福建栽培和野生香蕉種質(zhì)資源離體保存及RAPD分析.pdf

1、本研究對福建香蕉種質(zhì)資源進行調(diào)查，并以福建53份香蕉種質(zhì)資源為材料，進行了離體保存、形態(tài)學(xué)鑒定等研究。同時，利用RAPD技術(shù)進行了福建10個主要香蕉品種以及福州、三明兩地野生蕉群體的遺傳多樣性分析和聚類分析。主要研究結(jié)果如下： 1．福建野生香蕉的調(diào)查和觀察 福建廣泛分布有野生香蕉。福州野生蕉會大量結(jié)籽，可以判斷為二倍體。按照Simmondsand Shepherd(1955)的分類方法，二倍體香蕉中，福州野生蕉絕大多數(shù)性

2、狀與尖葉蕉相同，得分為22。因此將福州野生蕉歸為AA類群。不過，在胚珠排列和果實形態(tài)上，福州野生蕉與典型的AA原始種的特征明顯不同。因此，福州AA野生蕉可能在進化上與其它地方的AA原生蕉已經(jīng)產(chǎn)生一定的遺傳差異，或者在進化過程中獲得了少量的B染色體組的基因。三明野生蕉與福州野生蕉有相異之處。三明野生蕉得分為47，歸為AB類。 2．福建香蕉種質(zhì)資源的試管苗離體種質(zhì)保存 試驗結(jié)果表明：香芽蕉叢生芽苗以MS+甘露醇30g/L+6

3、-BA1.0 mg/L+IAA0,1mg/L配方的培養(yǎng)基來保存為宜，室溫控制在20±1℃，每天16h光照，光強1000Lux左右條件下，能夠保存培養(yǎng)6個月，不會黃化死亡；在培養(yǎng)基中加入甘露醇可以有效抑制試管苗生長，甘露醇的抑制效果與蔗糖相比更強烈：添加BA的培養(yǎng)基比KT的，可忍耐更長繼代時間；低濃度的不同生長素對試管苗保存影響不明顯。采用優(yōu)化方法保存了福建栽培和野生香蕉種質(zhì)資源53份。 3．香蕉基因組DNA提取以及RAPD-PC

4、R條件的優(yōu)化 應(yīng)用改良GTAB法提取各品種類型的香蕉基因組DNA，獲得了較高產(chǎn)量和質(zhì)量的DNA。并對RAPD反應(yīng)程序中的一些重要參數(shù)進行摸索和優(yōu)化，建立了穩(wěn)定的、適用于福建香蕉遺傳多樣性和遺傳分化研究的RAPD-PCR反應(yīng)體系。經(jīng)過優(yōu)化后的反應(yīng)體系為：在25μL的反應(yīng)體系中，模板DNA栽培蕉用量為50ng、野生蕉為62.5ng，引物濃度為0.81μmol/L,Taq酶的用量栽培香蕉為1.0U，二倍體野生蕉為2.0U，mg<'2+

5、>濃度和dNTP濃度分別是2.5mmol/L、300μmaol/L。循環(huán)參數(shù)：退火溫度37℃、退火時間60s，延伸時間120s、循環(huán)次數(shù)為45個循環(huán)。 4．福建10個栽培品種類型和野生種親緣關(guān)系的RAPD分析 對福建10個栽培品種類型和野生種進行RAPD分析結(jié)果表明：福州野生蕉和三明野生蕉在閾值在0.52劃分時，與其他三倍體栽培種區(qū)別開來；在閾值在0.30劃分時，又可將三明野生蕉、福州野生蕉區(qū)別開來，劃分清晰。這與Sim

6、mond分類法的結(jié)果一致。但是，從遺傳距離表可看出福州野生蕉與三倍體．AAA香蕉的遺傳距離較與ABB大蕉遺傳距離大，由此可以得出福州野生蕉較三明野生蕉與ABB型香蕉的遺傳距離較近，與AAA型香蕉的遺傳距離較遠。這與Simmond分類法的結(jié)果有所差異。這與三明野生蕉為AB雜合體、自交后代分離，以及實生繁殖引起的自然變異有關(guān)。 5．利用RAPD技術(shù)進行三明和福州野生蕉群體的遺傳多樣性和聚類分析 應(yīng)用POPGENE軟件對三明野

7、生蕉16個植株和福州野生蕉21個植株進行了RAPD結(jié)果的多態(tài)性比較和聚類分析，研究結(jié)果表明：(1)三明野生蕉Nei，S基因多樣性(H)為0.4110，福州為0.2399;福州、三明野生蕉平均等位基因數(shù)為2.0；三明野生蕉的有效等位基因數(shù)為1.7164，福州為1.3249；三明野生蕉Shannon信息指數(shù)為0.5995，福州為0．4003；說明三明野生蕉和福州野生蕉具有高水平的遺傳多樣性水平，這與其生長在地理條件比較惡劣、氣候多變、海拔較