α-淀粉酶AmyP融合三個(gè)外源淀粉結(jié)合結(jié)構(gòu)(SBD)后的酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、α-淀粉酶(α-amylase)是一個(gè)重要的工業(yè)用酶，廣泛應(yīng)用在食品、化工、釀造等行業(yè)。具有生淀粉降解能力的α-淀粉酶AmyP來(lái)自海洋宏基因文庫(kù)，它不僅能快速的降解多種生淀粉，而且對(duì)生大米淀粉具有偏好性。AmyP有一個(gè)淀粉結(jié)合結(jié)構(gòu)域SBD，該SBD的缺失不會(huì)急劇降低AmyP的生淀粉降解能力。為了提高AmyP的降解能力，我們對(duì)AmyP的SBD進(jìn)行了替換，選擇來(lái)自Cryptococcus sp.S-2，Thermobifida fuscaN

2、TU22和Clostridium butyricum T-7的α-淀粉酶的SBD與AmyP△SBD（缺失SBD）進(jìn)行融合，在大腸桿菌中重組表達(dá)，獲得三個(gè)融合酶AmyP-Cr、AmyP-Th和AmyP-Cl。
　　融合酶AmyP-Cr是AmyP△SBD與Cryptococcus sp.S-2的α-淀粉酶的SBD的融合，在三個(gè)融合酶中酶學(xué)性質(zhì)最好。AmyP-Cr對(duì)生大米淀粉的比活達(dá)到327.9±31.8U/mg，是野生型AmyP的1.

3、7倍。4h內(nèi)，AmyP-Cr對(duì)大米生淀粉的最高降解率為46.6％，是野生型AmyP的1.8倍。AmyP-Cr的對(duì)生大米淀粉的最高結(jié)合率為0.113uM/g，是同條件下AmyP的5.1倍。而且AmyP-Cr的熱穩(wěn)定性也獲得了提高，40℃的半衰期超過(guò)12h，是野生型AmyP的5.1倍。這些數(shù)據(jù)表明融合酶AmyP-Cr對(duì)生大米淀粉降解能力的提高，是由于來(lái)自Cryptococcus sp.S-2的SBD能同時(shí)提高酶對(duì)生大米底物的吸附力和熱穩(wěn)定性

4、。AmyP-Cr是一個(gè)新的性質(zhì)比較優(yōu)良的生大米淀粉降解酶。
　　融合酶AmyP-Th是AmyP△SBD與Thermobifida fusca NTU22的α-淀粉酶的SBD融合。AmyP-Th對(duì)生大米淀粉的比活為254.2±26.5U/mg，為野生型AmyP的1.3倍。4h內(nèi)，AmyP-Th對(duì)大米生淀粉的最高降解率為39.6％，雖然比野生型AmyP的提高了1.5倍，但是略低于AmyP-Cr的降解率。AmyP-Th的熱穩(wěn)定性沒(méi)有明顯