甘露醇發(fā)酵及甘露醇脫氫酶的克隆表達(dá).pdf

1、甘露醇，學(xué)名己六醇，是一種在食品、醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的化工產(chǎn)品。目前國(guó)內(nèi)甘露醇的生產(chǎn)方法主要有兩種：天然提取法和化學(xué)催化法?；瘜W(xué)催化法將果糖轉(zhuǎn)化成甘露醇和山梨醇。而甘露醇脫氫酶（mannitol dehydrogenase MDH）將果糖轉(zhuǎn)化為甘露醇沒有副產(chǎn)物的生成，故而酶轉(zhuǎn)化法將成為甘露醇生產(chǎn)的主要趨勢(shì)。 已經(jīng)報(bào)道了多種微生物具有產(chǎn)生甘露醇的能力，包括霉菌、酵母菌和細(xì)菌，其中細(xì)菌以乳桿菌屬（Lactobacillus）、

2、明串珠菌屬（Leuconostoc）和酒球菌屬（Oenococcus）為主要產(chǎn)生菌。 本實(shí)驗(yàn)以布氏乳桿菌（Lactobacillus buchneri CICC6007）為研究菌株，以葡萄糖、果糖為底物發(fā)酵產(chǎn)生甘露醇，從布氏乳桿菌中克隆到甘露醇脫氫酶基因，并在大腸桿菌中獲得表達(dá)。 主要工作結(jié)果如下： （1）改進(jìn)了甘露醇及甘露醇脫氫酶的檢測(cè)方法； （2）研究了發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源、維生素對(duì)甘露醇轉(zhuǎn)化的影響

3、，優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成為（1L）：蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、檸檬酸二銨2g、NaAc2g、K2HPO42g、葡萄糖50g．果糖100g、MgSO450mg.MnSO450mg、 ZnSO450mg、吐溫801mL、復(fù)合維生素1ml。 （3）研究了布氏乳桿菌CICC6007的生長(zhǎng)規(guī)律，確立了主要工藝條件為：厭氧發(fā)酵，發(fā)酵初始pH6.3，發(fā)酵溫度35℃，接種齡36h，接種量20％，發(fā)酵周期48h。經(jīng)發(fā)酵甘露醇平均產(chǎn)量67.5