CAPN1基因和CASP9基因在牛骨骼肌形成中的功能作用研究.pdf

1、牛肉的品質(zhì)特性受到肌纖維類型和直徑等特征的影響，而肌纖維直徑的增大和肌纖維的類型轉化等是隨著畜禽生長發(fā)育的進行在不斷變化，此生物學過程是受到骨骼肌衛(wèi)星細胞的發(fā)育調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，鈣蛋白酶 I（CAPN1）基因和凋亡相關基因 caspase-9（CASP9）是與骨骼肌生長發(fā)育密切相關的兩個重要基因。以牛骨骼肌衛(wèi)星細胞為研究對象，并選取與骨骼肌生長發(fā)育相關的候選基因來研究肉品質(zhì)，正成為肉品質(zhì)研究的新方向，將會有效促進肉品質(zhì)的改善。
　　

2、（1）本研究采用0.1％的I型膠原酶和0.25%的胰蛋白酶聯(lián)合使用的兩步酶消化法成功分離并提取出牛原代骨骼肌衛(wèi)星細胞。并在體外成功培養(yǎng)了骨骼肌衛(wèi)星細胞，通過繪制細胞生長曲線發(fā)現(xiàn)細胞生長狀態(tài)較好，也成功對其進行純化、冷凍保存與復蘇以及相應的誘導分化，細胞在傳代至第3~4代時純度高，且傳代培養(yǎng)后和細胞復蘇后的細胞生物學特性穩(wěn)定。
　?。?）本研究通過免疫細胞化學染色技術成功鑒定了牛骨骼肌衛(wèi)星細胞，牛骨骼肌衛(wèi)星細胞表面標志均呈陽性表達，

3、符合其標志物的表達特性。通過反轉錄PCR檢測技術，根據(jù)凝膠電泳結果顯示其亮度情況，表明經(jīng)過傳代培養(yǎng)后，牛骨骼肌衛(wèi)星細胞在體外擴增培養(yǎng)仍能具有骨骼肌衛(wèi)星細胞的特性。
　?。?）本研究發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶系統(tǒng)成員CAPN1和CAPN3以及半胱天冬酶系統(tǒng)成員CASP3、CASP7和CASP9均能夠在牛骨骼肌衛(wèi)星細胞中表達，隨著牛骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖分化，它們的表達量均處于變化中，這就表明 CAPN1基因和CASP9基因均在肌生成的進程中扮演著不

4、可或缺的角色。同時，我們發(fā)現(xiàn)CAPN1基因和CASP9基因在骨骼肌衛(wèi)星細胞中的表達量情況與其在骨骼肌肌肉組織的表達量情況無相關性，所以，我們認為骨骼肌衛(wèi)星細胞生長發(fā)育的進程與宰后肌肉組織嫩化的進程不相關，并且這些基因的表達量變化并不能反映它們在肌肉組織中的變化情況。
　?。?）本研究通過組織切片技術對不同年齡段的魯西黃牛的肌纖維直徑進行測定分析，研究結果表明隨著魯西黃牛年齡的增長，其肌纖維直徑也在顯著的增長。同時采用實時熒光定量

5、PCR技術對不同年齡段的魯西黃牛的背最長肌中CAPN1和 CASP9的mRNA表達情況進行分析，并將其與肌纖維直徑進行相關性分析，研究結果表明 CAPN1基因 mRNA的表達與肌纖維直徑存在顯著負相關，而CASP9基因mRNA的表達與肌纖維直徑呈正相關，但不顯著。
　　本研究建立起牛骨骼肌衛(wèi)星細胞分離和純化的方法，建立起牛骨骼肌衛(wèi)星細胞的體外擴增培養(yǎng)體系。獲取了 CAPN1基因和 CASP9基因在牛肌肉生長發(fā)育過程中 mRNA的表