差異表達克隆格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1磁小體合成相關(guān)基因.pdf

1、 分類號： 學(xué)校代碼：10373 密 級： 學(xué) 號：11015071110 碩士學(xué)位論文 碩士學(xué)位論文 題 目： 目：差異表達克隆格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌（Magnetospirillum gryphiswaldense）MSR-1 磁小體合成相關(guān)基因 論文作者 論文作者：

2、 邵美麗 邵美麗 指導(dǎo)教師 指導(dǎo)教師： 李 峰 專業(yè)名稱 專業(yè)名稱： 植物學(xué) 研究方向 研究方向： 應(yīng)用微生物 淮北師范大學(xué)研究生處 二○一三年六月Ⅰ 差異表達克隆格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌（Magnetospirillum gryphiswaldense） MSR-1磁小體合成相

3、關(guān)基因 邵美麗（植物學(xué)） 摘要：目 的 ： 目 的 ： 控制菌體生長過程中的氧分壓，篩選獲得產(chǎn)磁小體菌株的最適條件。 選擇最適方法獲取總 RNA， 通過 mRNA 差異顯示技術(shù)， 克隆不同氧分壓下，格瑞菲斯瓦爾磁螺菌（M. gryphiswaldense）MSR-1 磁小體合成相關(guān)基因。 方 法 ： 方 法 ：將格瑞菲斯瓦爾磁螺菌（M. gryphiswaldense）MSR-1 的液體培養(yǎng)和固體平板計數(shù)法建立對應(yīng)關(guān)系，得出每個 OD6

4、00 含有的活菌數(shù)；通過控制同容積中不同培養(yǎng)基的量， 篩選菌體最適培養(yǎng)量； 比較不同方法提取格瑞菲斯瓦爾磁螺菌 （M. gryphiswaldense）MSR-1 RNA，選擇 TaKara RNAiso Plus 試劑盒法提取 RNA；設(shè)計、選擇隨機引物，將驗證后的不同引物組合應(yīng)用于 mRNA 差 異 顯 示 技 術(shù)中 ； 通過 BLAST 比 對 及 生 物 學(xué) 軟 件 ， 對差異片段的序列特征、結(jié)構(gòu)特點等進行分析和預(yù)測。 結(jié) 果

5、 ： 結(jié) 果 ：1、建 立 了 磁螺菌（M. gryphiswaldense）MSR-1 的液體培養(yǎng)和固體平板計數(shù)法對應(yīng)關(guān)系，得出每個 OD600 對應(yīng)的活菌數(shù)，為以后的實驗提供較便捷的方法和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。 2、通過控制同容積中不同培養(yǎng)基的量，以此比較磁小體合成情況，篩選獲得了產(chǎn)磁小體菌株和不產(chǎn)磁小體菌株的最適培養(yǎng)基量約分別為 40%和 10%。 3、比較 RNA 提取的不同方法，結(jié)果顯示 RNAiso Plus 試劑盒中其特殊成分能選擇

6、性的與 RNA 結(jié)合，能更有效地清除 DNA 及蛋白質(zhì)污染，提取的 RNA 純度、質(zhì)量較高。 4、通過 mRNA 差異顯示技術(shù)克隆基因，共獲得 2 條有效差異片段。差異片段P-1 中 ORF3 讀碼框編碼 186 個氨基酸，其編碼的蛋白與 Ralstonia solanacearum的保守結(jié)構(gòu)域 PvdE 的同源性為 42% （56/132） 。 PvdE 為它是一個 ABC 型嗜鐵素運輸系統(tǒng)、融合 ATP 酶和透性酶組件，主要進行細(xì)胞