鹽析萃取偶聯(lián)柱層析分離純化血漿蛋白.pdf

1、血漿蛋白由數(shù)百種具有廣泛生理功能的蛋白質(zhì)組成，其中白蛋白與免疫球蛋白占據(jù)著血液制品中主要的市場份額。血漿成分十分復雜，目前工業(yè)上血漿蛋白的分離方法主要采用有機溶劑沉淀法、鹽析法和柱層析，但這些方法尚存在著分離環(huán)境要求低溫、分離純化步驟繁瑣、純度和收率低等缺點。本論文開展了親水性有機溶劑鹽析萃取偶合柱層析分離純化血漿蛋白的研究，以期為血漿蛋白的分離純化提供新方法。
　　(1)首先考察了免疫球蛋白G(IgG)在親水性有機溶劑鹽析萃取中

2、的分配規(guī)律，選取磷酸氫二鉀、碳酸鈉、檸檬酸鈉三種鹽分別與乙醇組成鹽析萃取體系，考察了不同鹽、醇含量對IgG在體系中分配的影響。結果表明，20％磷酸氫二鉀(w/w)-14％乙醇(w/w)、19％碳酸鈉(w/w)-13％乙醇(w/w)、25％檸檬酸鈉(w/w)-19％乙醇(w/w)為三種鹽析萃取體系的最佳組成，在這些條件下，IgG回收率分別為97.4％、93.1％、90.2％。采用ELISA法檢測了磷酸氫二鉀-乙醇、碳酸鈉-乙醇兩種體系萃取

3、后IgG的活性，發(fā)現(xiàn)經(jīng)磷酸氫二鉀體系萃取后，IgG活性基本維持不變，而經(jīng)碳酸鈉體系萃取后，IgG活性損失率達70％以上。
　　(2)將20％磷酸氫二鉀(w/w)-14％乙醇(w/w)鹽析萃取體系調(diào)節(jié)pH至7.0后，直接從豬血漿中萃取IgG與白蛋白，鹽析萃取能明顯去除部分雜質(zhì)蛋白，葡萄糖的去除率達51.82％。根據(jù)上相中富含鹽的特點，選取疏水層析作為后續(xù)純化手段，可得到較高純度的白蛋白與IgG混合物，該混合物再經(jīng)過陰離子交換層析后，