渤海海濱濕地螺旋藻及相關(guān)微型生物多樣性分析.pdf

1、分類號(hào)：學(xué)校代碼：10069密級(jí)：研究生學(xué)號(hào)：120140177渤海海濱濕地渤海海濱濕地螺旋藻及螺旋藻及相關(guān)相關(guān)微型生物多樣性分析微型生物多樣性分析DiversityAnalysisofSpirulinaCrelativeMicroganismintheBohaiSeaCoastalWetl研究生姓名：謝麗丹專業(yè)名稱：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師姓名：王素英教授論文提交日期：2017年5月學(xué)位授予單位：天津商業(yè)大學(xué)I摘要螺旋藻因富含蛋白質(zhì)、碳水化合

2、物、維生素、不飽和脂肪酸及微量元素，已被成功開(kāi)發(fā)應(yīng)用并實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，但隨著螺旋藻應(yīng)用領(lǐng)域的擴(kuò)大，功能藻株的需求也隨之加強(qiáng)，為了獲得優(yōu)良藻株本課題組進(jìn)行了連續(xù)三年的水樣采集，對(duì)樣品的顯微觀察發(fā)現(xiàn)，螺旋藻、節(jié)旋藻在渤海海濱及其周圍內(nèi)陸濕地廣泛存在。但由于尚未找到有效的藻株富集方法，且挑取單藻絲進(jìn)行純培養(yǎng)常常遭到失敗，致使一些水樣中的螺旋藻、節(jié)旋藻藻株丟失，未能獲得純培養(yǎng)，推測(cè)藻株的生長(zhǎng)受到了水樣理化環(huán)境的影響，因此為了獲得更多的純培養(yǎng)藻株

3、，2015年7月2015年9月，對(duì)海岸線較長(zhǎng)、濕地類型比較多樣化的渤海濕地及周邊水域進(jìn)行了細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌和真核微型生物多樣性分析，一方面對(duì)分類結(jié)果進(jìn)行補(bǔ)充分析，另一方面為富集條件的選擇提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：1.對(duì)渤海濕地及周邊水域的18個(gè)采樣點(diǎn)水樣的螺旋藻進(jìn)行計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)不同來(lái)源水樣中螺旋藻的數(shù)量存在明顯差異；當(dāng)水樣TN和TP分別在4.915.8mgL和0.10.63mgL之間時(shí)，適宜螺旋藻的生長(zhǎng)。2.通過(guò)IlluminaHiSeq高

4、通量測(cè)序，18個(gè)采樣點(diǎn)中細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)類群為變形桿菌門(mén)(Proteobacteria)、藍(lán)細(xì)菌門(mén)(Cyanobacteria)、硬壁菌門(mén)(Firmicutes)；真核微型生物的優(yōu)勢(shì)類群為輪形動(dòng)物門(mén)(Rotifera)、節(jié)肢動(dòng)物門(mén)(Arthropoda)、綠藻門(mén)(Chlophyta)；藍(lán)細(xì)菌在屬的水平上優(yōu)勢(shì)類群為聚球藻(Synechococcus)、微胞藻屬(Microcystis)、Halanaerobacter、浮絲藻屬(Planktot

5、hrix)。分析18個(gè)樣品中微生物樣性差異，河北北戴河濕地(B1)細(xì)菌物種豐度最高，遼寧盤(pán)錦紅海灘度假村周邊天然濕地(L1)細(xì)菌種類多樣性最大，內(nèi)蒙古巴哈爾北湖(N2)的細(xì)菌多樣性和物種豐度均最低；河北北戴河濕地(B1)真核微型生物物種豐度最高，天津海河教育園區(qū)天然濕地(T5)真核微型生物物種多樣性最高，內(nèi)蒙古科研鎮(zhèn)天然濕地(N5)的真核微型生物物種豐富度最低，內(nèi)蒙古巴彥淖爾堿湖(N4)的真核微型生物物種多樣性最低；天津海河教育園區(qū)天然

6、池塘(T5)藍(lán)細(xì)菌物種最豐富，北戴河濕地(B1)藍(lán)細(xì)菌多樣性高于其他地方，內(nèi)蒙古索貝爾湖(N3)的藍(lán)細(xì)菌豐富度、多樣性低于其他樣點(diǎn)。通過(guò)測(cè)定18個(gè)樣品的環(huán)境因子，發(fā)現(xiàn)其與藍(lán)細(xì)菌群落分布相關(guān)性由高到低依次是：COD、總氮、pH、氨氮、葉綠素a、DO、溫度、鹽度、總磷。3.以實(shí)驗(yàn)室保存和本人分離純化的98株不同來(lái)源螺旋藻、節(jié)旋藻為對(duì)象，采用細(xì)菌通用引物和藍(lán)細(xì)菌特異引物對(duì)16SrRNA基因進(jìn)行擴(kuò)增，從基因序列的變異位點(diǎn)和平均GC百分含量來(lái)看，