越橘種質(zhì)資源的RAPD鑒定及遺傳關(guān)系分析.pdf

1、本論文建立了越橘葉片基因組DNA快速提取方法及RAPD反應(yīng)體系，并利用RAPD技術(shù)對(duì)17份越橘(Vaccinium spp．)材料(包括兩份野生越橘資源及15份越橘栽培品種)的遺傳差異及親緣關(guān)系進(jìn)行了分析，為今后越橘種質(zhì)資源的鑒定、保存、利用及優(yōu)良品種選育提供了科學(xué)依據(jù)。 試驗(yàn)結(jié)果表明，CTAB法提取越橘基因組DNA的效果優(yōu)于SDS和高鹽低pH值法。在CTAB法基礎(chǔ)上建立了能夠簡(jiǎn)便、快速分離高質(zhì)量越橘基因組DNA的方法，此方法提

2、取的DNA樣品的OD<,260nm>/OD<,280nm>值在1.7-2.0之間，DNA產(chǎn)量平均為68μg/g，完全可以滿足PCR、RAPD等分子生物學(xué)研究對(duì)DNA質(zhì)量的要求。實(shí)驗(yàn)建立的越橘RAPD最佳反應(yīng)體系為：20μL體系中，dNTPs濃度為0.25 mmol/L、模板DNA濃度為0.5-1.5ng/μL、引物濃度為1pmol/μL、Taq酶用量1.0 U；退火溫度37℃。 試驗(yàn)從70種隨機(jī)引物中篩選出15個(gè)重復(fù)性好、多態(tài)性

3、高的隨機(jī)引物，共擴(kuò)增出115個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)113個(gè)，多態(tài)率占98.26％;材料間遺傳相似系數(shù)變化范圍為0.4870-0.9130。栽培品種中Coville與兩個(gè)野生種間遺傳距離最大，Blomidon與篤斯越橘間相似性系數(shù)最大，Bluechip與紅豆越橘間相似性系數(shù)最大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，RAPD技術(shù)可以用于越橘品種的鑒定，用一種引物可以實(shí)現(xiàn)遺傳背景相同的品種的鑒別，多種引用配合可以對(duì)所有供試材料進(jìn)行鑒別。 用UPGMA法建