腺病毒介導nurr1基因轉柒c17.2神經干細胞移植治療實驗性局灶性腦梗死

1、中山大學碩士學位論文腺病毒介導NURR1基因轉柒C17.2神經干細胞移植治療實驗性局灶性腦梗死姓名：黎祥噴申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：邢詒剛20040512腺病毒介導N U R R l 基因轉染C 1 7 ．2 神經干細胞移植治療實驗性局灶性腦梗死 碩士學位論文系。外源N S C s 移植或投入外源性的細胞因子能夠進一步激活自身N S C s ，促進神經結構和功能更明顯的恢復。更重要的是，移植到宿主腦內的N S C s 能

2、向病灶部位的方向移行，與宿主細胞整合，體內增殖，并能根據周圍微環(huán)境的誘導向病變所缺失的細胞方向分化，從而使受損的神經結構和功能修復。2 ．基因治療腦梗死的現狀近年來，隨著對腦梗死病理生理機制、分子機制認識的不斷深入，以及分子生物學、基因工程的高速發(fā)展，使腦梗塞的基因治療越來越接近現實。目前，腦梗死基因治療策略的焦點主要集中在腦梗死發(fā)生2 周內如何增強神經保護基因或者抑制被認為有害的基因，特別是最初5 天。腦梗死發(fā)生后，在缺血半暗帶( i

3、 s c h e m i c p e n u m b r a ) ，按一定次序出現炎癥性級聯(lián)( i n f l a m m a t o r y c a s c a d e ) 。針對腦梗死后離子梯度破壞、能量衰竭和炎癥性級聯(lián)的基因治療試驗已經開展，研究最多的候選基因是炎癥性級聯(lián)基因。3 ， 神經干細胞介導實現神經移植和基因治療的綜合治療腦梗死的體外基因治療，須在體外以目的基因轉染靶細胞，然后將經轉染的靶細胞輸入到體內。如果以神經干細胞為

4、靶細胞，則有可能同時達到神經干細胞移植和基因治療的目的，實現神經移植和基因治療綜合治療。C 1 7 ．2 神經干細胞是由來源于小鼠小腦的原代神經干細胞轉入v 2 m y c 基因構建成功的永生化神經干細胞系，帶有標志基因L a c Z ，具有多向分化潛能。N U R R l 屬于核受體超家族，孤兒核受體沒有明確的配體，它們能以單體形式與相應D N A 序列或與視黃醛x 受體結合為異二聚體激活D N A 的轉錄。N U R R l基因轉染

5、至N S C s 系后，能促進N S C s 向神經元方向分化。本實驗選擇N U R R l 為目的基因。以C 1 7 ．2 細胞系為靶細胞，進行腦梗死體外基因治療、神經干細胞移植治療的實驗研究。主要工作：①構建p A d e a s y - N U R R l 重組復制缺陷性腺病毒。②觀察N U R R l 基因轉染對C 1 7 ．2 神經干細胞體外分化的影響。③應用C 1 7 ．2 和N U R R l 基因修飾C 1 7 ．2 神