葡萄糖氧化酶和過氧化氫模擬酶協(xié)同催化制備低聚果糖的研究.pdf

1、低聚果糖（fructooligosaccharides，F(xiàn)OS）具有調(diào)節(jié)體內(nèi)菌群平衡、降低血脂、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、排毒和抗齲齒等生理功能，是一種新型的功能性甜味劑和飼料添加劑。
　　 目前市場(chǎng)上的低聚果糖產(chǎn)品大多是以蔗糖為原料，通過β-果糖基轉(zhuǎn)移酶或β-呋喃果糖苷酶的催化作用而生成的，純度在60％以下，其中葡萄糖占25～38％，蔗糖占約10％～25％，不利于糖尿病人和肥胖患者服用，因而限制了低聚果糖的應(yīng)用范圍。
　　 雖然

2、已有多酶法（果糖基轉(zhuǎn)移酶+葡萄糖氧化酶+過氧化氫酶）制備高純度低聚果糖的報(bào)道，但因過氧化氫酶價(jià)格昂貴且不能重復(fù)利用，該法未能應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。本文采用氯化血紅素作為過氧化氫模擬酶，并固定化，使多酶法具有工業(yè)化生產(chǎn)的潛力。
　　 對(duì)葡萄糖氧化酶（GOD）生產(chǎn)菌（黑曲霉40348）的產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化培養(yǎng)基成分為：蔗糖5％，葡萄糖5％，硝酸鈉0.5％，硫酸鎂0.07％，氯化鉀0.05％，硫酸亞鐵0.001％，磷酸氫二鉀0.2％，

3、碳酸鈣0.3％。優(yōu)化培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵周期為5d。經(jīng)過一系列的工藝優(yōu)化，得到發(fā)酵液酶活為5.05U/mL。
　　 對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行固定化并對(duì)固定化葡萄糖氧化酶的部分酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究。葡萄糖氧化酶的固定化優(yōu)化條件為：D309弱堿性陰離子交換樹脂作為載體，給酶量/載體為300U/1.0g，戊二醛濃度0.05％，交聯(lián)溫度為35℃，交聯(lián)時(shí)間為4h。最終得到47U/g的固定化葡萄糖氧化酶。固定化

4、葡萄糖氧化酶的最適pH為6，最適溫度為40℃。
　　 利用氯化血紅素（Hemin）模擬過氧化氫酶并對(duì)其進(jìn)行固定化。固定化氯化血紅素的條件為：D309弱堿性陰離子交換樹脂作為載體，給酶量/載體為15mg/1.0g，戊二醛濃度0.05％，交聯(lián)溫度為35℃，交聯(lián)時(shí)間為8h。最終得到模擬酶活力為52U/g的固定化氯化血紅素。
　　 在固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶生產(chǎn)低聚果糖的基礎(chǔ)上，通過加入固定化葡萄糖氧化酶和固定化氯化血紅素將生產(chǎn)過程中