自發(fā)性高血壓大鼠新的高血壓相關基因—hsp70.2的實驗研究

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文自發(fā)性高血壓大鼠新的高血壓相關基因—HSP70.2的實驗研究姓名：余祖善申請學位級別：碩士專業(yè)：內科學（心血管）指導教師：楊德業(yè);張懷勤20070501溫州醫(yī)學院碩士學位論文自發(fā)性高血壓大鼠額的高血壓相關基因- - H S P 7 0 ．2 的實驗研究中文摘要目的：從1 3 周齡的自發(fā)性高血壓大鼠( S p o n t a n e o u s l y H y p e r t e n s i v eR a t s 。

2、S H R )和正常血壓大鼠( W i s t a r —K y o t o 。W K Y ) 的阻力血管( 腸系膜動脈第二、三級分支) 和腎臟組織中提取總R N A ，與含1 0 ，0 0 0 個基因及E S T 片斷的S B C —R —R C —l O o _ 1 3大鼠表達芯片進行雜交，找出差異表達的基因，并經R T - P C R 和r e a l - t i m eR T - P C R初步篩選出高血壓新的相關基因。為進一步

3、了解高血壓病的分子機制提供新的思路和線索。方法：( 1 ) 取1 3 周齡的雄性S H R 和W K Y 各3 只，分為S H R 和W K Y 組。以0 ．5 ％戊巴比妥腹腔麻醉后，用M e d L a bV5 ．0 生物信號采集處理系統(tǒng)記錄頸動脈血壓，取阻力血管( 腸系膜動脈第二、三級分支) 和腎臟一7 0 “ C 冷凍保存?zhèn)溆?，提取S H R 和W K Y 的腸系膜動脈和腎臟的總R N A 。經R N A 電泳和分光光度計進行總R

4、 N A的質量鑒定后，將同組的3 只大鼠的腸系膜動脈和腎臟的總R N A 等比例混合。逆轉錄法將C y 3 一d U T P 標記S H R 組c D N A ；C y 5 一d U T P 標記W K Y 組e D N A ，然后與含1 0 ，0 0 0個基因的S B C —R - R C - 1 0 0 - 1 3 大鼠表達芯片雜交，洗滌。A g i l e n tG 2 6 5 5 A A 掃描芯片，用G e n e s p r

5、i n g 分析實驗結果，篩選出在S H R 表達上調和下調的基因。( 2 ) 選取芯片篩選出有表達差異的5 個基因，設計特異的P C R 引物，用R T —P C R初步篩選排除假陽性。再設計特異的實時R T - P C R 引物，并經預實驗確保沒有雜帶等。用嵌合熒光法( S Y B RG r e e n I ) 實時R T —P c R 進一步證實陽性基因表達的m R N A 水平。結果：測血壓S H R 組血壓( 2 2 5 4