鐵皮石斛組織培養(yǎng)再生植株及遺傳穩(wěn)定性分析.pdf

1、鐵皮石斛(Dendrobium candidium Wall.Ex Lindl.)是一種多年生附生蘭科(Orchidaceae)植物，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，主要分布于浙江、廣西、云南、湖南、貴州等地。鐵皮石斛含有多糖、生物堿、氨基酸、微量元素等及一些結(jié)構(gòu)新穎的化合物，具有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文對(duì)鐵皮石斛再生體系進(jìn)行了系統(tǒng)而全面研究，對(duì)組培茁和野生苗間采用RPAD分子標(biāo)記進(jìn)行分析，以期建立系統(tǒng)的方法，為鐵皮石斛藥用價(jià)值的開發(fā)利用提供

2、了重要的科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、鐵皮石斛再生體系建立
　　 (1)外植體的消毒：根蔸以70％的酒精處理30s，然后用0.2％的升汞滅菌7min效果最佳，無(wú)菌外植體得率可達(dá)89％；莖段以70％的酒精浸泡20s，然后用0.2％的升汞滅菌3 min菌效果最好，無(wú)菌外植體得率可達(dá)91.1％。
　　 (2)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)：MS+6－BA0.5mg/L，+NAA0.1 mg/L+2，4-D1.0mg/L+蔗

3、糖30g/L+瓊脂7.5g/L，根蔸誘導(dǎo)率93.33％；莖段誘導(dǎo)率95.56％。
　　 (3)增殖培養(yǎng)：MS+6－BA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+KT1.0mg/L+Agar7.5g/L，愈傷組織生長(zhǎng)快，經(jīng)過(guò)30d培養(yǎng)，增殖系數(shù)為4.3。
　　 (4)分化培養(yǎng)：1/2MS+NAA0.5mg/L+6－BA1.0mg/L+香蕉汁50g/L+Agar7.5g/L+蔗糖30g/L，分化率97.78％。
　　 (

4、5)生根培養(yǎng)：1/2MS+NAA0.5mg/L+瓊脂7.5g/L+蔗糖30g/L+10％香蕉汁，生根率99％。
　　 (6)煉苗移栽：移栽到1/3腐殖質(zhì)+1/3苔蘚+1/3花生殼的基質(zhì)中成活率高，為96.9％。
　　 2、再生植株遺傳穩(wěn)定性的RAPD分析
　　 采用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)再生植株與野生植株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性分析，結(jié)果表明：再生植株與野生植株在DNA水平上發(fā)生了一定程度變異，其變異百分?jǐn)?shù)為3.33％，同