法轉化葡萄和柑桔再生體系受體植株的帶芽莖段和子葉，通過初步抗性篩選、及包括PCR方法、SOUTHERN雜交等分子生物學方法檢測，成功地得到了轉基因植株；葡萄和柑桔兩種果樹受體植物轉化擬南芥菜LEAFY基因后，都具有較高的轉化頻率，其轉化芽再生頻率分別為38％和25％。廣一一／利用微體嫁接方式初步解決了柑桔轉基因植株生根難的問題。隧個實驗過程要求嚴格，為避免由于人為、自然因素而導致得來不易的轉基因植株嫁接失活，本實驗在微體嫁接支持物的選用上做了適當改進，用與試管口等大的滅菌海錦做支撐物，既可起穩(wěn)定支架作用，又可保證植株吸收充分的液體營養(yǎng)物質供其生長，同時極大地避免了操作過程中的污染。成功的得到了轉基因植株的微體嫁接苗。，2

簡介：摘要松樹萎蔫病自上世紀以來一直是林業(yè)上的毀滅性病害。一般認為，松樹萎蔫病的病原微生物為松材線蟲BURSAPHELENCHUSXYLOPHILUS。由于目前對于松材線蟲的防治尚無經濟有效的措施，嚴格檢驗檢疫是阻止該病的發(fā)生、傳播和蔓延最重要的途徑之一。由于擬松材線蟲BURSAPHELENCHUSMUCRONATUS具有和松材線蟲極其相似的外形特征，而難以將這兩種線蟲區(qū)分，針對這個問題，本文對這兩種線蟲的形態(tài)學以及分子生物學的鑒定方法進行比較研究，以便找出一種準確、便捷的檢驗檢疫方法。本研究分別收集了不同來源的40種松材線蟲和擬松材線蟲，并進行了形態(tài)學鑒定。雖然兩種群之間根據(jù)雌蟲的尾尖突的不同可以將其粗略區(qū)分開來，但由于這一特征的不穩(wěn)定性，并不能將兩種線蟲準確的區(qū)分。在ITSRFLPRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISIM研究中，首先探討了線蟲DNA的最佳提取方法，確認采用SDS法提取線蟲基因組DNA，并以ITS區(qū)特異性引物分別對松材線蟲和擬松材線蟲擴增，均獲得了950BP左右的擴增片段。進一步利用AIULHINFIMSPIHAEIII和RSAL五種內切酶分別對擴增片段進行酶切鑒定。結果表明，五種酶的任何一種都能區(qū)分松材線蟲和擬松材線蟲，而內切酶HAEIILRSAL還能準確區(qū)分亞洲型和歐洲型的擬松材線蟲群體。此外，本文還利用6種不同的隨機引物，通過RAPDRANDOMAMPLIFIEDPOLYMORPHICDNA技術對松材線蟲和擬松材線蟲的基因組DNA進行隨機擴增，以探討區(qū)分種間及種內群體的親緣關系的簡便方法，結果顯示利用OPB07和OPX01為隨機引物，RAPD法可以明顯區(qū)分松材線蟲和擬松材線蟲并與形態(tài)學分類結果相吻合以OPY01為隨機引物擴增后進行聚類分析的結果也表明，線蟲種內和種間均存在差異，同種線蟲在同一地區(qū)或臨近地區(qū)的同源性明顯高于其它地區(qū)，而同一地區(qū)內寄主對線蟲同源性的影響較小。另外，系統(tǒng)發(fā)育關系的研究結果顯示出我國松材線蟲和北美松材線蟲群體有較高的同源性，表明我國部分地區(qū)的松材線蟲可能來源于北美大陸。關鍵詞松材線蟲擬松材線蟲ITSRFLPRAPD第一部分綜述一松材線蟲概述P1松樹萎蔫病是20世紀發(fā)生的林業(yè)上的毀滅性病害，具有易傳播，發(fā)病速度快，難以防治等特點，被稱為“沒有硝煙的大火’，。到目前為止其病因基本確認為是由于松材線蟲BURSAPHELENCHUSXYLOPHILUSSTEINER陰門開口于蟲體中后部約75處。上覆以陰門蓋。后子宮囊長190PM，約為陰肛距的34雌蟲尾亞圓錐形，末端寬圓，少數(shù)有微小的尾尖突。雄蟲交合刺大，弓狀，成對，嚎突顯著，交合刺遠端膨大如盤。雄蟲尾似鳥爪，向腹面彎曲，尾端為小的卵狀交合傘包裹，退化的交合傘在光學顯微鏡下不易看見，交合傘尾翼是尾的角質膜的延伸，在尾端呈鏟狀，由于邊緣向內卷曲，從背面觀呈卵形，從側面觀呈尖圓形。病材中的幼蟲蟲體前部和成蟲相似，但其后部則因腸內積聚大量顆粒狀內含物，以至于呈暗色并且結構模糊，幼蟲尾亞圓錐形。

簡介：浙江大學博士學位論文家蠶繭質性狀DNA標記的分子生物學研究姓名SATEESHKUMAR申請學位級別博士專業(yè)特種經濟動物飼養(yǎng)指導教師徐孟奎200241標記等研究的現(xiàn)代生物學工具BACKMEN＆SOLLARL983BARRETA11988。從遺傳本質上理解蠶繭和繭絲的經濟性狀或家蠶生命周期的特點對蠶絲產業(yè)是非常有意義的。在家蠶分子生物學方面所做的研究還很有限，但各種現(xiàn)代分子工具的發(fā)展開闊了這個研究領域，將有更多有意義的研究可做，而要利用這些現(xiàn)代分子工具首先要得到合適的DNA標記。除了果蠅之外，馴化的家蠶是遺傳學研究最多的昆蟲之一，已有200多種基因突變在連鎖圖上定位，并且作為遺傳資源而被保存DOIRA，1992。最早建立的家蠶分子連鎖圖是運用了RFLP技術SHIETAL1995。PROMBOON等在1995年用RAPDS技術建立了另一個平行的分子連鎖圖，總計圖距為900CM。目前，一個高密度的連鎖圖在家蠶中被建立起來，這個圖譜包括了1018基因標記，包括了所有27個常染色體和Z染色體，分布在約2000CM上的絕大部分標記是用140個十個核苷酸序列的商品引物進行多態(tài)性DNA隨機擴增獲得，這些分子標記之間的平均間隔約為2CM，約等于500KB。這個連鎖基因圖是第一個具有染色體數(shù)量多N28并覆蓋所有染色體而沒有空缺的昆蟲基因連鎖圖。在許多國家保存的家蠶遺傳資源有待適當?shù)拈_發(fā)以培育優(yōu)良的蠶品種使之能適應不同國家的農業(yè)生態(tài)氣候條件，如印度。主要是沒有有效的方法來揭示家蠶有用遺傳變異性的本質。分子標記被認為能夠清晰的評估出群體中非環(huán)境引起的遺傳變異，因為它獨立于不確定的環(huán)境效應。運用建立在RAPD技術基礎上和根據(jù)金環(huán)蛇小衛(wèi)星DNABKM28探針的DNA指紋分析，在DNA水平上成功的區(qū)分了不同家蠶的基因型NAGARAJUETA1。HWANGJAESAM等用RAPD技術建立了家蠶原種和一代雜交種之間的遺傳關系。他對韓國的20個通過審定的原種之間的遺傳關系用RAPDSPCR技術進行了評價。用26個不同的含10個低聚核苷酸的引物進行篩選遺傳性狀，有24個引物在這些品種中形成條帶多態(tài)性，根據(jù)這些RAPD圖譜，用UPGMA方法分析這些品種之間的遺傳關系。家蠶W染色體上的隨機擴增多態(tài)性DNA的核苷酸序列已經被測定。218個隨機擴增多態(tài)性DNA的序列也已被測定。它包括815個基礎堿基對，不含有長的開放式閱讀框。根據(jù)計算機分析發(fā)現(xiàn)這個序列和家蠶中已經報道的另外四個序列有部分的同源性ABEH；SHIMADATETA1。關于家蠶Y、N1L基因和，Z染色體的RAPD標記研究，發(fā)現(xiàn)有獨特的RAPD標記OZ。XIAQINGYOU，吖本研究的目的是通過RFLP和RAPD技術輕松鑒別家蠶品種遺傳性狀。本研究的供試材料是在浙江大學和印度MYSORE中央蠶業(yè)研究所CSRTI保存的

簡介：華中農業(yè)大學碩士學位論文湖北省玉米粗縮病病原分子生物學鑒定及玉米抗感病性研究姓名燕永亮申請學位級別碩士專業(yè)植物病理學指導教師侯明生于嘉林200251ABSTRACTMAIZEISONEOFTHEMAINCROPSINCHINA，ANDISALSOTHEIMPORTANTSUSCEPFIDEMATERIALFORFORAGE，LIGHTINDUSTRYANDMEDICINENOTONLYTHETOTALPLANTATIONAREABUTALSOTHEYIELDAREALLINTHETHIRDPLACE，ONLYBELOWTHATOFRICEANDWHEATINRECENTYEARS，WITHTHECHANGEOFTHECULTIVATEHABBITTHEPLANTATIONARCABECOMEBIGERANDBIGERANDTHESPECIESCHANGINGFIEQUENTLYOWINGTOTHEFARMERSIMPLYSEEKHIGHYIELDANDPLANTSENSITIVEMAIZESPEIEES，THUSCAUSEASERIESOFDISEASESBECOMEHIGHERTHANEVERWHILE，THEDISEASESNEVERHAPPENEORSELDOMHAPPENBEFOREONEOFTHESEEXAMPLESISTHEMAIZEROUGHDWARFDISEASEIT’SREPORTEDTHATTHEPATHOGENYCAUSEDTHEDISEASEISMRDVANDWHICHBELONGSTOTHEREOVIRIDAEFIJIVIRUSTHEVIRUSISSOSIMILAR誦也ANOTHER丘JIVIRUSRBSDVINBIOLOGIEALANDIMMANITICALCHARACTERTHATMANYSPECIALISTSREGARDTHESETWOVIRUSESASONETHROUGHANALYZINGTHENUCLEOTIDESSEQUENCEOFTHESEVIRUSES，WECANCLASSFYTHEMCORRECTLYONEISOLATEOFTHEPATHOGENYFROMHUBEIWASANALYZEDATTHEMOLECULARLEVELTHEGENOMICRNAELEETROPHORETICPROFILESSHOWEDTHEGENOMECOMPOSED10DSRNASEGMENTSSELECTTHES7，CLONETHEEDNABYRTPCRAMPLICATION，ANDTHENSEQUENCETHECLONEWHICHHASREGISTEDINTHEGENBANKANDTHENUMBERAF397874THERESULTOFTHESEQUENCEANALYSISDEMONSTRATEDTHATTHEGANOMEOFHUBEIISOLATEHASTHEHOMOLOGY、訪TLLMRDVIANDRBSDVJFOR853％AND937％ALSOTHETWOORFSINTHISSEQUENCEHASTHEHOMOLOGYWITHTHATOFMRDVIANDRBSDVJFORORFL，908％AND98％；ORF2，854％AND957％THERESNLTINDICATEDTHATTHEVIRUSWHICHCAUSETHISMAIZEDISEASEINHUBEIISRICEBLACKSTREAKEDROUGHVIRUSBASINGONTHESTUDYATMOLECULARLEVEL，WEALSOIDENTIFIEDTHERESISTENCEANDSENSITIVETOTHEDISEASEWITH64MAIZESPECIESINFIELDINTIANMENANDHANCHUANWHERETHEDISEASEWASVERYHEAVYFORSEVERALYEARSTHESEMAIZESPECIESWERECOLLECTEDFORMLIAONINGBEIJING，SICHUANANDSHANDONGPROVINCESTHERESULTSHOWSTHATTHEREARE21SPEIEESHAVE1LIGHRESISTENEETOTHEDISEASE，2SPEICESHAVEHIGHSENSITIVETOTHEDISEASE，THEOTHERSAREINTHEMIDDLEINASENSE，THERESULTISVERYIMPORTANTBECAUSEITMAYHELPTHEFARMERTOSELECTTHESUITABLESEEDKEYWORDSRICEBLACKSTREAKEDDWARFVIRUSMAIZEROUGHDWARFDISEASEEDNACLONINGSEQUENCEANALYSIS2

簡介：浙江大學博士學位論文CPPU誘導瓠瓜單性結實生理和分子生物學機制研究姓名李英申請學位級別博士專業(yè)蔬菜學指導教師喻景權朱祝軍200241株光合作用增強，且CPPU處理株光合作用的增加更為顯著。這可能與CPPU處理后庫強的增強有關。4未授粉果和授粉果中的IAA和TZEATIN濃度在花后9D內均呈上升趨勢，而在CPPU誘導的單性結實果中IAA濃度則呈明顯的下降趨勢，其濃度明顯低于未授粉果和授粉果實中的濃度，TZEATIN濃度則在花后3天達到最大值隨后快速下降。5NAA和GA3處理未經授粉的瓠瓜子房不能顯著促進其細胞分裂和膨大而不能產生單性結實果，而CPPU處理未經授粉的瓠瓜子房則使其細胞數(shù)目和大小以及單果重都顯著高于未授粉和人工授粉果。6測定了瓠瓜果實組織中的兩條D一型周期蛋白同源基因的CDNA全長序列。經序列的同源性及系統(tǒng)發(fā)生分析比較，它們均屬D3周期蛋白基因，且分別命名為LAGLE；CYCD3；1和LAGLE；CYCD3；2。其推測的氨基酸序列都含有一個RETINOBLASTOMABINDINGMOTIF和PESTDESTRUCTIONMOTIF。授粉受精后，LAGLE；CYCD3；12轉錄水平增加。CPPU處理也使其轉錄水平增加且作用效果更為迅速顯著。7測定了瓠瓜果實組織中的一條酸性轉化酶基因的CDNA全長序列，長2164BP，含1992BP的編碼框，編碼663個氨基酸。經序列的同源性及系統(tǒng)發(fā)生分析比較，該酸性轉化酶基因屬于液泡型酸性轉化酶，并命名為LIAL。CPPU處理或授粉受精都促進了酸性轉化酶的轉錄水平和酶活性。關鍵詞CPPU，瓠瓜，單性結實，座果率，果實發(fā)育，細胞分裂，內源激素，源庫關系，光合作用，14C小乜物，C02加富，酸性轉化酶，C≯CD3

簡介：浙江大學博士學位論文二化螟中腸BT毒蛋白CRYLAB受體基因的分子生物學研究姓名吳志平申請學位級別博士專業(yè)生物物理學指導教師陳子元徐步進2002101機溶劑的濃度超過某一閩值后熒光發(fā)射波長不再藍移；丙酮能完全猝滅毒蛋白CRYTAB的熒光，丙烯酰胺能猝滅CRYLAB86％的熒光而KI對毒蛋白無猝滅作用，由此推斷CRYLAB的大部分色氨酸殘基位于分子表面富含負電荷的區(qū)域中；CRYLAB在所研究的四種不同的緩沖溶液中，殺蟲毒性相似。3二化螟中腸CRYLAB受體蛋白的鑒定、受體基因的克隆及其核苷酸序列特征二化螟中腸蛋白質提取物，經SDSPAGE75％電泳后電轉移至硝酸纖維素膜，然后用125I放射性標記的CRYLAB蛋白為探針進行WESTERN結合實驗，證實二化螟中腸存在一種分子量約為195KDA的特異性結合蛋白。根據(jù)已克隆到的BT受體蛋白BTR1及BTR175保守區(qū)域的氨基酸序列設計簡并引物，用分子生物學方法克隆到一個全長為5551BP的CDNA序列，其ORF編碼一個由1715個氨基酸殘基構成的蛋白。將該基因命名為BTR3，對其核苷酸序列特征進行了分析。4BT受體基因BTR3在桿狀病毒一昆蟲系統(tǒng)中的表達利用桿狀病毒一昆蟲BACTOBAC系統(tǒng)表達了BTR3基因的胞外結構片段，并對表達產物進行了WESTERNBLOT結合實驗，結果表明表達產物能有效地結合BT毒蛋白CRYLAB，從而證明BTR3確實是CRYLAB的受體基因；它們的結合部位位于BTR3蛋白的胞外結構域中。S二化螟中腸M受體基因BTR3蛋白序列的生物信息學分析將BTR3蛋白氨基酸序列用BLAST軟件對G髓BANK／DDBJ厄MBL、SWISSPROT、PIR、PDB等數(shù)據(jù)庫進行同源性搜索，用有關生物信息學軟件分析了所得同源性蛋白質序列，得到了BTR3蛋白的結構特性、系統(tǒng)進化樹，分析了其可能的生物功能；用多重聯(lián)配法分析了該蛋白的保守區(qū)域及有關功能結合位點的特性。BTR3受體蛋白是鈣粘蛋白超級家族中的～員，BTR3基因表達的前體膜蛋白中含一由21氨基酸殘基構成的信號肽其成熟蛋白胞外區(qū)域由9個類似于鈣粘蛋白重復單元EC及一近膜結構MPR組成，BT毒蛋白特異性結合序列位于EC5結構域中，每2個重復單元的交界處總會出現(xiàn)12個PRO殘基；近膜結構下游有一由22個氨基酸殘基組成的跨膜結構域，成熟蛋白共有6個潛在的N_糖基化位點。BTR3受體是一個較強的酸性蛋白，和BTR175親緣性最近；已克隆到的四種BT受體及舞毒蛾LYMANTRIADISPAR相關蛋白構成

簡介：華中農業(yè)大學碩士學位論文盾殼霉真菌病毒（CMRV）基因組的分子生物學特性研究姓名程家森申請學位級別碩士專業(yè)植物病理學指導教師姜道宏20030501華中農業(yè)大學2003屆碩士學位論文MOLECULARCHARACTERIZATIONOFADSRNATOTIRIVUSINFECTINGTHESCLEROTIALPARASITECONIOTHYRIUMMINITANSABSTRACTCONIOTHYRIUMMINITANS，ANIMPORTANTSCLEROTIALMYCOPARASITEOFSCLERO“NIASCLEROTIORUMWITHWORLDWIDEDISTRIBUTIONHASGREATPOTENTIALFORBIOLOGICALCONTROLOFPLANTDISEASESCAUSEDBYSSCLEROTIORUMANDOTHERSCLEROHNIASPPTHECOMPLETENUELEOTIDESEQUENCE，4975BP，OFTHEDOUBLESTRANDEDRNADSRNAMYCOVIRUSINFECTINGTHESELEROTIALPARASITECONIOTHYRIUMMINITANSCMRVWASDETERMINEDSEQUENOEANALYSISREVEALEDTHEOCCURRENCEOFTWOOVERLAPPINGOPENREADINGFRAMESORFSTHE5’PROXIMALLARGEORFOVWL；NUCLEOTIDEPOSITIONS622389ENCODESAPUTATIVECOATPROTEINCPWITHAPREDICTEDMOLECULARMASSOF80344DA，ANDTHE3’一PROXIMALORFORF2，NUCLEOTIDEPOSITIONS23864875ENCODESAPUTATIVERNADEPENDENTRNAPOLYMERASERDRPWITHAPREDICTEDMOLECULARMASSOF82551DATHETETRANUCLEOTIDEAUGAATNUCLEOTIDEPOSITIONS23862389INCLUDESTHEPREDICTEDSTARTCODONOFORF2，WHICHOVERLAPSWITHTHESTOPEODONFOROKFL，BASEDONGENOMEORGANIZATIONANDSEQUENCEANALYSISENCODEDPROTEINS，THEVIRUSINFECTINGCMINITANSSTRAINCHYL，DESIGNATEDCMINITANSRNAVIRUSCN餓V，BELONGSTOTHEFAMILYTOTIVIRIDAEPAIRWISESEQUENCECOMPARISONSOFTHEDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCESENCODEDBYCMRVASWELLASPHYLOGENTICANALYSISINDICATEDTHATITISMORECLOSELYRELATEDTOTHETOTIVIRUSESTHATINFECTFILAMENTOUSFUNGITHANTOTHOSEINFECTINGPROTOZOA，YEASTANDSMUTFUNGITOTESTTHESTABILITYOFC刪INCMINITANS100SINGLECONIDIUMISOLATIONCULTURESWEREOBTAINEDANDOBSERVEDFORDEVELOPMENTOFCOLONYMORPHOLOGYALLOFTHE100CULTURESHADASIMILARCOLONYMORPHOLOGYCOMPAREDTOTHEORIGINALSTRAINCHYI，AMONGTHEM32CULTURESRANDOMLYSELECTEDWEREPROVEDTOCALTYDSRNAGENOMEOFCMRVSPORESOFCHY1WEREBURIEDINTOFIELDSOILFORTWOMONTHS。AND8CULTURESWERERECOVEREDFROMSOILWITHSCLEROTIALBAITINGALLTHE8CULTURESHADTHESAMEPHENOTYPEOFCHYL，ANDVIRALDSRNAWASEXTRACTEDFROMALLTHE8CULTURESNORTHEMBLOTTINGSSHOWEDTHATALLTHEVIRAIDSRNAOFTHE8CULTURESWERETHEVIRALGENOMEOFCMRVTHESERESULTSSUGGESTEDTHATCMRVINEMINILAMWASSTABLETWENTYEIGHTCMINITANSARAINSINCLUDING5FROMUNITEDKINGDOMAND3WTREATEDCHY一1WEREUSEDTOCHECKTHEDSRNAOFMYCOVIRUS，AMONGTHEM12STRAINSWEREPROVEDINFECTEDBYMYCOVIRUSNORTHERNBLOTTINGANALYSISREVEALEDTHATTHEVIRALDSRNAINALLTHESETENSTRAINSCOULDBEHYBRIDIZEDWITHTHEPROBEMADEFROMACDNACLONEDERIVEDFROMCMRVDSRNASUGGESTINGTHATTHOSEVIRUSESMIGHTBEINTHESAMEGROUPFSPECIESITINFERREDTHATVIRUSINCMINITANSMIGHTBEVERYCOMMONKEYWORDSCONIOTHYRIUMMINITANS，DSRNAELEMENT，CMRVMYCOVIRUS，TOTIVIRUS2

簡介：廣西大學碩士學位論文傳染性法氏囊病病毒的分子生物學快速鑒別診斷技術的研究姓名龍進學申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師韋平李康然200351震P大警2003屆碩士學位論文義的兩種限制性內切酶SACI和SSPI建立的REA，對5株屬于CLBDV的疫苗株和6株標準強毒株；屬于VVLBDV的毒株GXL0、YLL、YL2和YLZ等分離毒；屬于VLBDV的美國變異E株進行酶切分析，結果與前人的研究相符。另外，針對不同強弱毒株的IBDV的VP2高變區(qū)序列的差異設計合成了VVLBDV的型特異性引物VVLBDAVVIBDS，建立型特異的RTPCR，只需一次反應即可區(qū)分CLBDV和VVLBDV。第三，應用本研究建立的REA和VVLBDV型特異性RTPCR技術，對34份采自廣西不同地區(qū)的IBDV病料，其中PCR反應陽性的23份的PCR產物，進行酶切分型和特異性引物擴增。結果發(fā)現(xiàn)1993年至2003年的病料或分離的毒株中，有8株確定為VVIBDV，13株確定為CLBDV，另外，有兩株不能確定。關鍵詞IBDV，‘RTPCR／NESTEDPCR快速診斷病毒分離限制性酶切分析型特異性引物

簡介：揚州大學碩士學位論文犬細小病毒VP2基因的分子生物學特性的研究姓名楊玲申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師劉秀梵張如寬20020401ABSTRACTAPAIROFPRIMERSWEREDESIGNEDANDSYNTHESIZEDBASEDONVP2GENEOFCPVFROMGENEBANKTHEGENOMICDNASAMPLESOFCANINEPARVOVIRUSSTRAINISOLATEDINYANGZL30UWEREEXTRACTEDANDUSEDASTEMPLATESFORPOLYMERASECHAINREACTIONPCRTOAMPLIFYTHEVP2GENETHESPECIFIC1740BPBANDWASAMPLIFEDANDCLONEDINTOPUCL8VECTORATTHERESTRICTIONENDONUCLEASEECORIANDSALISITESTHERECOMBINANTPALSMIDSWEREIDENTIFIEDBYRESTRICTIONENDONUELEASEANALYSISTHEEXOGENOUSINSERTOFRECOMBINANTPLASMIDWASFURTHERCONFIRMEDBYSEQUENCEANALYSISAFTERSEQUENCING，VV2GENEOFYANGZHOUISOLATIONWASCOMPAREDWITHTHATOFAMERICANREFERENCESTRAINSCPVDTYPE2，CPV15TYPE2A，CPV39TYPE2BTHERESULTSSHOWED995％，997％997％HOMOLOGYAMONGTHESEDIFFERENTSTRAINSVP2FRAGMENTSFIROMCPVYANGZHOUSTRAINWEREAMPLIFIEDWITHANOTHERTWOPAIRSOFPRIMERSPCRFRAGMENTSWERECLONEDTOTHEDOWNSTREAMOFGSTGENEACCORDINGTOTHEFIGHTOPENREADINGFRAMEINPGEX6P1VECTORAFTERINDUCINGWITH10MMIPTGAND37。CTHEINSERTSWEREEXPRESSEDASTWOFUSIONPROTEINSCONTAININGTHEGSTPROTEINACCORDINGTOSDSPAGEANALYSISTWOGSTVP2FUSIONPROTEINSWEREFOUNDAS54KDAND61KDBANDSRESPECTIVELYTHEEXPRESSEDPRODUCTSⅥ啪EXTRACTEDFROMTHEGELANDADDED髂IMMUNOGENTOIMMUNIZEMICEINTRAPEDTONEALLY5DOSESWITHONEWEEKINTERVALSTHESPECIFICITYOFANTIBODYW觴DETECTEDPOSITIVELYAGAINSTCPVINFECTEDFK81CELLINTHEINDIRECTINAMUNOFLUORESCENTASSAYIFATHERESULTSOFTHESTUDYSHOWEDTHATTHEINVITROEXPRESSEDPRODUCTSOFVP2GENEMAINTAINEDTHENAIVEANTIGENICITYOFCPVTHESEQUENCEANALYSISOFVP2GENEWILLCONTRIBUTETOTHESTUDYOFANTIGENICDRIFT，ANDTHEFUSIONPROTEINSWILLBEUSEFULFORTHEGENERATIONOFSPECIFICMONOCLONALANTIBODIESANDRECOMBINANTVACCINESKEYWORDSCANINEPARVOVIRNS；POLYMERASECHAINREACTION；VP2GENE；SEQUENCEANALYSIS；HOMOLOGY；EXPRESSION；INDIRECTIMMUNOFLUORESCENTASSAY

簡介：四川農業(yè)大學博士學位論文鴨對體吸蟲形態(tài)、生物學、致病性及分子遺傳學研究姓名楊光友申請學位級別博士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師郭萬柱20030501性螺作遮光處理和晚上進行人工光照對尾蚴從陽性螺體內的逸出沒有明顯的影響。將鴨對體吸蟲尾蚴放在4℃條件下，尾蚴漸停止活動并沉入試管底部但當水溫升高時又可活動起來，24小時、48小時、72小時后尾蚴的存活率分別為83．72％、68．62％、53．66％，120小時后尾蚴仍有25．93％的存活率。在自然變溫2326。C條件下，24小時、48小時、72小時后尾蚴的存活率分別為88．57％、82．22％及57．89％，至96小時仍有LO．42％的存活率。而在恒溫30℃時，尾蚴在12小時、24小時、48小時后的存活率分別為89．47％、47．27％及13．33％。鴨對體吸蟲尾蚴在PH值為4、LO、12的環(huán)境條件F10分鐘后尾蚴全部死亡；在PS值為8的水體中，6小時、12小時、24小時后尾蚴的存活率分別為69．76％、48．00％、31．92％在PH值為6．5的水體中，24小時、48小時、72小時后尾蚴的存活率分別為86．21％、52．78％、12．50％，96小時后尾蚴全部死亡；而在PH值為7．2的水體中，48小時、72小時、96小時后尾蚴的存活率分別為51．28％、37．50％及25．00％，至120小時后尾蚴全部死亡。鴨對體吸蟲尾蚴感染魚后在魚體的頭部、軀干背部、軀干腹部及尾部均查到囊蚴，其中以軀干背部寄生的囊蚴最多占44．14％，軀干腹部次之占29．42％13雷蚴、尾蚴及不同日齡蟲體的體被超徽結構雷蚴鴨對體吸蟲的成熟雷蚴呈長囊袋狀，內含多個大小不等的胚細胞團?？诔蕡A形位于蟲體頭部的頂端，口孔周圍未見有乳突分布。雷蚴缺乏圍領及附肢狀運動器或稱肌肉足、足突。在雷蚴的前1／5部，可見散在分布的圓丘型乳突。在低倍2000X下觀察，雷蚴的體表呈縱行或斜行的條索狀，在中、高倍5000．10000X下觀察時雷蚴的整個體表為絨毛樣構造，其中以中部及后部最為發(fā)達。在雷蚴的中部及后部體表上亦可見少量散在分布的微孔。鴨對體吸蟲雷蚴體表絨毛樣構造可能也與營養(yǎng)物質的吸收有關。本次觀察12條鴨對體吸蟲的成熟雷蚴，均未觀察到產孔，這可能與產孔在尾蚴未逸出時處于緊閉狀態(tài)有關。尾蚴鴨對體吸蟲尾蚴呈蝌蚪狀，尾蚴由體部和尾部組成?？谖P呈圓形或類圓形，位于蟲體前端，口吸盤唇部不光滑，其上著生有短而基部較粗的尖刀形棘，棘的尖端指向口孔的外側。IZL吸盤的唇部及口孔內壁上未見有乳突分布。在口吸盤的背部兩側可見穿刺腺的開口，腺管開IZL的排列方式為“3443”。腹吸盤較小，呈圓形或類圓形，腹吸盤上不規(guī)則地分布有尖刀形的小棘。尾蚴由皮層隆起的橫行嵴所環(huán)繞，嵴上覆蓋有呈圓形或不正形的結節(jié)，結節(jié)上可見點狀小突起。尾蚴體部背面的前部著生有2

簡介：華南理工大學碩士學位論文致病弧菌溶血素基因分子生物學原位檢測方法的研究姓名吳彩云申請學位級別碩士專業(yè)生物化工指導教師楊汝德20030501華南理工大學工學碩士學譴論文瞧的攫楚。援羚，渡法在浚露瘓警蒡鞋微生物生態(tài)學方瑟靛磷究一乏患是蠢重要熟學術蠢義。關鍵鑭基透零平轉移；蔽搜聚合酶縫式艇寢；熒光菝豫雜交；滾式綱疆紋Ⅱ

簡介：漸；工大學博士論文摘要以浙江省的水稻黑條矮縮病、河北省的小麥綠矮病和湖北省的玉米粗縮病的病毒分離物為材料，對我國3個病毒分離物進行了系列比較研究A3個病毒分離物粒子大小形態(tài)相似，且在血清學上密切相關；三者的介體、寄主相同，并引起相同的癥狀。提純3個病毒分離物的基因組片段，凝膠電泳顯示它們相應的基因組片段之間大小極其相似，推測3個病毒分離物可能是同一種病毒。然后根據(jù)水稻黑條矮縮病毒RICEBLACKSTREAKED咖口礦VIRUS，RBSDV日本分離物的S10設計一對引物，利用RTPCR技術，以3個中國分離物基因組片段S10為模板，均特異擴增到預期大小的片段?？寺?個中國分離物基因組片段S10并測定其全序列，比較分析發(fā)現(xiàn)3個中國分離物基因組片段S10相應部分之間的核苷酸同源性為979％～989％，和日本RBSDV分離物基因組片段S10的相應部分核苷酸同源性為928％一931％，和意大利的玉米粗縮病毒MAIZEROUGHAW口RFV／RUS，MRDV基因組片段SIO相應部分的核苷酸同源性分別為876％～883％，因此，3個中國分離物都應該是RBSDV，而不是MRDV也就是說中國不同地區(qū)發(fā)生的水稻黑條矮縮病、玉米粗縮病和小麥綠矮病都是由RBSDV引起的。緊接著在克隆基因組片段S10中間部分序列的基礎上，采取了一種基于RTPCR技術的簡便方法克隆了河北分離物基因組片段S7～S10、浙江分離物的S7～S10以及湖北分離物的S9～S10，并測定了它們的全序列FEMBL／DDBJ。＼／GENBANK數(shù)據(jù)庫的登錄號分別為AJ297427RBSDVZJS7、A3297431RBSDVZJS8、AJ297430RBSDVZJS9、AJ297433RBSDVZJS10、A3297428ITBSDVHEBS7、AJ297432RBSDVHEBS8、A3297429RBSDVHEBS9、A3297434RBSDVHEBS10、AJ291706RBSDVHUBS9、A3291707RBSDVHUBS10。3個中國RBSDV之間的同源性最高核苷酸同源性940％99O％，氨基酸同源性963％～100％，與RBSDVJAD的同源性次之核苷酸同源性90O％～949％，氨基酸同源性911％～986％，與意大利MRDV的同源性較低核苷酸同源性851％～881％，氨基酸同源性855％943％。進一步明確了在中國發(fā)生的小麥綠矮病、玉米粗縮病、水稻黑浙江大學博士淪文ABSTRACTTHREEISOLATESOFPLANTREOVIMSESCAUSINGSEVERESTUNTINGANDDARKLEAFSYMPTOMSOILWHEATINHEBEIPROVINCE，ONRICEINZHEJIANGPROVINCEANDONMAIZEINHUBEI，CHINA，HAVEBEENCHARACTERIZEDTHE、IRUSPARTICLESOFTHREEISOLATESWEREABOUT60RIMINDIAMETERANDCLOSELYRELATEDSEROLOGICALLYTHEIRDSRNAELECTROPHORETICPROFILESINAGAROSEGELWERESIMILARTHE3、、EREBOTHTRANSMITTEDEFFICIENTLYBYTHEPLANTHOPPERLAODELPHAXSTRIATELLUSTOMAIZEANDRICEFROMTHEIRORIGINALHOSTSBUTMAIZEWASNOTAVERYSUITABLEHOSTFORTHEVECTORANDⅥ’ASAPOORSOURCEOFVIRUSTHEFRAGMENTSCORRESPONDINGTOGENOMESEGMENTS10OFRICEBLACKSTREAKED咖萬V批RBSDVWEREAMPLIFIEDBYRTPCRFROMTHREECHINESEISOLATESANDSEQUENCEDTHEREWERE979％一989％IDENTICALNUCLEOTIDESBETWEENTHETHREECHINESEISOLATESWHICHAPPEARTOBERBSDV92_8％。931％IDENTICALNUCLEOTIDESTOJAPANESEISOLATERATHERTHANMAIZEROUGHDWARFVIRUSMRD＼7876％。883％IDENTICALNUCLEOTIDESTOITALIANISOLATETHEREFORE，ALLTHREECHINESEISOLATESSHOULDBECLASSIFIEDASRBSDVTHATIS，THEDWARFDISEASEONMAIZE，WHEAT，RICEINDIFFERENTREGIONINCHINAISCAUSEDBYRBSDVAFTERTHEINTERNALREGIONOFGENOMESEGMENTSS10OFTHREECHINESEISOLATESWASDETERMINED，GENOMESEGMENTSS7’SIOOFRBSDVZJ，S7一S10OFRBSDVHEB，ANDS9～S10OFRBSDVHUBHADBEENCLONEDANDSEQUENCEDUSINGASETOFSTRATEGYBASEDONTHERTPCRTHECOMPLETENUCLEOTIDESEQUENCESOFEACHGENOMESEGMENTWEREASSEMBLEDANDDEPOSITEDINTHEGENBANK／EMBL／DDBJDATABASESTHEACCESSIONNUMBERSAREAJ297427RBSDVZJS7，AJ297431RBSDVZJSS，AJ297430RBSDVZJS9，AJ297433BSDVZJS1O，AJ297428RBSDVHEBS7，AJ297432RBSDVHEBSS，AJ297429RBSDVHEBS9，AJ297434RBSDVHEBS10，AJ291706RBSDVHUBS9，AJ291707RBSDVHUBS10，RESPECTIVELYGENOMESEGMENTOFTHREECHINESEISOLATESSHARED94O％～99O％AND963％一100％HOMOLOGYATLEVELOFNUCLEOTIDEANDAMINOACIDSEQUENCE，RESPECTIVELYTHEYSHARED90O％’949％AND911％’988％HOMOLOGYWITHTHOSEOFRBSDVJAPATLEVELOF3

簡介：沈陽農業(yè)大學碩士學位論文利用分子生物學與細胞學技術檢測小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（WOLBACHIA）姓名張照琳申請學位級別碩士專業(yè)農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師叢斌200361沈陽農業(yè)大學硬士學位論文攘要沃爾巴克氏體WOLBACHIA是廣泛分布于節(jié)肢動物體內的～類共生菌，通過生殖細胞盼細胞質傳播，參與多種調控其宿主生糠活動的稅鑭，W隧誘導宿主發(fā)生生殖不親和、產雌弧雌生娥、雌性化等現(xiàn)象。研究沃爾巴克氏體對于了解昆蟲瓣生殖生物學、住剮決定稅制、物種遴純及天工調控昆蟲生殖行為方面意義麓大。試驗驀在建立沃爾澄克氏侮WOLBACHIA懿PCR技術襝溺體系，利用這一體系檢測沃爾巴克氏體在不同分類階元的小型昆墩中的分布；利用細胞學技術麓察沃爾巴克氐俸的努酃形態(tài)。附試驗綴采進行分拆，德弱戳下結論1利用三種昆蟲總DNA攝取的方演一SDS法、單個昆蟲總DNA提取法、CTAB法分裂褥蘩供試琵蟲卷娥券眼蜂TRICHOGRAMMACACOECIAE、食憝赤眼蜂TEMBRYOPHAGUM、玉米蠛赤眼蜂TOSTRINIAE、稻水象甲LISSORHOPTRUSORYZOPHILUSKUSCHE玟瀣室自羧氳TRIALEURODESVAPORARIORUMWESTWOOD、桃蚜MYZUSPERSICAESULZER和煙蚜黻蜂APHIDIUSGIFUENSISASHMEAD的總￡雕A。2三種昆蟲總DNA提取方法的OD比值和DNA濃度P∥P1的結果如下，SDS法138、066，L，57、14，L。43、06，154、L。2，L。38、0。54，L。56、150；單個昆煦總DNA提取法195、129，L，79、O75，150、O54，152、0。96，18E、O27，194、105；CTAB法16、ET3；L。9、L。77，L。57、O99，166、228，171、144。雖然三種方法的結果與研磨稷度、昆搬種類、蟲體大，L、稆個數(shù)套一定關系，但綜會寒說，CTAB法在試驗成本、聯(lián)提取惑DNA的濃度和質量、PCR反應的效果和重復性三方砸優(yōu)于其他兩種方法，怒一種適臺提毅小型瞧蟲惑DNA的遙熙方法。3建立并驗證了沃爾巴克氏體的PCR技術檢測體系。PCR反應體系的終髂積為209L，含騫TUTAQDNA聚合酶期50～200NG模扳DNA。反應程序94。C3MIN94℃LMIN，55℃LMIN，72℃1RAIN，循環(huán)30次_72℃7MIN。4利用沃爾豈克氏體WSP基因的一對通用弓|物81F，691R，以7葶孛供試昆蟲的總DNA為模板進行PCR反應。從卷蛾赤眼蜂TCACOECIAP、食胚赤跟蜂TEMBRYOPHAGUM和稻水象甲三ORYZOPHILUS的總DNA中擴增到