abo疑難血型鑒定和新生兒溶血病 ppt課件

1、ABO疑難血型鑒定和新生兒溶血病,,2,輸血前免疫學(xué)檢測,輸血前檢測： 血型鑒定：ABO血型（正反定型）、 RhD血型 抗體篩選 交叉配血：主側(cè)、次側(cè) 目的：準(zhǔn)確定型，選擇相容血液。意義：輸血安全、及時(shí)、有效。,3,人類血型系統(tǒng),30個(gè)血型系統(tǒng)目前被識別的血型抗原的總數(shù)達(dá)到328個(gè)，其中有284個(gè)抗原分別屬于30個(gè)血型系統(tǒng),4,紅細(xì)胞血型系統(tǒng),最具臨床意義：ABO、Rh臨床意義：輸血安全、器官移

2、植、新生兒溶血病。急性溶血性輸血反應(yīng)：ABO抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能夠激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞在血管內(nèi)立即被破壞。 輕癥：發(fā)熱、腰背痛、血紅蛋白尿或手術(shù)創(chuàng)口滲血。 重癥：DIC、休克、急性腎衰竭，甚至死亡。,5,ABO血型系統(tǒng),抗原抗體相對應(yīng)：紅細(xì)胞上缺乏相應(yīng)抗原，血清中有相應(yīng)抗體，組織細(xì)胞分泌液中有ABH抗原。其它血型系統(tǒng)沒有的特性。免疫原性最強(qiáng)的血型系統(tǒng)，抗體主要是IgM性質(zhì)，可引起急性溶血性輸血反應(yīng)，在臨床輸血中的

3、作用最重要。,6,ABO血型分子基礎(chǔ),ABO基因組DNA長度約30Kb，由7個(gè)外顯子組成。A和B基因編碼的蛋白都是353個(gè)氨基酸，O基因編碼的蛋白只有115個(gè)氨基酸。 B基因在cDNA上有七個(gè)核苷酸與A1基因不同，其中四個(gè)核苷酸的變化造成了氨基酸序列的變化。O基因有兩種： ①O1基因：最常見的O基因，在cDNA的第261位G缺失，提前終止轉(zhuǎn)移酶的翻譯，使其編碼的蛋白只有115個(gè)氨基酸。 ②O2基因：261位G

4、不缺失，很少見的O基因。,7,ABO抗原的發(fā)育,胚胎期開始產(chǎn)生，出生時(shí)還未發(fā)育完全，其抗原數(shù)只有成人的25～50％，與抗A和抗B血型試劑的反應(yīng)也較成人弱。新生兒ABO抗體也很弱，故新生兒定ABO血型是不需要反定型，通常在三個(gè)月后才進(jìn)行反定型。,8,ABO血型鑒定方法,玻片法：瓷板、紙片試管法：經(jīng)典的試管離心方法仍被認(rèn)為是最可靠 的ABO定型方法。 微量板法(U型或V型板)：大量標(biāo)本微柱凝膠法（

5、卡式）：混合外觀mf分子生物學(xué)方法,9,ABO亞型,10,ABO亞型,11,ABO亞型,12,紅細(xì)胞混合凝集(mf),特征：有部分凝聚細(xì)胞，周圍有大量游離細(xì)胞類型：按抗原來源分，可分為外源性和內(nèi)源性ABO亞型：A3、B3嵌合體：孿生子、雙精嵌合造血干細(xì)胞移植、異型輸血、胎母出血檢測技術(shù)：分子生物學(xué)技術(shù),13,cisAB,cisAB的血清學(xué)特征：與抗A的反應(yīng)強(qiáng)度：和A1細(xì)胞接近；與抗B的反應(yīng)強(qiáng)度：弱于正常B，易被誤定為B3

6、/Bx,可顯混合外觀凝集血清常含有弱抗BH抗原性強(qiáng)家系調(diào)查和分子生物學(xué)方法確認(rèn)cisAB表型,14,ABO正反定型不符合原因,假陰性結(jié)果沒有加抗體試劑忽視溶血結(jié)果試劑和細(xì)胞比例不當(dāng)離心時(shí)間、速度不足試劑失效、用法錯(cuò)誤記錄或結(jié)果判讀錯(cuò)誤假陽性結(jié)果離心時(shí)間、速度過大試劑、細(xì)胞、鹽水污染實(shí)驗(yàn)容器不潔記錄或結(jié)果判讀錯(cuò)誤,15,ABO正反定型不符合原因,正定型：抗原ABO亞型、cisAB疾病致抗原減弱：白血病、淋巴

7、瘤紅細(xì)胞被自身抗體致敏紅細(xì)胞被細(xì)菌污染造成多凝集現(xiàn)象獲得性B抗原：胃腸道疾病、酸化試劑臍帶血中有Wharton膠混合外觀凝集：亞型、骨髓移植、異型輸血、嵌合體,16,ABO正反定型不符合原因,反定型：抗體 緡錢狀凝集：球蛋白過高自身抗體：冷凝集素疾?。喊籽　盒粤馨土?、骨髓移植、使用免 疫抑制劑、免疫缺陷、低丙種球蛋白血癥年齡因素：新生兒、老年人近期內(nèi)血漿置換同種抗體：通常IgM性質(zhì),17,ABO疑難血型鑒定方法

8、,了解樣本情況：病史、采樣 進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)重新采樣紅細(xì)胞洗滌后配成3～5%濃度用試管法，實(shí)驗(yàn)管在室溫和4℃放置30分鐘，陰性者用顯微鏡觀察結(jié)果。更換新的試劑更換試驗(yàn)方法,18,ABO疑難血型鑒定方法,增加試劑：抗A1 、 抗H、 抗AB增加細(xì)胞：自身、O細(xì)胞、臍血細(xì)胞(i抗原)唾液血型物質(zhì)鑒定吸收放散試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),19,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac

9、 Bc Oc 0 4＋ 4＋ 0 0 0分析：血型可能是B型、A亞B型 抗體：患者年齡（老人/嬰兒）、疾病診斷（白血 病、MM、免疫球蛋白缺乏等） 基因檢測,20,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB 抗A1 Ac Bc Oc4+ 0 4+ 0 0/+ 4＋ 0

10、分析：血型可能是A2亞型，血清中常有抗A1抗體。,21,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac Bc Oc 0/+ 0 ±/+ 0 4＋ 0分析：患者血型可能是A亞型。 如果是血液病患者，抗原減弱的可能性很大。,22,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac Bc Oc2

11、＋ 4＋ 4＋ 4＋ 2＋ 2＋分析：患者血型可能是B型。 有自身抗體：冷凝集素,23,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB 抗H Ac Bc Oc4＋ 2+/mf 4＋ 3+ 0 ＋ 0分析：患者血型可能是cisAB型、AB亞型。 基因檢測、家系分析,24,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B

12、 抗AB Ac Bc Oc 0 0/+ 0/+ 4＋ 0/+ 0 分析：患者血型可能是B亞型。 吸收放散試驗(yàn)、血型基因,25,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac Bc Oc 0 0 0 4＋ 4＋ 2＋分析：患者血型可能是O型，血清中有意外抗體。,26,

13、ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac Bc Oc 自身 4＋ 2＋ 4＋ 0 4＋ 0 0分析：患者血型可能是A型，獲得性B。 了解疾病，酸化試劑,27,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB 2＋ 2＋ 2＋ 分析：患者是新生兒，只做正定型。血型可能是O型，臍帶血

14、中有Wharton膠。洗滌被檢細(xì)胞。,28,ABO正反定型不符分析,抗A 抗B 抗AB Ac Bc Oc 4＋ 0 4＋ 2＋ 4＋ 2＋分析：患者的血型可能是A型。 緡錢狀凝集：多發(fā)性骨髓瘤或巨球蛋白血癥患者。,29,新生兒溶血病,新生兒溶血病(HDN)的定義HDN的主要分類HDN的檢測HDN的治療輸血指征輸血策略,30,新生兒溶血病的定義,新生兒

15、溶血病( hemolytic disease of newborn ，HDN ) 是母嬰血型不合引起的同種免疫性溶血性疾病，胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體循環(huán)致使母體產(chǎn)生相應(yīng)的IgG類抗體，孕期母親的IgG血型抗體通過胎盤與胎兒紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生不同程度溶血的疾病。,31,新生兒溶血病的癥狀,流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎黃疸、貧血、肝脾腫大膽紅素腦病(核黃疸）：智力發(fā)育不全或死亡HDN檢測已被列為孕婦圍產(chǎn)期保健的重要內(nèi)容。,32,高膽紅素血癥,指新生兒

16、血清總膽濃度超過220μmol/L(13mg/dL)，以間膽升高為主，是新生兒期常見疾病之一。重者產(chǎn)生核黃疸,可損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成智力發(fā)育不全甚至危及生命。按《實(shí)用新生兒學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)分度: 220～ 277μmol/L為輕度 277～342μmol/L為中度 > 342μmol/L為重度,33,高膽紅素血癥,感染、圍產(chǎn)因素、母乳性黃疸敗血癥、肺炎、早產(chǎn)、新生兒溶血病等,34,新生兒溶血病的分類,ABO

17、HDN：第1胎即可發(fā)病，通常臨床癥狀較輕。Rh HDN：一般發(fā)生在第2胎或多次妊娠后,黃疸出 現(xiàn)早、發(fā)展迅速，臨床癥狀重。MN HDN：臨床上少見，病情較輕。,35,ABO新生兒溶血病,母嬰ABO血型不合母血清IgG抗A/抗B抗體效價(jià)越高，發(fā)病率越高，發(fā)生黃疸的時(shí)間越早。病情較輕：常用藍(lán)光照射、輸注白蛋白輸血：糾正貧血換血：極少,36,ABO新生兒溶血病,37,ABO新生兒溶血病,ABO血型不合對R

18、h血型不合的妊娠有保護(hù)作用。Rh陰性母親的胎兒如同時(shí)ABO+Rh血型不合,胎兒Rh陽性紅細(xì)胞進(jìn)入母體后，立即被母親血中的抗A/抗B抗體致敏后破壞, 就不能作為抗原刺激母體產(chǎn)生抗D抗體。,38,Rh血型系統(tǒng)概述,ISBT符號：RH, 數(shù)字：004Rh基因：主要是RHD和RHCE(高度同源、緊密連鎖)，均為10個(gè)外顯子編碼D和 C 、c、 E 、e抗原。染色體定位：1p36.13-34.3（短臂）,39,染色體上位置： 1p36.

19、13-34.3,40,Rh血型的遺傳,主要抗原：D、C、E、c、e 5種（其它：Cw、Cx、G、es、CG、Dw ...... ）父母的基因組合決定了其子女的基因組合（孟德爾遺傳定律）遺傳的不對等性：某些組合比另一些組合常見CDe/CDe>cDE/cDE>cde/cde>CDE/CDE最重要的是有無D基因（D抗原最具免疫原性）,41,RhD抗原,RhD陽性：遺傳到了D基因，有D抗原，紅細(xì)胞與抗D試劑反應(yīng)陽性，稱為

20、RhD陽性。RhD陰性：沒有遺傳到D基因或無效D基因，無D抗原，紅細(xì)胞與抗D試劑反應(yīng)陰性，稱為RhD陰性。不同說法：RhD陰性＝Rh陰性＝D陰性 RhD陽性＝Rh陽性＝D陽性,42,Rh抗原的發(fā)育和分布,與ABO抗原不同，Rh抗原在胎兒早期就得到了充分的發(fā)育，并在整個(gè)成年期都維持這種狀態(tài)。臍血或新生兒紅細(xì)胞的Rh血型與成人一樣強(qiáng)。只存在于紅細(xì)胞膜（包括臍血紅細(xì)胞）不存在于其它組織細(xì)胞、體液、分泌液

21、血小板、白細(xì)胞上無Rh抗原,43,RhD血型的孟德爾遺傳,44,人群RhD陰性頻率,中國人群大部分民族<1%中國漢族：0.3％--0.5%左右一些少數(shù)民族（哈薩克、烏茲別克、塔塔爾及柯爾克孜族）2-5%北歐白人：15%西非黑人：5％,45,Rh陰性表型頻率,46,Rh新生兒溶血病,母嬰Rh血型不合常見抗體：抗D、抗E、抗c+抗E、抗D+抗C罕見：母親-D-，子CDe，血清中有抗Hro.常于生后24h內(nèi)出現(xiàn)黃疸并迅速加

22、重,如不及時(shí)治療,可形成核黃疸而造成死亡。換血療法是治療Rh溶血病的最有效方法。,47,新生兒溶血病的檢測,父母嬰標(biāo)本進(jìn)行血型鑒定(ABO、Rh）母血清進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選患兒標(biāo)本進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn) 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 血清游離試驗(yàn) 抗體釋放試驗(yàn)：3項(xiàng)試驗(yàn)中敏感度最高、是判 斷HDN最有力的證據(jù)。,48,ABO新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn),49,Rh新生兒溶血病診斷標(biāo)

23、準(zhǔn),50,新生兒溶血病的治療,產(chǎn)前：孕婦抗體檢測、中藥、血漿置換藍(lán)光療法：最常用白蛋白輸注輸血：紅細(xì)胞、血漿換血療法：重癥Rh HDN，是治療Rh HDN最快速 有效的方法。,51,輸血指征,貧血：血紅蛋白400μmol/L的Rh HDN時(shí)可考慮換血治療。,52,換血療法原理,治療重癥HDN最有效的方法 換血量>180ml/kg:確保循環(huán)血內(nèi)70%～80%的膽紅素、致敏紅細(xì)胞、抗體被換出。減輕溶

24、血程度、降低膽紅素、防止核黃疸發(fā)生糾正貧血，防止心力衰竭,53,換血原理,,54,輸血策略,ABO HDN:O型Rh陽性洗滌紅細(xì)胞+AB型血漿Rh HDN：ABO血型同患兒，Rh血型同母親Rh+ABO HDN：O型，Rh血型同母親的洗滌紅細(xì)胞 +AB型血漿綜合考慮換血的成分種類、血型表型、分布頻率等多種因素。,55,輸血策略,Rh HDN患兒輸注與母親血清相合的血液不需要Rh表型完全相同O型cc

25、dee不是萬能的，但臨床適用性是最高的換血的策略較輸血更寬松：臨床常有用Rh陽性血換血成功的報(bào)道,56,換血策略,首選：三天內(nèi)新鮮全血 血鉀濃度：如換血用保存期較長的血液，血鉀會偏 高，可引起心室顫動(dòng)甚至心臟停搏。 血漿：促進(jìn)血清膽紅素的排泄備選：洗滌紅細(xì)胞 物理性溶血：洗滌后脆性增加，換血過程中機(jī)械性破 壞都使紅細(xì)胞破壞，血清膽紅素升高。,57,