微流控酶法合成酚酸結(jié)構(gòu)脂質(zhì)及其生物活性研究.pdf

1、近年來，由于人工合成的一些抗氧化劑存在潛在的致癌性，所以天然抗氧化劑的發(fā)展引起了人們的廣泛關(guān)注。酚酸及其衍生物，具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生物活性。然而，由于其在疏水介質(zhì)中的溶解性較低，導(dǎo)致其生物活性降低，限制了其在醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域的應(yīng)用。隨著酶法修飾甘油三酯合成新型結(jié)構(gòu)脂質(zhì)研究的不斷深入，可將酚酸類化合物通過化學(xué)法或酶法修飾到甘油三酯的骨架上，以提高酚類化合物在疏水介質(zhì)中的生物活性和脂溶性。因此，本文采用化學(xué)法和酶法合成

2、酚酸單甘油酯，探究合成酚酸甘油酯的綠色工藝和生物學(xué)功能。主要研究結(jié)果如下：
　　構(gòu)建了化學(xué)法合成對(duì)香豆酸單甘油酯、酶法合成阿魏酸單甘油酯和咖啡酸單甘油酯等方法，采用LC-MS、FTIR、1H NMR和13C NMR對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。結(jié)果表明，由LC-MS譜圖、MS2譜圖及其分子裂解過程可知：對(duì)香豆酸與甘油在對(duì)甲苯磺酸丙酮溶液中生成的產(chǎn)物為對(duì)香豆酸的甘油酯（m/z238，MS2119，145，163）；阿魏酸乙酯與甘油在無溶劑體系

3、中通過脂肪酶催化合成的產(chǎn)物為阿魏酸單甘油酯（m/z268，MS2149，175，193）；咖啡酸甲酯與甘油在無溶劑體系中通過脂肪酶催化合成的產(chǎn)物為咖啡酸單甘油酯（m/z254，MS2135，161，179），通過FTIR、1H NMR和13C NMR進(jìn)一步表征咖啡酸單甘油酯的結(jié)構(gòu)，證明其結(jié)構(gòu)為1-咖啡酸單甘油酯(1-caffeoylglycerol,1-CG)，為咖啡酸單甘油酯的功能評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)。以蠶蛹油為甘油原料制備1-咖啡酸單甘油酯

4、游離脂肪酸的工藝可行，產(chǎn)率達(dá)到85.03％，剩余的游離脂肪酸經(jīng)氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)主要是油酸和α-亞麻酸，脂肪酸乙酯經(jīng)反相 C18柱純化后可得到純度>90%的α-亞麻酸乙酯、>70%的亞油酸乙酯和油酸乙酯。
　　優(yōu)化了酶促轉(zhuǎn)酯化合成1-CG的工藝。篩選出合適的底物和催化劑分別為咖啡酸甲酯（Methyl caffeate,MC）和脂肪酶Novozym435。當(dāng)脂肪酶用量為12%，底物濃度為70g/L，溫度75℃，時(shí)間10h時(shí)，

5、咖啡酸單甘油酯的最大得率為90.63%。與加壓體系相比，Km值減少了8%，表明Novozym435對(duì)常規(guī)體系的底物MC的親和力比加壓體系的底物咖啡酸乙酯親和力強(qiáng)。
　　構(gòu)建了連續(xù)流微通道反應(yīng)器中脂肪酶催化合成咖啡酸單甘油酯的新方法。通過研究溫度、流速、保留時(shí)間和底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)的影響，篩選出合適的共溶劑為氯化膽堿-尿素。當(dāng)溫度為65℃、流速為2μL/min、保留時(shí)間2.5h、底物濃度為50g/L時(shí)，咖啡酸單甘油酯的最大得率為96

6、.49%。與間歇式反應(yīng)器相比，反應(yīng)時(shí)間由10h縮短至2.5h，Km值減少了5/6，且脂肪酶Novozym435可重復(fù)使用16次。
　　基于合成的1-CG，探究其抗氧化性和對(duì)HaCaT細(xì)胞的紫外損傷修復(fù)能力。結(jié)果表明：1-CG對(duì)DPPH自由基具有一定的清除能力，且清除能力強(qiáng)于人工合成的抗氧化劑BHA，BHA的IC50值比1-CG高2.42倍；1-CG能有效抑制β-胡蘿卜素漂白，且其IC50值與BHA相比減少了9/10。與底物咖啡酸甲