《親子鑒定》ppt課件

1、第十章 親子鑒定,第一節(jié) 概述親權(quán)鑒定（indentification in disputed patermity）：是指應(yīng)用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、和人類學(xué)的方法檢測(cè)遺傳標(biāo)記，并依據(jù)遺傳學(xué)理論進(jìn)行分析，從而對(duì)被檢者之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系所作的科學(xué)判定。親子鑒定：判斷父母與子女之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系，稱為親子鑒定。父權(quán)鑒定：在親子鑒定中，母子關(guān)系確定，要求判斷爭(zhēng)議父親和子女間是否存在親子關(guān)系。,一、親子鑒定的類型

2、1、涉及民事糾紛的親子鑒定（1）涉及婚生或非婚生子女撫育責(zé)任或財(cái)產(chǎn)繼承訴訟案（2）懷疑產(chǎn)院調(diào)錯(cuò)嬰兒的訴訟案2、涉及刑事案件的親子鑒定（1）強(qiáng)奸案或違紀(jì)性犯罪案件對(duì)兒童（或胎兒）親生父親的確定（2）碎尸案中的身源鑒定（3）殺嬰、拐騙兒童等案件中孩子身源的認(rèn)定3、涉及行政事務(wù)的親子鑒定（1）移民涉外公證（2）失散親人親緣關(guān)系的認(rèn)定（3）計(jì)劃外生育責(zé)任人的確認(rèn)及其子女戶籍的注冊(cè),二、親子鑒定的依據(jù)親子鑒定的依據(jù)包括遺傳性

3、狀、妊娠期限、性交能力及生殖能力三個(gè)方面。其中遺傳性狀是親子鑒定最主要的依據(jù)。遺傳性狀：是生物體表現(xiàn)的一切形態(tài)特征、生理特征、代謝類型的統(tǒng)稱。單位性狀：其中可檢測(cè)的、由遺傳決定的特征，并能夠按預(yù)期的方式從一代遺傳給下一代的性狀，在遺傳學(xué)上稱為單位性狀。遺傳標(biāo)記（genetic marker）：這種具有相對(duì)差異的單位性狀作為標(biāo)志來(lái)識(shí)別攜帶它的個(gè)體、細(xì)胞和染色體‘或用以研究細(xì)胞、個(gè)體、家系、群體的遺傳方式時(shí)稱為遺傳標(biāo)記。,,,,,,

4、,應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)鑒定的遺傳標(biāo)記大致可作如下分類： 血液細(xì)胞表面的 基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記 （紅、白、血板）遺 血液蛋白質(zhì)的傳標(biāo)

5、 DNA序列多態(tài)性記 DNA水平遺傳標(biāo)記 DNA長(zhǎng)度多態(tài)性,,,,三、親子鑒定的原理人類的遺傳性狀根據(jù)受基因控制的程度可分為兩類1、受單一基因座的等位基因控制，與環(huán)境無(wú)關(guān)的單純遺傳特征，如血型、DNA多態(tài)性、耳垢型、味覺(jué)能力

6、等2、受多基因座共同控制，同時(shí)還受環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、疾病等非遺傳因素影響的復(fù)雜遺傳特征，如身體的形態(tài)、容貌、膚色、皮膚紋理等。單基因遺傳特征分析是親子鑒定最可靠、最基本和最常用的方法。,親代與子代基因型關(guān)系 親代基因型組合 子代基因型 親代基因型組合 子代基因型 aaXaa aa

7、 bbXbb bb aaXbb ab bbXab bb，ab aaXab aa，ab

8、 abXab aa，bb，ab注：a、b代表某基因位點(diǎn)上不同的等位基因,,,,,,,,,決定某一性狀的基因在親代與子代之間傳遞的規(guī)律：1、孩子的一對(duì)等位基因必定是一個(gè)來(lái)自父親，一個(gè)來(lái)自母親；2、孩子不可能帶有雙親均沒(méi)有的等位基因；3、除非父母雙方均有同一基因，否則子女不會(huì)是純合子；4、父母之一若是純合子，則子女必得其一。,鑒定親子關(guān)系的基本原則：1、在肯定某個(gè)基

9、因必須來(lái)自生父，而假設(shè)父親并不具有這個(gè)基因的情況下，可以排除親子關(guān)系。2、在肯定某個(gè)基因必須來(lái)自生父，而假設(shè)父親具有這個(gè)基因的情況下，不能排除其親子關(guān)系。,根據(jù)遺傳標(biāo)記判定父權(quán) 血型組合 生父 可以排 不能排母親 孩子 基因 除父權(quán) 除父權(quán)

10、 aaXaa a bb aa ab aaXab b aa ab bb abXaa a

11、 bb aa ab bbXbb b aa ab bb bbXab a bb a

12、b aa abXbb b aa ab bb abXab a、b － aa ab bb,,,,,親子鑒定應(yīng)具備的條件1、鑒定人的資格：鑒定人必須獲

13、得相應(yīng)的資格，具備相應(yīng)的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科的知識(shí)，熟練掌握相應(yīng)的檢驗(yàn)技術(shù)，由具有一定工作經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行解釋和判斷，作出相應(yīng)的結(jié)論。2、鑒定機(jī)構(gòu)的條件：鑒定機(jī)構(gòu)必須獲得相關(guān)部門的批準(zhǔn)，具有標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)方法和可靠的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系。3、被鑒定人的要求：成年被鑒定人應(yīng)自愿接受鑒定，14歲以下的應(yīng)征得其監(jiān)護(hù)人的同意。,第二節(jié) 親子鑒定常用的遺傳標(biāo)記一、基因產(chǎn)物水平的遺傳標(biāo)記適用于親子鑒定的血液遺傳標(biāo)記，一般應(yīng)具備

14、以下條件：1、表現(xiàn)為簡(jiǎn)單的遺傳性狀，其遺傳方式經(jīng)家系調(diào)查已明確2、具有遺傳多態(tài)性，基因頻率分布較均勻，父權(quán)排除率高。3、在相應(yīng)地區(qū)、民族中的群體遺傳數(shù)據(jù)已建立。4、血型個(gè)體發(fā)生早，不易受年齡、疾病及其他因素影響。5、檢驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，結(jié)果明確可靠。,（一）紅細(xì)胞型1、ABO血型 已知抗體 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞

15、 分型 抗A 抗B A型 B型 被 + — 被 — + A 檢 — + 檢

16、 + — B 紅 血 細(xì) + + 清 — — AB 胞

17、 — — + + O ABO血型抗原可以以水溶性糖蛋白的形式存在于人的血清、精液、唾液等體液與分泌液中。因此，也可以通過(guò)上述樣品的檢測(cè)判定ABO血型,,,,,,2、MN血型MN血型有M型、N型和MN血型3種表型，MN血型基因座位于第4號(hào)染色體上，M、N兩個(gè)等位基因?yàn)楣?/p>

18、顯性基因。MN血型的M、N兩種抗原，以糖蛋白的形式存在于紅細(xì)胞膜表面上。用已知抗-M、抗-N抗體檢測(cè)未知的紅細(xì)胞抗原可鑒定MN血型。,3、Rh血型5種常見(jiàn)抗原D、C、c、E、e構(gòu)成18種表型。其中RhD抗原具有很強(qiáng)的免疫原性，在輸血、新生兒溶血和母兒妊娠不合中具有重要的意義，因此臨床上根據(jù)RhD抗原的有無(wú)分為RhD（+）和RhD（—）兩種型。Rh血型由位于第1號(hào)染色體上的兩個(gè)高度同原的RhD基因和RhCE基因共同控制，分別編碼RhD

19、以及RhCcEe蛋白。Rh血型抗原為膜內(nèi)鑲嵌蛋白，相應(yīng)的Rh抗體多為不完全抗體。因此，常用抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)鑒定Rh血型。,紅細(xì)胞酶型紅細(xì)胞酶型是紅細(xì)胞多態(tài)性同工酶?jìng)€(gè)體間的遺傳差異。親子鑒定常用的紅細(xì)胞酶型有：紅細(xì)胞酸性磷酸酶（EAP），酯酶D（ESD），葡糖磷酸變位酶1（PGM1），乙二醛酶Ⅰ（GLOI）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）等。,親子鑒定常用的紅細(xì)胞酶型血型系統(tǒng) 生理功能 染色體

20、 等位 表型 定位 基因EAP 正磷酸單酯+水 2 EAPa A型 E

21、AP BA型 磷酸+醇 EAPb B型酯酶D 酯+水

22、 13 ESD1 1型（ESD）型 ESD ESD2 1-2型 脂肪酸+醇

23、 2型葡糖磷酸變 葡糖-1-磷酸 1 PGM11+ 1+，2-1+位酶Ⅰ PSM1 PGM11

24、- 1+1-，2-1- PGM12+ 1- ，2+（PGM1亞型）葡糖-6-磷酸 PGM12- 2+1- ，2-乙二醛酶

25、Ⅰ 甲基乙二醛 6 GLOⅠ1 1型（GLOⅠ） GLOⅠ GLOⅠ2 2-1型 S-乳酸谷胱甘肽

26、 2型谷丙轉(zhuǎn)氨酶 丙氨酸+丙酮酸 16 GPT1 1型 GPT GPT2

27、 2-1型（GPT型） α-酮戊二酸+谷氨酸 2型,,,,,,,,小結(jié)：紅細(xì)胞酶型應(yīng)用電泳分離結(jié)合特異性酶組織化學(xué)染色的酶譜技術(shù)分型，即根據(jù)酶蛋白分子的大小和所帶電荷量的不同，通過(guò)電泳使之分離，利用酶活化催化底物反應(yīng)顯帶，并根據(jù)電泳譜帶的位置，譜帶數(shù)目、和譜帶強(qiáng)弱進(jìn)行判型。常用電泳分離方

28、法是瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦技術(shù)。,血清蛋白型是由等位基因決定的人血清中同一種蛋白質(zhì)的個(gè)體差異，表現(xiàn)為氨基酸排列順序的差別，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)的不同。親子鑒定常用的血清型系統(tǒng)有：結(jié)合珠蛋白（HP）、維生素D結(jié)合蛋白（Gc亞型）α1-抗胰蛋白酶（PiM亞型）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TfC亞型）、間-α-胰蛋白酶抑制劑（ITIH1型）、補(bǔ)體成分和同種異型遺傳標(biāo)記等,親子鑒定常用的血清型血型系統(tǒng) 生理功

29、能 染色體 基因 表型結(jié)合珠蛋白 HP蛋白與Hb結(jié)合成 16 Hp1 1型（HP）型 復(fù)合物，使Hb中的 Hp2 2-1型

30、 鐵得以貯存和再利用 2型維生素D結(jié) 結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)維生素D 4 Gc1f 1F，2-1F合蛋白（G 及其代謝產(chǎn)物 Gc1s 1S，1F1SC亞型）

31、 Gc2 2，2-1S轉(zhuǎn)鐵蛋白 參與鐵的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)， 3 TfC1 C1（TfC亞型） 并與鋅的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn) TfC2

32、 C2 有關(guān) C1C2α1-抗胰蛋 維持蛋白酶與蛋白酶 14 PiM1 M1，M2白酶（PiM 抑制物之間的平衡，

33、 PiM2 M1M2亞型） 保護(hù)組織免受蛋白水解 PiM3 M1M3 酶的分解 M2M3

34、間-α-胰蛋白 抑制多種絲氨酸蛋白水 3 ITIH11 1型，2-1型酶抑制劑（I 解酶活性 ITIH12 2型，3-2型TIH1型）

35、 ITIH13 3型,,,,白細(xì)胞型白細(xì)胞型主要是指人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）又稱為移植抗原或組織相溶性抗原系統(tǒng)，是迄今發(fā)現(xiàn)的最復(fù)雜的人類遺傳標(biāo)記。 人類HLA 系統(tǒng)受控于第6號(hào)染色體短臂上的HLA區(qū)域的多個(gè)基因座的復(fù)等位基因。 HLA-Ⅰ： HLA-A、 B、C、E、F、G、H、J、K

36、 HLA HLA-Ⅱ：DR、DQ、DP特性：是位于同一條染色體上的，不同基因座的基因緊密連鎖，構(gòu)成單倍型遺傳。HLA抗原分型主要應(yīng)用微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)兩種方法，前者用于檢測(cè)HLA-A，B，C，DR，DQ基因座的抗原，后者用于檢測(cè)HLA-DP基因座的抗原。,,,二、DNA水平的遺傳標(biāo)記一、DNA的結(jié)構(gòu)與功能

37、 磷酸DNA 核苷酸 脫氧核糖 腺嘌呤（A） （4種） 堿基 鳥嘌呤（G） 胞嘧啶（C）

38、 胸腺嘧啶（T）DNA是生物的遺傳物質(zhì)，其基本結(jié)構(gòu)是4種脫氧核糖核酸（核苷酸）通過(guò)磷酸二酯鍵聚合而成的多核苷酸鏈。細(xì)胞核的DNA分子是由兩條反向平行排列的多核苷酸鏈，以堿基配對(duì)的原則（A和T，G和C）通過(guò)氫鍵彼此相連，并圍繞同一中心軸盤旋形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。生物的遺傳信息表現(xiàn)為DNA中核苷酸

39、的排列順序，并以密碼子的形式編碼在DNA分子上DNA的半保留復(fù)制在細(xì)胞生命過(guò)程中，DNA的兩條多核苷酸鏈中，一條鏈作為模版，將遺傳信息轉(zhuǎn)錄給Mrna，Mrna再將信息翻譯成蛋白質(zhì)，決定蛋白質(zhì)的特異性。,,,,,,DNA多態(tài)性的分子學(xué)基礎(chǔ)DNA多態(tài)性是指DNA區(qū)域中等位基因或片段存在兩種或兩種以上的 形式，其本質(zhì)是生物體在進(jìn)化過(guò)程中核苷酸排列順序改變的結(jié)果。 長(zhǎng)度多態(tài)性D

40、NA多態(tài)性 序列多態(tài)性1、長(zhǎng)度多態(tài)性：是指兩條同源染色體上，同源片段的核苷酸排列 數(shù)量存在的個(gè)體差異。,,,重復(fù)序列：以多拷貝形式存在的DNA序列稱為重復(fù)序列，大多存在于基因內(nèi)非編碼區(qū)或基因附近。 散在重復(fù)序列：?jiǎn)慰截怐NA序列以其單體形式散在分布 于整 個(gè)基因組中稱為散在重復(fù)序列。由于其分布間隔片段大小不

41、 可分為短片段型和長(zhǎng)片段型。 串聯(lián)重復(fù)序列：具有特定的重復(fù)單位，各重復(fù)單位頭尾相連 形成的重復(fù)序列。又稱衛(wèi)星DNA。 大衛(wèi)星 衛(wèi)星DNA 中衛(wèi)星

42、 小衛(wèi)星 微衛(wèi)星 倒位重復(fù)序列：重復(fù)單位是互補(bǔ)序列，并在同一條DNA鏈上 呈反向排列的重復(fù)序列。 有間隔重復(fù)序列 分類

43、 無(wú)間隔重復(fù)序列,,,,2、序列多態(tài)性： DNA序列多態(tài)性指在兩條同源染色體上，同源DNA序列長(zhǎng)度相等，但個(gè)別核苷酸存在的個(gè)體差異。單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，稱為單核苷酸多態(tài)性，它是人類可遺傳的變異中最常見(jiàn)的一種。由堿基的替代、插入或缺失所致。,SNP用做遺傳標(biāo)記具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、SNP在人群中是二等位基因性的，在任何人群

44、 中其等位基因頻率都可估計(jì)； 2、它在基因組中的分布較微衛(wèi)星標(biāo)記廣泛的多； 3、與串聯(lián)重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn)相比，SNP是高度穩(wěn) 定的，尤其是處于編碼區(qū)的SPN； 4、部分位于基因內(nèi)部的SNP可能會(huì)直接影響產(chǎn)物 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)或基因表達(dá)水平，因此，它們

45、可能 就是疾病遺傳機(jī)制的侯選改變位點(diǎn)。 5、易于進(jìn)行自動(dòng)化分析，縮短了研究時(shí)間。,,DNA多態(tài)性的檢測(cè)技術(shù) DNA指紋技術(shù) 分 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 類 DNA芯片技術(shù),,一、DNA指紋技術(shù)DNA指紋（DNA fingerprint

46、）：是指將人類基因組DNA用限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)電泳分離、薩森印記轉(zhuǎn)移，然后用已知序列小衛(wèi)星DNA探針根據(jù)堿基互補(bǔ)原則與未知基因組DNA雜交，所顯示出的由一系列不等距離、相互間隔的多條電泳譜帶組成的高度多態(tài)性圖譜。圖譜中的每一條譜帶代表一個(gè)特定長(zhǎng)度的DNA片段，不同個(gè)體之間的差異在圖譜中主要表現(xiàn)為譜帶位置、數(shù)目、密度強(qiáng)弱的差異。DNA指紋的實(shí)質(zhì)是基因組DNA的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，它的個(gè)體差異性取決于所用限制酶的識(shí)別序列特異性和探

47、針的特異性。,1、DNA指紋的基本操作過(guò)程1）DNA的提?。禾崛≡瓌t是盡可能的保持DNA分子的完整性，盡可能的除去檢材中的蛋白質(zhì)、多糖、脂類等成分。2）限制酶消化：這種由于DNA限制酶識(shí)別的序列核苷酸結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致酶切位點(diǎn)的產(chǎn)生、消失、或移位，酶切所產(chǎn)生的限制性片段數(shù)目和長(zhǎng)度改變所呈現(xiàn)的DNA多態(tài)現(xiàn)象稱為限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。3）電泳分離：利用電泳技術(shù)可將酶切片段按分子量從大到小分離。4）薩森印跡轉(zhuǎn)移：酶解DNA片段經(jīng)電泳展

48、開(kāi)在凝膠的不同位置上，由于凝膠介質(zhì)機(jī)械強(qiáng)度低，無(wú)法承受以后的操作，故將已分離的DNA片段從凝膠原位轉(zhuǎn)移結(jié)合在一張固相濾膜上，這個(gè)過(guò)程稱為薩森印跡轉(zhuǎn)移。,,5）分子雜交：是用特異性探針與待側(cè)DNA多態(tài)片段在復(fù)性條件下形成穩(wěn)定異源DNA雙鏈的過(guò)程。 DNA探針：是指示蹤物標(biāo)記的（同位素或非同位素），能與互補(bǔ)靶核酸序列退火雜交的已知核苷酸片段。 分類 多位點(diǎn)探針：低強(qiáng)度雜交條件下可同時(shí)檢測(cè)多

49、 個(gè)VNTR 位點(diǎn)的探針，得到的DNA圖譜為DNA指紋。 單位點(diǎn)探針：高強(qiáng)度雜交條件下只檢測(cè)單個(gè) VNTR多態(tài) 片段的探針，得到的DNA圖

50、譜為DNA紋印。 6）指紋圖顯示：同位素標(biāo)記探針后，利用同位素的放射線在X線片上的 成影作用檢測(cè)雜交信號(hào)，稱為放射自顯影。,（2）DNA指紋的基本特征1）體細(xì)胞穩(wěn)定性：同一個(gè)體的血液、唾液、精液以及組織器官DNA指紋圖是一致的，并且對(duì)于同一個(gè)健康人來(lái)說(shuō)是終身不變的，這是法醫(yī)學(xué)應(yīng)用的基本前提。2）個(gè)體高度特異性：不同個(gè)體DNA分子水平上遺傳本質(zhì)的差異，決定了同一種限制酶消化基因組DNA，某一個(gè)體與另一個(gè)體的等位基因片段在數(shù)量和長(zhǎng)度

51、上是不可能相同的，從而產(chǎn)生具有個(gè)體特異性的DNA指紋圖。3）按孟德?tīng)栠z傳規(guī)律遺傳：子代DNA指紋圖中所有等位基因帶都可以在雙親的指紋圖中找到，片段的遺傳符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。,2、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）( 1) 基本原理：PCR技術(shù)的基本原理是在耐熱DNA聚合酶作用下，以一對(duì)特異性序列DNA短片段作為引物，利用加熱和冷卻交替的循環(huán)程序，有選擇性的放大基因組內(nèi)某一小區(qū)段。PCR的循環(huán)過(guò)程

52、變性：通過(guò)加熱使氫鍵斷裂，形成兩條單鏈DNA 退火：溫度下降，人工合成的寡核苷酸引物，依堿基互補(bǔ)的 原則，與所要擴(kuò)增的靶DNA的雙側(cè)翼結(jié)合。 延伸：在DNA聚合酶和4種脫氧核糖核苷酸底物及Mg2+存在 的條件下聚合酶催化以引物為起點(diǎn)的5‘端向3’端的

53、 DNA鏈延伸反應(yīng)。,,（2）反應(yīng)體系1）模板DNA：模板DNA是PCR的起使底物，對(duì)于PCR產(chǎn)物的特異性，產(chǎn)量等有重要影響。2）引物：是指DNA聚合酶啟動(dòng)DNA合成時(shí)必須的一段短的寡核苷酸。 引物的特異性要好PCR引物設(shè)計(jì)原則 引物的長(zhǎng)度要合適

54、 引物的堿基組成分布盡可能隨機(jī) 引物自身不應(yīng)有互補(bǔ)序列，防止疊成發(fā)夾3）TaqDNA聚合酶：特點(diǎn)是對(duì)合成DNA具有較高的最適溫度。TaqDNA聚合酶具有5‘到3’催化活性，可依堿基互補(bǔ)原則，催化引物按5‘到3’方向合成DNA鏈。4）DNTP：DATP、DGTP、DTTP、DCTP，濃度為50-200umol/L。5）反應(yīng)

55、緩沖系統(tǒng)：標(biāo)準(zhǔn)PCR緩沖液中含有50mmolKCL、10mmolTris-HCL、1.5mmolMgCL2和100ug/ml白明膠,,+,（3）反應(yīng)參數(shù)：正確選擇變性、退火和延伸的溫度、時(shí)間及循環(huán)次數(shù)等參數(shù)是保證PCR成功的關(guān)鍵1）適宜的變性條件是95℃/30s2）退火的溫度和所需時(shí)間的長(zhǎng)短取決于引物的堿基組成、長(zhǎng)度、濃度與模板DNA的匹配程度。退火時(shí)間是30s，足以使引物與模板DNA之間完全結(jié)合。3）延伸溫度通常在72-75℃之

56、間，此時(shí)Taq聚合酶具有高度活性。PCR延伸時(shí)間取決于目的片段的長(zhǎng)度和濃度。4）循環(huán)次數(shù)一般25-30次比較合適。循環(huán)次數(shù)過(guò)多，易引起非特異性產(chǎn)物量的增加。,擴(kuò)增產(chǎn)物分析：DNA分型技術(shù)分類： 可變數(shù)目串聯(lián)單位序列 AMP-ELP技術(shù)：擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性 （VNTRS） 銀染檢測(cè)

57、 短串聯(lián)重復(fù)序列 多色熒光標(biāo) （STR） 記染色 PCR-ASO技術(shù)：將PCR擴(kuò)

58、增產(chǎn)物變性后，通過(guò)斑點(diǎn)印跡使解鏈的擴(kuò)增 產(chǎn)物固定在尼龍膜上，再用等位基因特異性寡核苷酸探針，分別與尼 龍膜上的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，然后依據(jù)探針標(biāo)記進(jìn)行顯譜。 AS-PCR技術(shù)：引物3‘端第一個(gè)堿基分別與等位基因的特異性堿基相匹 配，通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度的分析，可簡(jiǎn)單的進(jìn)行等位基因分型。 PCR-SSP技術(shù)：通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物是有無(wú)可簡(jiǎn)單的進(jìn)行特異性等位基因。

59、 PCR-RFLP技術(shù)：選擇能夠識(shí)別靶DNA序列中特定堿基序列的限制性 內(nèi)切酶消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，消化后DNA片段的數(shù)目和長(zhǎng)度不同，根據(jù) 電泳譜帶的位置和數(shù)目可判定基因型。 MVR-PCR技術(shù)：即小衛(wèi)星變異作圖。 DNA序列測(cè)定法：耐熱聚合酶雙脫氧核苷酸末端終止法,,,,DNA芯片技術(shù)1、定義：是指同時(shí)處理分析大量DNA片段

60、的技術(shù)，可廣泛應(yīng)用于基因診斷、基因制圖、基因表達(dá)和DNA序列分析等領(lǐng)域。2、基本原理：先在載體上固定一系列寡核苷酸探針，再與靶DNA擴(kuò)增產(chǎn)物作雜交，或?qū)⒉煌陌蠨NA分子固定在載體面上，再與不同的探針雜交。雜交信號(hào)的檢測(cè)是根據(jù)雜交分子與未雜交分子所發(fā)出的不同波長(zhǎng)的光實(shí)現(xiàn)的，不同區(qū)域的熒光信號(hào)在芯片上組成熒光分布的譜型可被激光共聚焦顯微鏡激發(fā)和檢測(cè)，經(jīng)電腦應(yīng)用特制的軟件處理可得出DNA的序列及其變化情況。,第三節(jié) 親子鑒定相關(guān)的統(tǒng)計(jì)參

61、數(shù)一、父權(quán)排除概率：是指通過(guò)某一個(gè)遺傳標(biāo)記系統(tǒng)的檢測(cè)，將不是生父的被控父親排除的概率即在所有非父被控為生父的男子中，用遺傳標(biāo)記否定父權(quán)有多大的可能性。各個(gè)遺傳標(biāo)記系統(tǒng)非父排除概率的大小取決于該系統(tǒng)的遺傳方式、等位基因數(shù)目以及各等位基因在群體中的頻率分布。,（一）常染色體遺傳標(biāo)記系統(tǒng)1.一個(gè)顯性基因和一個(gè)隱性基因決定的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)（如P血型、分泌型） EPP=pq42.兩個(gè)共顯性等位基因決定的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)（如M

62、N血型、Hp血型、ESD型等） EPP=pq（1-pq）3.兩個(gè)顯性基因和1個(gè)隱性基因決定的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)（如ABO）EPP=p（1-p）4+q（1-q）4+pqr2（p+q）+2pqr24.3個(gè)共顯性等位基因決定的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)（Gc、Tfc、PiM等）EPP=（p2+q2+r2）2-（p5+q5+r5）+6pqr+4pqr （p2+q2+r2）5.多個(gè)共顯性等位基因決定的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)（如STR）

63、 n n-1 n EPP=∑Pi（1-pi）2（1-pi+pi2）+ ∑ ∑pipj（1-pi-pj）2 i=1 i=1 j=i=1,（二）性染色體遺傳標(biāo)記系統(tǒng)1.Y染色體遺傳標(biāo)記系統(tǒng) n

64、 n-1EPP= ∑Pi（1-pi）=1- ∑Pi2 i=1 i=12、X染色體遺傳標(biāo)記系統(tǒng) n n-1 nEPP=1- ∑Pi2+ ∑Pi4- （∑Pi2）2 i=1 i=1 i=13、積累非父權(quán)排除概率CEE=

65、1-（1-P1）（1-P2）（1-P3）…（1-Pk） 上式顯示，檢測(cè)的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)越多，累積非父排除率越高，排除非父的機(jī)會(huì)亦越高。為了最大限度排除非父，選擇排除概率高的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)和選用更多的遺傳標(biāo)記是十分必要的。,父權(quán)指數(shù)和父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)（一）父權(quán)指數(shù)1、概念：父權(quán)指數(shù)（PI）又稱親子關(guān)系指數(shù)，是假設(shè)父提供父基因成為孩子生父的可能性與隨機(jī)男子提供生父基因成為孩子生父可能性的比值，表示假設(shè)父為孩子生父的機(jī)會(huì)比

66、隨機(jī)男子為孩子生父的機(jī)會(huì)大多少倍。 XPI= YX=∑母親提供生母基因概率（f）X假設(shè)父提供生父基因概率（C）Y=∑母親提供生母基因概率（f）X隨機(jī)男子提供生父基因概率（p）基因頻率：是指在一個(gè)兩倍體的特定基因座位上某一個(gè)等位基因占該基因座上等位基因總數(shù)的比率。基因型頻率：是指在群體中某特定基因型個(gè)體的數(shù)目占被調(diào)查個(gè)體總數(shù)的比率。,,父權(quán)指數(shù)的計(jì)算一、三聯(lián)體親子鑒定

67、1、母子關(guān)系肯定的親子鑒定1）確定母親遺傳生母基因的機(jī)會(huì)（f）2）確定隨機(jī)男子提供生父基因的機(jī)會(huì)（g），一般使用相應(yīng)的群體基因頻率3）確定假設(shè)父提供父基因的機(jī)會(huì)（c）4）計(jì)算隨機(jī)男子成為生父的機(jī)會(huì)，Y=f X g5）計(jì)算假設(shè)父成為生父的機(jī)會(huì)，X=f X c6）計(jì)算父權(quán)指數(shù),PI值計(jì)算例案 表型 必須基因 f Y

68、 X PI例 孩子母親被控父 母親 生父1、B A AB O B 1 1X0.2556 1X0.5 1.962、AB AB B A B 0.5 0.5X0.2556 0.5X0.596 1.28

69、 B A 0.5 +0.5X0.2092 +0.5X0 3、B B AB B B或O 0.404 0.596X0.2556 0.596X0.5 0.87

70、 0.596X0.5352 0.596X0 +0.404X0.2556 +0.404X0.5 O B 0.596