載Survivin siRNA的殼聚糖及水溶性殼聚糖納米粒的制備、鑒定及生物活性研究.pdf

1、Survivin是目前發(fā)現(xiàn)的一種只高表達(dá)于人癌癥細(xì)胞而不表達(dá)于周圍正常組織的凋亡抑制蛋白，siRNA通過RNA干擾使Survivin基因沉默就能使癌細(xì)胞恢復(fù)凋亡，從而達(dá)到治療癌癥的目的。殼聚糖納米粒作為非病毒基因遞送載體可以防止siRNA被降解，并且生物相容性良好、低毒、低免疫原性。但是殼聚糖水溶性較差的問題也引起了人們的廣泛思考。
　　為了探索水溶性殼聚糖作為SurvivinsiRNA載體的可行性以及抑制基因表達(dá)的效果，本文對制

2、備水溶性殼聚糖的條件進(jìn)行了優(yōu)化，將優(yōu)化的改性殼聚糖進(jìn)行紅外光譜和X射線衍射分析；并對殼聚糖納米粒和水溶性殼聚糖納米粒用復(fù)凝聚法進(jìn)行制備，瓊脂糖凝膠電泳分析納米粒與DNA結(jié)合能力，比色法檢測其包封率，透射電鏡檢測納米粒的形態(tài)和粒徑；用脂質(zhì)體作為陽性對照，納米粒體外轉(zhuǎn)染Hep-2喉癌細(xì)胞觀察其抑制癌細(xì)胞Survivin基因表達(dá)的效果。
　　結(jié)果表明，乙酸1.0ml，乙酸酐1.0ml，乙醇25ml，吐溫801.0ml，吡啶6ml，攪拌1

3、h時，單因素法控制脫乙酰度（D.D.）得到的改性殼聚糖水溶性最好（D.D.=50.73％），紅外光譜分析發(fā)現(xiàn)順利引入了乙酰基，降低了殼聚糖的脫乙酰度，X射線衍射發(fā)現(xiàn)殼聚糖的晶型受到破壞，結(jié)構(gòu)規(guī)整性和結(jié)晶性都有所下降，從而具有水溶性。
　　由瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果可知，siRNA與殼聚糖及水溶性殼聚糖均有效結(jié)合。殼聚糖納米粒包封率為92.8%，水溶性殼聚糖納米粒包封率為88%~92%。由透射電鏡可知CS-TPP/siRNA納米粒粒徑50