吖啶類化合物T19對H2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能與表達變化的調節(jié).pdf

1、目的：探討吖啶類化合物T19對H2O2誘發(fā)大鼠腦微血管內皮細胞（rat brain microvascular endothelial cells，rBMECs）上P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）功能與表達變化的調節(jié)及其作用機制研究。
　　方法：原代培養(yǎng) rBMECs和神經膠質細胞；用 MTT法檢測吖啶類化合物 T19對rBMECs增殖的影響；采用 Transwell技術建立共培養(yǎng)體系，通過測定外室熒光素鈉（f

2、luorescein sodium，NaF）的表觀滲透系數（apparent permeability coefficient，Papp）反映T19對血腦屏障緊密連接的影響；分別測定內室、外室羅丹明123（Rhodamine123， Rh123）的Papp值以反映T19對rBMECs上P-gp功能的影響；通過共培養(yǎng)體系，在內室加入100、150、200μM H2O2，測定外室NaF以及內外室Rh123的Papp值以篩選建立氧化應激模型的

3、條件；在共培養(yǎng)體系條件下，內室加入H2O2和T19后測外室NaF以及內外室Rh123的Papp值，反映T19對H2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能變化的調節(jié)；通過流式細胞儀檢測 T19對 H2O2誘發(fā)后 ROS含量變化的影響；運用免疫熒光法檢測T19對H2O2誘發(fā)后Nrf2的影響；通過在共培養(yǎng)體系內室加入ERK抑制劑PD98059和NF-?B抑制劑PDTC測定外室NaF以及內外室Rh123的Papp值，反映PD98059和PDTC對H

4、2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能變化的調節(jié)；通過Western Blot法檢測正常培養(yǎng)條件下P-gp以及H2O2誘發(fā)后P-gp、P-ERK、P-I?B的蛋白表達，使用ERK抑制劑PD98059和NF-?B抑制劑PDTC以確定上下游關系。
　　結果：T19對 rBMECs增殖和緊密連接沒有影響；正常培養(yǎng)條件下，T19能抑制rBMECs上P-gp的功能和表達，并呈濃度依賴性；為了和體內實驗結果保持一致，選擇150μM H2O2作用