光譜分析在環(huán)境及生物化學(xué)分析中的應(yīng)用.pdf

1、經(jīng)典熒光分析法和近二十年快速發(fā)展起來(lái)的共振光散射分析法作為重要的光譜分析法，在很多領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。熒光分析法靈敏度高，選擇性好，但要求被分析物或熒光探針具有能產(chǎn)生熒光發(fā)射的特定結(jié)構(gòu)，因此應(yīng)用范圍有限。而共振光散射分析法不受此結(jié)構(gòu)限制，具有實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但是選擇性較差。熒光和光散射信號(hào)在測(cè)定過(guò)程中都容易受到儀器操作條件，樣品介質(zhì)，周圍環(huán)境的影響，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性有待提高，因此隨著光譜分析法的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用的迫切要求，

2、有必要不斷尋找新的熒光探針和光散射探針，并對(duì)方法的某些局限性進(jìn)行不斷的改進(jìn)和完善，以拓展其應(yīng)用范圍。
　　 本文根據(jù)在普通熒光光度計(jì)上單次掃描獲得的共振光散射信號(hào)的增強(qiáng)與降低的比值建立了光散射雙波長(zhǎng)比率分析法，提高了散射分析法的穩(wěn)定性和簡(jiǎn)化了雙波長(zhǎng)比率法的操作步驟，并成功用于槲皮素的分析側(cè)定。在環(huán)境及生物化學(xué)分析領(lǐng)域中尋找新的熒光和散射探針?lè)矫?，利用BR緩沖溶液與鉛離子相互作用散射信號(hào)增強(qiáng)，建立了一種極其簡(jiǎn)單的鉛離子共振光散射法

3、；設(shè)計(jì)了一段頸環(huán)結(jié)構(gòu)的aptamer序列，利用有機(jī)小分子染料Syber Green Ⅰ與單鏈DNA和雙鏈DNA的不同熒光性質(zhì)，建立了簡(jiǎn)單、快速、靈敏的PrPC分析方法。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　 (1)以染料Syber Green Ⅰ作為熒光探針，利用熒光光譜研究了人重組細(xì)胞型朊病毒蛋白PrP與aptamer的特異性作用。結(jié)果表明，Syber Green Ⅰ染料嵌入頸環(huán)結(jié)構(gòu)aptamer的頸部堿基對(duì)中導(dǎo)致熒光增強(qiáng)，而朊蛋白的加入又

4、能對(duì)這種增強(qiáng)的熒光起到明顯的猝滅效果。當(dāng)朊蛋白濃度為3.69-516.6 nmol/L時(shí)，朊蛋白濃度與熒光信號(hào)強(qiáng)度呈很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R為0.998，線性方程IF=647.986-0.914×cPrP，檢測(cè)限為2.42 nmol/L(3σ)，據(jù)此建立了簡(jiǎn)單快速靈敏的朊蛋白的分析測(cè)定方法。
　　 (2)利用鉛離子與BR緩沖溶液的相互作用，在普通熒光光度計(jì)上掃描獲得的光散射信號(hào)的強(qiáng)度與鉛離子的濃度線性相關(guān)，建立了一種簡(jiǎn)單的測(cè)定

5、鉛含量的分析方法。該方法與其他鉛測(cè)定的方法相比，具有體系簡(jiǎn)單，條件容易控制，操作步驟簡(jiǎn)單，成本低廉，效率高等優(yōu)勢(shì)。
　　 (3)以槲皮素(QT)與鋁(Ⅲ)的相互作用為例，建立了基于單次掃描光譜獲得共振光散射信號(hào)升降變化的一種全新雙波長(zhǎng)比率法。鋁(Ⅲ)在醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中形成的羥基配合物，隨槲皮素加入，槲皮素將羥基配合物中的鋁競(jìng)爭(zhēng)下來(lái)形成槲皮素與鋁的配合物，使得280nm處的散射強(qiáng)度(IRLS 280)降低，444nm處的散射