海洋真菌FG216代謝產(chǎn)物中纖溶活性化合物分離、結(jié)構(gòu)鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、隨著海洋微生物生物活性物質(zhì)的研究不斷深入，海洋微生物的開(kāi)發(fā)研究也受到世界矚目。目前海洋微生物生物活性物質(zhì)的研究已經(jīng)成為開(kāi)發(fā)海洋資源的重要內(nèi)容之一。本論文研究了海水產(chǎn)促纖溶活性菌株的篩選，以及活性菌株FG216發(fā)酵液中促纖溶活性化合物的分離及其結(jié)構(gòu)探索，并探討了活性菌株FG216培養(yǎng)條件的優(yōu)化。 第一章綜述了海洋生物來(lái)源藥物先導(dǎo)化合物的研究進(jìn)展，主要對(duì)從海洋生物中分離提取到的萜類化合物以及糖苷類化合物進(jìn)行了總結(jié)。其中海洋生物中萜類

2、化合物主要以單萜、倍半萜、二萜、二倍半萜為主，三萜和四萜種類和數(shù)量都較少，且大部分以糖苷形式存在。而海洋類的糖苷大部分是按照苷元化學(xué)結(jié)構(gòu)類型分類的，主要包括鞘脂類糖苷、甾體糖苷、萜類糖苷和大環(huán)內(nèi)酯糖苷等，在很多海洋生物如海藻、珊瑚、海參、海綿等中均發(fā)現(xiàn)有糖苷類化合物存在。鑒于從海洋微生物中發(fā)現(xiàn)的活性化合物越來(lái)越多，而發(fā)現(xiàn)用于治療血栓疾病的藥物卻很少，于是本論文的主要研究目的從采集的海水樣品中篩選出產(chǎn)纖溶活性化合物菌株，并分離研究活性化合

3、物結(jié)構(gòu)特性，以期尋找能成為治療血栓疾病的新型藥物。 第二章研究了從舟山群島采集的海水樣品中采用選擇性分離培養(yǎng)基純化單株海洋細(xì)菌、真菌以及放線菌，之后通過(guò)發(fā)色底物法篩選出產(chǎn)纖溶活性化合物的菌株，共分離出937株單株菌落進(jìn)行活性篩選實(shí)驗(yàn)，結(jié)果初步顯示7株海洋細(xì)菌、2株海洋放線菌以及海洋真菌中有3株纖溶促進(jìn)效果很好，我們選擇了一株長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的海洋真菌FG216進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，代謝產(chǎn)物中促纖溶活性化合物的分離等工作。 第三章采用活性

4、跟蹤的方法，對(duì)產(chǎn)纖溶活性化合物的菌株FG216進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，利用甲醇溶劑提取和半制備型HPLC方法研究促纖溶活性化合物的分離提取條件。結(jié)果顯示采用流動(dòng)相為MeOH：0.05MNH4AC（70：30），流速1.0ml/min，激發(fā)波長(zhǎng)265nm、溫度40℃的色譜條件下分離出7種化合物，經(jīng)活性測(cè)定和分析型HPLC檢測(cè)化合物D的纖溶促進(jìn)效果最好，能被用于結(jié)構(gòu)鑒定。 第四章我們對(duì)化合物D的結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行了研究，主要通過(guò)測(cè)定UV、IR、EI

5、-MS以及1H-NMR、13C-NMR、HMQC、1H-1HCOSY和HMBC譜圖測(cè)定，推測(cè)化合物結(jié)構(gòu)屬于多萜烯化合物，分子式為C51H70N2O14。經(jīng)初步檢索，該化合物是從海洋微生物中分離得到的一種新型化合物。 第五章我們對(duì)活性菌株FG216的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，通過(guò)發(fā)色底物法測(cè)定發(fā)酵液的纖溶活性及HPLC檢測(cè)發(fā)酵液的代謝產(chǎn)物組分和含量，期望選擇適合FG216菌株最佳的培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，活性菌株在種子培養(yǎng)基