t型鈣通道cav3.3在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠腦表達(dá)的變化及意義

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文T型鈣通道CaV3.3在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠腦表達(dá)的變化及意義姓名：唐衛(wèi)華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外）指導(dǎo)教師：馮華20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文方法：1 ．建立視交叉前注血及枕大池注血的兩種大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血的動(dòng)物模型，觀察其死亡率、生理參數(shù)，并結(jié)合神經(jīng)行為學(xué)判斷( G a r c i a 神經(jīng)功能評(píng)分、B e a mW a l k i n g任務(wù)、M o r r i s 水迷宮任務(wù))

2、 及尼氏染色評(píng)價(jià)S A H 大鼠的損傷程度及模型的有效性。2 。借助常規(guī)免疫組化及R T - P C R 在不同水平觀察C a V 3 。3 在正常成年大鼠的三個(gè)腦區(qū)的分布，應(yīng)用免疫熒光多標(biāo)及激光共聚焦顯微鏡觀察C a V 3 ．3 在神經(jīng)元的表達(dá)。3 ．建立視交叉前注血的大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血的動(dòng)物模型，借助免疫熒光多標(biāo)及共聚焦顯微鏡觀察C a V 3 ．3 在S A H 大鼠的三個(gè)腦區(qū)的表達(dá)；應(yīng)用T 型鈣通道相對(duì)特異的拮抗劑M i b

3、e f r a d i l 、L 型鈣通道拮抗劑V e r a p a m i l 及C a V 3 ．3 反義寡核苷酸進(jìn)行干預(yù)，觀察其死亡率、生理參數(shù)，并結(jié)合神經(jīng)功能判斷評(píng)價(jià)干預(yù)治療的效果。結(jié)果：1 ．視交叉前注血模型的死亡率為2 0 ％；術(shù)后G a r c i a 神經(jīng)功能評(píng)分均低于假手術(shù)組及對(duì)照組，但僅視交叉前注血組與假手術(shù)組及對(duì)照組比較有顯著差異；術(shù)后b e a mw a l k 評(píng)分提示S A H 大鼠出現(xiàn)精細(xì)運(yùn)動(dòng)障礙( P

4、< 0 ．0 1 ) ，視交叉前注血模型更為明顯；M w M 任務(wù)顯示術(shù)后S A H 建模大鼠空間學(xué)習(xí)能力下降( P < 0 ．0 1 ) ，視交叉前注血模型更為明顯。枕大池注血組血液在枕骨大孔區(qū)及小腦范圍內(nèi)分布較多，視交叉前注血組可見主要分布于前、后顱窩及蝶鞍處。注血組尼氏染色陽性細(xì)胞明顯減少，其中以皮質(zhì)及海馬腦區(qū)最為明顯；兩種注血方式對(duì)比，視交叉前注血組尼氏陽性細(xì)胞減少明顯。2 ．常規(guī)免疫組化觀察到C a V 3 ．3

5、在端腦、間腦、腦干和小腦中都有廣泛分布，其中大腦皮質(zhì)中C a V 3 。3 陽性細(xì)胞最為密集，在海馬的各區(qū)及齒狀回也可見不同程度的C a V 3 ．3 陽性細(xì)胞，而在下丘腦則在乳頭體內(nèi)側(cè)核區(qū)多見。在大腦皮質(zhì)中C a V 3 ．3 陽性神經(jīng)元較為密集。海馬區(qū)陽性神經(jīng)元散在分布。下丘腦區(qū)則少見C a V 3 ．3 陽性神經(jīng)元，但可見數(shù)量較多的C a V 3 ．3 陽性的神經(jīng)纖維樣結(jié)構(gòu)。R T - P C R 顯示大鼠腦皮質(zhì)、海馬、下丘腦均有

6、C a V 3 。3m R N A 的，其中皮質(zhì)表達(dá)略高海馬及下丘腦( P < O 。0 1 ) 。3 。S A H 建模后3 d 、7 d C a V 3 ．3 陽性神經(jīng)元細(xì)胞比率有增多趨勢(shì)。術(shù)后各組B e a mw a l k 任務(wù)評(píng)分均低于假手術(shù)組( P < O ．0 1 ) ；C a V 3 ．3 反義寡核苷酸組、米貝地爾、維拉帕米對(duì)S A H 后大鼠有治療作用，可以改善B e a m w a l k 評(píng)分；M W