發(fā)光細(xì)菌法檢測(cè)海洋污染生物毒性的標(biāo)準(zhǔn)化與現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用研究.pdf

1、海洋污染生物毒性的檢測(cè)是海洋環(huán)境保護(hù)的重要內(nèi)容，發(fā)光細(xì)菌法（luminescent bacteria test,簡(jiǎn)稱LBT）是一種綜合檢測(cè)判定毒性物質(zhì)濃度與生物效應(yīng)關(guān)系的生物毒性檢測(cè)技術(shù)，能夠全面地反映各種毒性物質(zhì)對(duì)環(huán)境的綜合毒性效應(yīng)。本文針對(duì)LBT在海洋環(huán)境中應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題，以經(jīng)遺傳改造的不動(dòng)桿菌Acinetobacter sp.Tox2和Acinetobacter sp. RecA作為研究對(duì)象，開展了以下主要研究?jī)?nèi)容：
　　

2、（1）以Tox2菌株為受試生物對(duì)4種重金屬和2種石油烴的急性毒性進(jìn)行了檢測(cè)，并通過(guò)傳統(tǒng)方法諸氏鯔蝦虎魚的暴露試驗(yàn)對(duì)其結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。Hg2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+和原油水容納組分對(duì)Tox2的EC50分別為：0.12mg/L、71.81mg/L、0.68mg/L、43.67mg/L、2.01mg/L，對(duì)蝦虎魚的LC50分別為：0.14mg/L、107.73mg/L、3.23mg/L、39.83mg/L、2.69mg/L，柴油水容納

3、組分對(duì)蝦虎魚的LC50為4.96mg/L。結(jié)果顯示：兩者檢測(cè)結(jié)果匹配度較好，但在急性毒性響應(yīng)時(shí)間上發(fā)光細(xì)菌法（<30min）要優(yōu)于傳統(tǒng)的魚類暴露實(shí)驗(yàn)（96 h）。
　　（2）通過(guò)正交試驗(yàn)，結(jié)合石油烴含量分析得到了檢測(cè)沉積物生物毒性的最優(yōu)預(yù)處理方法：用模擬海水在25℃提取0.5h，固液比=1:4。采用該方法對(duì)實(shí)地修復(fù)過(guò)程中溢油污染的海洋岸灘沉積物樣品進(jìn)行預(yù)處理，并分別利用 Tox2菌株和RecA菌株評(píng)價(jià)了不同時(shí)間下樣品急性毒性和遺傳

4、毒性的變化規(guī)律。結(jié)果顯示，修復(fù)區(qū)和自然風(fēng)化區(qū)沉積物樣品的急性毒性均為無(wú)毒(HC2lN g為負(fù)值)，但遺傳毒性差異較大。從不同站位來(lái)看，同一時(shí)間修復(fù)區(qū)樣品遺傳毒性小于未修復(fù)區(qū)樣品。從時(shí)間上來(lái)看，遺傳毒性隨時(shí)間的推移而降低，且修復(fù)區(qū)樣品降低更快。修復(fù)區(qū)初始樣品（第1天）的遺傳毒性為高毒（NMMC為1.65mg/L)，第14天樣品降至中毒(NMMC為0.17mg/L)，第30天樣品的降至無(wú)毒（NMMC為負(fù)值）。自然風(fēng)化區(qū)初始樣品的遺傳毒性為高

5、毒(NMMC為1.41mg/L)，第60天樣品開始出現(xiàn)中毒(NMMC為0.18 mg/L)，第120天樣品降至無(wú)毒（NMMC為負(fù)值）。遺傳毒性的檢測(cè)結(jié)果與PAHs的含量有相同的遞減趨勢(shì)。
　?。?）利用脫脂牛奶和NaCl溶液（或LB培養(yǎng)基）構(gòu)成雙因素多梯度的冷凍干燥保護(hù)劑，分別探究Tox2菌株和RecA菌株的最佳冷凍干燥條件，得到二者的最佳凍干保護(hù)劑條件分別為：24％脫脂牛奶、0.5%NaCl溶液和24％脫脂牛奶、NaCl含量為0

6、.5%的LB。凍干后Tox2菌株和RecA菌株的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度分別大于88.58%、85.13%。用凍干前后的Tox2菌株和RecA菌株分別對(duì)HgCl2和MMC的生物毒性進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，兩株菌凍干前后的發(fā)光曲線趨勢(shì)相同，在相同物質(zhì)濃度下的發(fā)光抑制率、誘導(dǎo)率基本相當(dāng)。其中HgCl2對(duì)Tox2菌株凍干前后的EC50相等（均為0.11mg/L），MMC對(duì)RecA菌株凍干前后的EC50差別較?。ǚ謩e為0.92mg/L、1.02mg/L）。表