自發(fā)性高血壓大鼠致病新相關(guān)基因—SLC7A8的實驗研究.pdf

1、目的：使用含10,000個基因及EST片斷的SBC-R-RC-100-13大鼠表達譜芯片篩查13周齡自發(fā)性高血壓大鼠組織標本與正常大鼠之間的異常表達基因.并經(jīng)RT-PCR和real-time RT-PCR驗證差異表達基因.為進一步了解高血壓病的分子機制提供新的思路和線索. 方法：(1)收集13周齡的雄性SHR和WKY各3只,分為SHR和WKY組.以0.5﹪戊巴比妥腹腔麻醉后,用MedLab V 5.0生物信號采集處理系統(tǒng)記錄頸動

2、脈血壓后,取阻力血管(腸系膜動脈第二、三級分支)和腎臟-70℃冷凍保存?zhèn)溆?提取腸系膜動脈和腎臟的總RNA.將同組的3只大鼠的腸系膜動脈和腎臟的總RNA等比例全部混合.逆轉(zhuǎn)錄法將Cy3-dUTP標記SHR組eDNA;Cy5-dUTP標記WKY組cDNA,然后與含10,000個基因的SBC-R-RC-100-13大鼠表達芯片雜交、洗滌.Agilent G2655AA掃描芯片,用Getlespring分析實驗結(jié)果.(2)隨機選取其中芯片篩選

3、出的4條差異表達基因,用RT-PCR和嵌合熒光法(SYBRGreen I)實時RT-PCR進一步證實陽性基因表達的mRNA水平. 結(jié)果：測血壓SHR組血壓(225±8 vs 168±6)mmHg明顯高于WKY組(88±6 vs 66±5)mmFlg(P<0.01).從兩組的芯片的結(jié)果分析中,初步獲得高血壓的相關(guān)基因120個,共同表現(xiàn)為上調(diào)的基因38條,下調(diào)的基因82條.按其作用和功能可以將這些基因歸類,包括涉及免疫,細胞周期調(diào)控

4、、細胞調(diào)亡,細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白和核轉(zhuǎn)錄因子,氧化應(yīng)激,直接參與代謝的酶,鈣結(jié)合蛋白,EST等.選取4條基因,經(jīng)RT-PCR.驗證的結(jié)果發(fā)現(xiàn)SL,C7.A8(solute carrier family 7,member 8)基因和Lcn7(Rattus norvegicus lipocalin 7)基因在SHR中表達上調(diào);S100b(S100 calciam-binding protein,beta)基因在SHR中表達下調(diào).上述基因再經(jīng)r

5、eal-time RT-PCR驗證發(fā)現(xiàn)只有SLC7A8基因存在顯著表達差異,在SHR中上調(diào)9.3倍(P<0.01),內(nèi)參照GAPDH在兩組無顯著差異(P>0.05). 結(jié)論：基因芯片的結(jié)果證明了多基因參與高血壓的形成,包括涉及免疫分子、細胞周期調(diào)控蛋白、生長因子、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白和核轉(zhuǎn)錄因子、直接參與代謂十的酶和鈣結(jié)合蛋白等.但基因芯片篩選表達譜的數(shù)據(jù)有很多干擾因素.進一步經(jīng)RT-PCR和定量RT-PCR驗證篩選出SL,C7A