三羥基異黃酮白蛋白納米體的制備、表征及細(xì)胞吸收研究.pdf

1、三羥基異黃酮(Genistein)是一種植物雌激素，具有廣泛的生理活性及藥理作用，如:具有抗氧化、抗腫瘤、雌激素樣、保護(hù)心血管系統(tǒng)及改善骨質(zhì)疏松癥作用等。但三羥基異黃酮難溶于水，在體內(nèi)生物利用度低，極大地影響三羥基異黃酮在體內(nèi)發(fā)揮良好的生物活性。
　　本文用去溶劑化-化學(xué)交聯(lián)法制備三羥基異黃酮白蛋白納米體(Gen-BSA-NP)，以包封率及載藥量為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，用正交試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝。最佳制備工藝為:牛血清白蛋白50 mg，大豆

2、三羥基異黃酮6 mg，無(wú)水乙醇20mL，0.25％的戊二醛150μL，室溫下固化12 h。制得的Gen-BSA-NP包封率為(70.10±1.13)％，載藥量為（11.36±0.17）％。通過(guò)透射電子顯微鏡(TransmissionElectron Microscope，TEM)和Zeta電位對(duì)納米體進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征以及形態(tài)分析。結(jié)果表明，三羥基異黃酮能被白蛋白包埋形成外形規(guī)整的圓球，在水中分散性較好，Z-Average為（75.17±3.

3、13）nm，多指數(shù)分散系數(shù)(polydispersity index，PDI)為（0.201±0.021），Zeta Potential為(-35.43±0.29) mV。結(jié)合Z-Average、PDI、ZetaPotential和電鏡圖可初步說(shuō)明所制各的納米混懸液穩(wěn)定性良好。
　　用傅立葉紅外光譜(FTIR)、X射線(xiàn)衍射(XRD)和示差掃描量熱儀(DSC)對(duì)Gen-BSA-NP進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征分析，推斷出Gen-BSA-NP中包埋

4、有三羥基異黃酮，且三羥基異黃酮是以無(wú)定形的形式存在的。對(duì)Gen-BSA-NP的穩(wěn)定性及體外釋放性進(jìn)行了分析，穩(wěn)定性研究表明:納米體在37℃及以下穩(wěn)定性良好，高溫(100℃)及酸性條件下不穩(wěn)定，在pH為7.4條件下最穩(wěn)定，冷凍干燥對(duì)納米體的穩(wěn)定性沒(méi)有影響，貯藏試驗(yàn)表明納米體在4℃條件下貯藏最穩(wěn)定。體外釋放試驗(yàn)表明:納米體在人工模擬的腸液中得到緩慢釋放，具有很好的緩釋效果。
　　Caco-2細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明，BSA對(duì)細(xì)胞活性無(wú)影響;G

5、en單體及Gen-BSA-NP對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制均表現(xiàn)出一定的濃度依賴(lài)性，但隨濃度達(dá)到一定程度后，Gen-BSA-NP對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制能力明顯優(yōu)于Gen單體。Caco-2細(xì)胞攝入實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Gen單體及Gen-BSA-NP均能被Caco-2細(xì)胞攝入，且Gen-BSA-NP較Gen單體更易被Caco-2細(xì)胞攝入。Caco-2細(xì)胞吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Gen-BSA-NP中的Gen變化速率要高于Gen單體，時(shí)間依賴(lài)性更強(qiáng)。加樣小孔兩側(cè)的P