重組減毒細菌運送cd839;t細胞表位的機理及攜帶新城疫病毒dna疫苗鼠傷寒沙門氏菌的免疫生物學特性研究

1、揚州大學博士學位論文重組減毒細菌運送CD8T細胞表位的機理及攜帶新城疫病毒DNA疫苗鼠傷寒沙門氏菌的免疫生物學特性研究姓名：潘志明申請學位級別：博士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：焦新安;Claude Leclerc20040501基因在細胞中獲得了表達?？乖岢式Y果顯示，O V A 2 5 7 —2 6 4 和L C M V l l 8 ．1 3 2C D 8 + T 細胞表位基因在抗原提呈細胞( A P C ) 中表達后，可被A P C

2、直接加工、提呈給特異性T 細胞雜交瘤B 3 Z 和n V l H 7 ，并刺激T 細胞雜交瘤分泌產(chǎn)生了I L 一2 。而且，隨著外源基因表達量的增多，其后所獲得的抗原提呈效應也相應增強。此結果說明，重組質粒p G 2 F 、p D G 2 F 和p G I B 構建正確，即抗原表位基因無論是連接在G F P 基因的N 末端還是c 末端，都能獲得成功表達。感染試驗證實，減毒大腸桿菌1 3 A 和2 5 A 以及減毒沙門氏菌S L 7 2

3、0 7 對L K 6細胞或L L d 細胞均具有良好的侵襲能力；而且骨髓源樹突狀細胞( B M D C ) 對重組大腸桿菌具有很好的攝取功能。三種細菌載體均能向L K 6 或L L d 細胞運送真核表達質粒p G 2 F ，并且外源G F P 基因獲得表達，但是對于不同的細胞類型，細菌的運送效率存在差異。L K 6 和L L d 細胞對原核表達的C D 8 + T 細胞表位的抗原提呈結果顯示，L K 6 細胞經(jīng)重組大腸桿菌1 3 A (

4、 p t G 2 F ) 和重組沙門氏菌S L 7 2 0 7 ( p t G 2 F ) 、S L 7 2 0 7 ( p D G 2 F )感染作用，在感染早期( 2 h ) ，L K 6 細胞可提呈1 3 A 和S L 7 2 0 7 表達的O V A 2 5 7 ．2 6 4C D 8 + T 細胞表位，在感染晚期( 4 8 h ) ，這一提呈效應降低；L L d 經(jīng)重組大腸桿菌1 3 A ( p t G 2 F ) 感染，在感

5、染早期( 2 h ) ，L L o 細胞能提呈1 3 A 表達的L C M V l l 8 - 1 3 2C D 8 + T 細胞表位，且隨著感染時間的推移，提呈效應隨之增強。鑒于2 5 A ( p t G 2 F )感染的L K b 和L L d 細胞均未能有效地刺激相應的T 細胞雜交瘤，說明2 5 A 沒有成功地運送兩個T 細胞表位。在L K 6 和L L d 細胞對細菌運送的真核表達質粒的抗原提呈試驗中發(fā)現(xiàn)，重組大腸桿菌1 3 A

6、 ( p G 2 F ) 和2 5 A ( p G 2 F ) 感染L K 6 細胞2 h ，L K b 細胞就可將其表達的O V A C D 8 + T 細胞表位提呈給B 3 ZT 細胞雜交瘤，在感染4 8 h 時，提呈效應獲得溫和的增強；經(jīng)重組沙門氏菌S L 7 2 0 7 ( p G 2 F ) 處理的L K 6 細胞，在早期( 2 h )缺乏刺激相應T 細胞雜交瘤的能力，但在晚期( 4 8 h ) 則表現(xiàn)出提呈O V A C D

7、 8 + T細胞表位的活性。這說明，1 3 A 和2 5 A 所攜帶的h l y 基因有助于真核表達質粒在細胞中的釋放和表達。B M D C 對減毒大腸桿菌運送的T 細胞表位的抗原提呈結果表明，B M D C 經(jīng)1 3 A ( p t G 2 F ) 和1 3 A ( p G 2 F ) 作用后，均能有效提呈O V A 2 5 7 - 2 6 4 和L C M V 1 1 8 - 1 3 2C D 8 + T 細胞表位給相應的T 細胞雜