烏頭aconitumcarmichaelidebx.種苗的快速繁殖研究及種質資源的rapd和aflp分析

1、四川農業(yè)大學碩士學位論文烏頭（Aconitum carmichaeli Debx.）種苗的快速繁殖研究及種質資源的RAPD和AFLP分析姓名：田迎秋申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：黃玉碧20070501四川農業(yè)大學碩士學位論文S t u d y o nT h e G e r m p l a s mo f A c o n i t u m c a r m i c h a e l i D e b x ．B yR A P

2、D a n d A F L P M a r k e r s a n d R a p i d P r o p a g a t i o n T h eS e e d l i n g so f I tT i a n y i n g q i u ( M a j o r ：B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a rB i o l o g y )D i r e c t e d b y P r o

3、f e s s o r H u a n g Y u b iA B S T R A C TI tw a s a l le f f e c t i v ew a y i np r o d u c t i o nf o r t h ev a i l 啊s o u r c eo f A c o n i t u mc a r m i c h a e l iD e b x ．b yb r e e d i n g s y s t e m a t i

4、c a l l ya n dh y b r i db r e e d i n g b a s e do nc o l l e c t i n gu n i v e r s a l l yg e r m p l a s m ；髂w e l l a s t h r o u g h t i s s u e c u l t u r e i n v i t r o ．c o n s t r u c t i n gs y s t e m o fr

5、a p i dp r o p a g a t i o ns e e d l i n g s ，w h i c hp r o v e da n c o n v e n i e n ta n dp r o f i t a b l ea s s e s s m e n t t o s o l v ed i f f i c l t yo f s e e d l i n g s ．I nt h i sr e s e a r c h ，g e r

6、m p l a s m r e s o u r c e s o f A c o n i t u mc a r m i c h a e l i D e b x ．w e r es t u d i e d b yR A P D a n dA F L P m o l e c u l a ri d e n t i f i c a t i o nt e e h e n i q u er e s p e c t i v e l y ，a l s o

7、t i s s u e c u l t u r e ／nv i t r o W a S p e r f o r m e d , t h e r e s u l t sa sf o l l o w ：1 W i m t i s s u e c u l t u r em e t h o d ．1 5 、9 a n d 1 2m e d i u mo fh o r m o n e sc o m b i n a t i o n sw e r e

8、d e v e l o p e d t oi n d u c ec a l l u so f d i f f e r e n te x p l a n t d e r i v e d f r o m A c o n i t u m c a r m i c h a e l i D e b x ．、i n d u c e d t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f c l u s t e r b u

9、d s f r o m c a l l u s a n d i n d u c e d t h e r o o t i n g o fr e g e n e r a t e d s e e d l i n g s ，r e s p e c t i v e l y ．F o rA c o n i t u mc a r m i c h a e l iD e b x ．，t h e i d e a l c u l t u r em e d i

10、 af o rc a l l u si n d u c t i o no f s t e m - t i p sa n ds t e ms e g m e n t s W a S i d e n t i f i e d t ob eM S + N A AO ．2 m g I ：1 + 6 一B A2 ．0 m e r l e + P V P ( o r A C ) 3 ．0g ／L ．T h ei d e a l c u l t u r

11、 em e d i af o rc a l l u si n d u c t i o nO nl e a v e sW a s i d e n t i f i e dt ob eM S + N A A 0 ．2m g ／L + 6 - B A 4 ．0r a g ／L + P V P ( o rA C ) 3 ．0 g ／L ．T h e i d e a lc u l t u r em e d i a f o rc a l l u sp

12、 r o p a g a t i o n a n d c l u s t e r b u d si n d u c t i o n W a Si d e n t i f i e dt ob eM S + N A A 0 ．2 m g ／L + 6 - B A2 ．5 m g ，L + L H 2 0 0m g ／L + P V P 3 ．0g ／La n dM S + N A A O ．1 m g ／L + 6 - B A 2 ．0 m

13、 g ／L + L H 2 0 0 m ∥L + P V P 3 ．0g ／L ．T h ei d e a lc u l t u r em e d i a f o r r o o t i n gi n d u c t i o n W a S i d e n t i f i e d t ob eM S + I B A l m g ／L + P V P 3 ．0g ／L ．2 I n d u s t r i a l i z e dr a p

14、 i d p r o p a g a t i o n o f s e e d l i n g s c o u l d b e r e a l i z e db y ／nv i t r o t i s s u ec u l t u r ew i t hd i f f e r e n t e x p l a n to f A c o n i t u mc a r m i c h a e l i D e b x ．s u c ha ss h

15、o o t t i p s 、l e a v e sa n d s t e ms e g m e n t s w i t ho r w i t h o u ta x i l l a r yb u d s ．3 T o t a lg e m o m i cD N A w e r ee x t r a c t e df r o ms a m p l e dm a t e r i a l sb yi m p r o v e d2 ％C T A

16、 Bm e t h o d , a n dR A P D m a r k e r s w e r ea m p l i f i e d t od e t e c t e d t h es a m p l e d 2 3g e r m p l a s m sb y1 5r a n d o mp r i m e r s ．1 5 p r i m e r s p r o d u c e d2 4 2D N A s e g m e n t s