雙酰腙席夫堿及銅配合物與CopC作用研究.pdf

1、1.本文以2,6-吡啶二甲酸為原料,經(jīng)過一系列反應(yīng)(?；?、酯化、胺解、親和加成)最終生成配體:2,6-吡啶二甲酰肼-2-羥基萘甲酰腙(配體L1)和2,6-吡啶-二甲酰肼水楊酰腙(配體H2L2)。采用紫外-可見吸收光譜、熒光光譜、紅外光譜、核磁氫譜和元素分析手段對(duì)L1, H2L2的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。采用紫外-可見吸收光譜、熒光光譜、熒光壽命的方法研究了酸堿對(duì)配體L1, H2L2互變異構(gòu)性質(zhì)的影響。
　　2.采用常規(guī)方法合成銅配合物:2

2、,6-吡啶-二甲酰肼-2-羥基萘甲酰腙配合物(銅配合物1)和2,6-吡啶-二甲酰肼水楊酰腙配合物(銅配合物2)。通過紫外-可見吸收光譜、熒光光譜、紅外光譜、摩爾電導(dǎo)、電噴霧質(zhì)譜、元素分析手段對(duì)銅配合物1和銅配合物2的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,其分子組成分別為:Cu(L1)Cl2·3H2O和Cu(L2)·4H2O。
　　3.以人血清白蛋白(HSA)為模型蛋白。通過紫外-可見差光譜,熒光光譜,熒光壽命研究了HSA與配體及銅配合物之間的相互作用。

3、結(jié)果表明:與配體及銅配合物作用后,HSA在278 nm處的吸收峰發(fā)生藍(lán)移;在334 nm處的熒光發(fā)射峰發(fā)生猝滅,且猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅;配體及銅配合物與HSA的表觀結(jié)合常數(shù)均約為105 M-1;結(jié)合位點(diǎn)數(shù)均為1;兩者間的相互作用主要為疏水和氫鍵作用。由Frster非輻射共振能量轉(zhuǎn)移理論估測(cè)出配體及銅配合物偶極中心與HSA中色氨酸殘基偶極中心的距離。采用Arguslab4.1.1和PyMOL程序?qū)ε潴wL1,H2L2與HSA之間的作用機(jī)制進(jìn)行

4、了分析并給出分子對(duì)接模型圖,結(jié)果與Frster非輻射共振能量轉(zhuǎn)移理論估測(cè)的數(shù)據(jù)相吻合。
　　4.采用紫外-可見吸收光譜、熒光光譜、熒光壽命方法研究了CopC與配體及銅配合物之間的相互作用。結(jié)果表明:與配體及銅配合物作用后,CopC在320nm處的熒光發(fā)生猝滅,且猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅;配體及銅配合物與CopC的表觀結(jié)合常數(shù)均約為105 M-1,結(jié)合位點(diǎn)數(shù)均為1;兩者間的相互作用主要為疏水和氫鍵作用。由Frster非輻射共振能量轉(zhuǎn)移理論

5、估測(cè)出配體及銅配合物偶極中心與 CopC中色氨酸殘基偶極中心的距離。與HSA不同的是,CopC作為一個(gè)銅調(diào)控蛋白,有兩個(gè)銅離子結(jié)合位點(diǎn),在生物體內(nèi)銅離子調(diào)控中起氧化還原開關(guān)作用。Cu2+滴定配體-CopC(1:1)混合溶液的實(shí)驗(yàn)表明,在混合溶液中,CopC結(jié)合Cu2+和配體結(jié)合Cu2+的能力都減弱;且CopC結(jié)合Cu2+和配體結(jié)合Cu2+的結(jié)合比都為1:1。銅配合物滴定CopC熒光光譜實(shí)驗(yàn)表明,CopC與銅配合物之間形成了復(fù)合物,Cop