啤酒酵母發(fā)酵制備酵母硒的條件優(yōu)化及其酵母硒的應(yīng)用.pdf

1、硒是生物體中的必需微量元素之一，每天保證一定的硒攝入量，能有效地維持生物體內(nèi)氧化還原水平，來(lái)保護(hù)組織器官以免誘發(fā)各類(lèi)疾病以及發(fā)生并發(fā)癥。我國(guó)大部分地區(qū)的土壤中處于缺硒或少硒狀態(tài)，因而生產(chǎn)出的天然食品已不能完全滿(mǎn)足生物體內(nèi)硒的正常需求。富硒酵母是一種新型的飼料添加劑，是將亞硒酸鈉通過(guò)酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化成的有機(jī)硒，其具有較高的生物活性和理化性質(zhì)。
　　本文以啤酒酵母為出發(fā)菌種進(jìn)行硒的富集與轉(zhuǎn)化，主要研究如下：
　　（1）發(fā)酵培養(yǎng)基選用

2、麥芽汁培養(yǎng)基，在發(fā)酵的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期加入一定量的亞硒酸鈉溶液，啤酒酵母能有效地將亞硒酸鈉轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，在發(fā)酵過(guò)程中分別對(duì)培養(yǎng)基中的糖濃度、初始pH和發(fā)酵條件中的溫度、接種量、發(fā)酵時(shí)間、加硒時(shí)間和加硒濃度等因素進(jìn)行單因素研究，通過(guò)分析得到硒濃度、初始pH、接種量和加硒時(shí)間對(duì)硒的富集過(guò)程影響較大，再經(jīng)過(guò)4因素3水平的正交試驗(yàn)優(yōu)化，最終得到的最佳條件為：糖濃度9％，初始pH為5，發(fā)酵溫度28℃，加硒時(shí)間9h，發(fā)酵時(shí)間30h，接種量為15%，加硒濃

3、度為30μg/ml；在最佳條件下，最終獲得的富硒酵母的總硒含量達(dá)14953.2μg/L，生物量為7.3g/L，單位酵母中硒濃度2048.4ppm；將獲得的富硒酵母鹽酸水解后，經(jīng)過(guò)全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定，富硒酵母中總氨基酸含量高于普通酵母，但硒代半胱氨酸含量要低于普通酵母，這說(shuō)明硒的加入競(jìng)爭(zhēng)了部分半胱氨酸的代謝途徑。
　?。?）通過(guò)堿熱法對(duì)富硒酵母進(jìn)行破碎，研究了不同pH、不同硫酸銨濃度和不同乙醇含量對(duì)硒蛋白提取的影響，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)pH

4、到4.5時(shí)，提取出的硒蛋白硒含量最高；探索富硒酵母中硒蛋白和普通酵母中普通蛋白的還原能力和清除羥基自由基的能力，發(fā)現(xiàn)均具有一定的還原能力和清除羥基自由基能力，但硒蛋白的還原能力和清除羥基自由基能力均明顯強(qiáng)于普通蛋白，硒蛋白的羥基自由基清除率最高達(dá)到81.6%，兩者效果最大相差1.5倍。經(jīng)不同濃度羥基自由基氧化后，通過(guò)比色法測(cè)定氧化后蛋白的總巰基殘基含量，發(fā)現(xiàn)硒蛋白中的總巰基含量下降明顯比普通蛋白的要慢，通過(guò)紅外光譜法解析，氧化后的蛋白結(jié)

5、構(gòu)變化主要發(fā)生在β-折疊，普通蛋白的β-折疊變化要比硒蛋白明顯，這均顯示了硒對(duì)于抑制羥基自由基氧化蛋白具有重要作用。
　?。?）將亞硒酸鈉與富硒酵母分別作為飼料添加劑喂食小白鼠，探討補(bǔ)硒以及在不同硒源對(duì)小白鼠生長(zhǎng)代謝的影響，結(jié)果顯示；兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組的增重量和血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的酶活性和各器官（肝臟、腎臟、心臟、胰腺、子宮、肌肉）中的硒含量均高于空白組（P<0.05)，在各器官中胰腺所吸收的硒含量最高；采用霍恩氏系列測(cè)定亞硒酸鈉和