膿汁與糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)-6

1、半固體培養(yǎng)物4支，藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)物4個(gè)，微量發(fā)酵管培養(yǎng)物1套。,器材準(zhǔn)備,膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程,①培養(yǎng)基的制備,②細(xì)菌的分離培養(yǎng),③細(xì)菌的純培養(yǎng),④細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查,⑤細(xì)菌的生化試驗(yàn)等,⑥細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)、結(jié)果分析→實(shí)驗(yàn)論文撰寫(xiě),,,,,,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一,膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)（六）藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析糖發(fā)酵、動(dòng)力實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析玻片凝集試驗(yàn)高壓蒸汽滅菌細(xì)菌綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě) 細(xì)菌感染的

2、檢查方法和防治原則（錄像）洗刷,藥敏試驗(yàn)結(jié)果,用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）,,常用藥敏試驗(yàn)紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)P21,抗菌藥物 紙片含藥量 抑菌圈直徑(mm) 耐藥 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌)10單位 ≤28 - ≥29頭孢曲松 30微克 ≤19 20～22 ≥23慶大霉素 10微克 ≤1

3、2 13～14 ≥15先鋒霉素Ⅴ 30微克 ≤14 15～17 ≥18鏈霉素 10微克 ≤11 12～14 ≥15四環(huán)素 30微克 ≤14 15～18 ≥19氯霉素 30微克 ≤12 13～17 ≥18磺胺 300微克 ≤12 13～16 ≥17,藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析（錄入）,抗菌

4、素藥敏試驗(yàn)紙片法結(jié)果,G+球菌對(duì)青霉素和頭孢曲松敏感。 G-桿菌對(duì)青霉素耐藥，對(duì)頭孢曲松敏感。G+球菌和G-桿菌對(duì)廣譜抗菌素慶大霉素都敏感。,糖發(fā)酵、動(dòng)力試驗(yàn)結(jié)果判斷,糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果,微量發(fā)酵管水平放置，觀察結(jié)果。,,半固體穿刺培養(yǎng)結(jié)果,半固體并列，對(duì)光上下移動(dòng)至合適觀察位置，觀察結(jié)果。,,腸道桿菌科各菌屬生化反應(yīng)鑒別表,葡萄糖 乳糖 麥芽糖 甘露醇 蔗糖 半固體埃希菌屬 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ √

5、 +志賀菌屬 + √ √ +/- -/+ -沙門(mén)菌屬 ⊕/+ - ⊕ ⊕ - + 霍亂弧菌 + - + + + +變形桿菌屬 ⊕ - √ - √ +注： + 產(chǎn)酸或陽(yáng)性， ⊕ 產(chǎn)酸產(chǎn)氣，- 陰性， +/- 多數(shù)陽(yáng)性， -/+ 多數(shù)陰性 √ 不確定。

6、,常見(jiàn)腸道感染細(xì)菌主要生化反應(yīng)特征,葡萄糖 乳糖 半固體（動(dòng)力）大腸埃希菌 ⊕ ⊕ + 福氏志賀菌 + - -傷寒沙門(mén)菌 + - +霍亂弧菌 +★ - + 幽門(mén)螺桿菌 不分解糖類(lèi) +變形桿菌 ⊕ - +★產(chǎn)酸能迅速殺死該菌。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤的分析,純培養(yǎng)時(shí)，菌落挑錯(cuò)了、不是單菌落、

7、CFU。無(wú)菌操作不嚴(yán)格，污染雜菌。接種時(shí)未協(xié)調(diào)好，接種錯(cuò)誤。,玻片凝集試驗(yàn) Slide Agglutination Test,在適量電解質(zhì)存在的情況下，顆粒性抗原(細(xì)菌)與特異性抗體結(jié)合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。取潔凈的載玻片一張，將磨面近端設(shè)為對(duì)照區(qū)，滴加生理鹽水15ul。遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)，滴加福氏志賀菌診斷血清15ul，用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔，約1～2個(gè)小菌落的菌量，研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻。

8、※載玻片來(lái)回傾側(cè)，讓菌液充分混 勻，凝集速度更快、結(jié)果更清楚。※菌液凝集者記為陽(yáng)性，菌液均勻混濁記為陰性。,研磨成直徑8～10mm的一層薄菌膜。,玻片凝集結(jié)果判定,玻片來(lái)回傾側(cè)數(shù)次，肉眼觀察；2～3分鐘內(nèi)仍不出現(xiàn)凝集者,可認(rèn)為陰性(－)。,……;菌液混濁，少量絮狀,25%凝集,陽(yáng)性(＋)。,……;菌液輕度混濁,絮狀凝集塊較小,陽(yáng)性(＋＋)。,……;菌液澄清,有明顯絮片,75%凝集,陽(yáng)性(＋＋＋)。,本次實(shí)驗(yàn)操作，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生

9、物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開(kāi),＜5um通過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐穩(wěn)，很專注，不分心，在火焰周?chē)?0～20厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說(shuō)話，以免感染病原菌。,生物安全警告BIOHAZARD,滅菌,藥敏試驗(yàn)平板、動(dòng)力試驗(yàn)半固體瓊脂、微量糖發(fā)酵管→高壓蒸汽滅菌 ! 器

10、材收攤?cè)牍袂埃臃N環(huán)，接種針必須再次燒灼滅菌！,綜合性實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)總結(jié),采用平板劃線分離法，從濃汁標(biāo)本中分離出金黃色和白色兩種菌落。顯微鏡下，這兩株細(xì)菌均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落或菌苔顏色，這兩株葡萄球菌分別是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過(guò)血漿凝固酶試驗(yàn)鑒別，金黃色葡萄球菌是致病菌。,用伊紅美藍(lán)平板，從糞便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤和粉紅色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大腸埃希菌。

11、粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，它們都是G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，半固體動(dòng)力試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果鑒定，它們分別是大腸埃希菌和福氏志賀菌。,,,膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果,細(xì)菌鑒定的原則及基本方法,必須用純的細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定。因?yàn)椴煌募?xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果相差較大，而反應(yīng)結(jié)果是以陽(yáng)性或陰性表示的，一旦用混合菌做生化反應(yīng)，結(jié)果不可分析。鑒定試驗(yàn)的選擇：測(cè)定細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)方法很多，根據(jù)鑒定目的選擇適當(dāng)

12、的試驗(yàn)項(xiàng)目，既能完成鑒定，項(xiàng)目又盡可能少。一般考慮以下幾個(gè)問(wèn)題。選擇有價(jià)值的試驗(yàn)：鑒別兩種細(xì)菌選擇的試驗(yàn)應(yīng)該其一為陽(yáng)性，另一為陰性，且陽(yáng)性和陰性的概率大于90%。否則，試驗(yàn)無(wú)鑒別價(jià)值。選擇快速簡(jiǎn)便的試驗(yàn)。因?yàn)槭浅Ｒ?guī)實(shí)驗(yàn)室，選擇的方法應(yīng)快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等應(yīng)為首選方法。鑒定一種細(xì)菌如果有幾種特異方法,只選一兩種,多選無(wú)價(jià)值。測(cè)定細(xì)菌的一種生物特性可能有幾種不同方法。應(yīng)該了解所用方法的敏感性，否則會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的鑒定。,

13、思考題,如果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果不佳，原因何在?報(bào)告紙片法藥敏試驗(yàn)結(jié)果，是否符合你所鑒定的細(xì)菌的藥敏特性?玻片凝集試驗(yàn)觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?怎么設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，對(duì)傷寒沙門(mén)菌進(jìn)行分離和鑒定?,,染色鏡檢生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定,雙糖鐵培養(yǎng)基,增菌培養(yǎng),血、骨髓,挑取可疑菌落,SS瓊脂、EMB平板分離培養(yǎng),糞便,常見(jiàn)腸道致病菌的檢查程序P48,,,,,,微生物學(xué)檢查,傷寒沙門(mén)菌的分離培養(yǎng)標(biāo)本的采集與病程的關(guān)系：第1周

14、取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取糞便和尿液。血液和骨髓液：先增菌培養(yǎng)，然后再用血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、SS瓊脂（黑色菌落）、EMB平板（粉紅色菌落）分離單菌落。糞便：可直接接種于選擇鑒別培養(yǎng)基，如SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。取血量：一般以肉湯培養(yǎng)基的1/10為宜。常規(guī)方法為用培養(yǎng)基50ml,取血5～10ml,注入培養(yǎng)瓶中。骨髓為1～2ml。 細(xì)菌的純培養(yǎng)必須用純的細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定,形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，有

15、周鞭毛。動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)：細(xì)菌自接種部位向四周移動(dòng)、擴(kuò)散生長(zhǎng)，培養(yǎng)基呈云霧狀或根須狀混濁狀態(tài)。 生化反應(yīng)：分解葡萄糖只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 ，不發(fā)酵乳糖。,血清學(xué)反應(yīng)：主要有O和H兩種抗原。傷寒沙門(mén)菌還有Vi抗原。對(duì)沙門(mén)菌屬的型和亞型鑒定有重要意義。玻片凝集試驗(yàn)：定性鑒定細(xì)菌純培養(yǎng)物。肥達(dá)反應(yīng)：用已知傷寒沙門(mén)菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副傷寒菌H抗原與患者血清作試管凝集試驗(yàn)（定量），檢測(cè)有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)，以輔助診斷傷寒或副傷寒

16、。 正常值：一般是傷寒沙門(mén)菌O抗體的凝集效價(jià)≥1：80，H抗體凝集效價(jià)≥1：160，副傷寒沙門(mén)菌H抗體凝集效價(jià)≥1：80才有診斷價(jià)值。 動(dòng)態(tài)觀察：若效價(jià)逐次遞增或恢復(fù)期效價(jià)比初期≥4倍者更有意義。,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,電子版文件命名原則：XX年級(jí)專業(yè)-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)-王XX-學(xué)號(hào)-實(shí)驗(yàn)報(bào)告題目實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)器材方法與步驟結(jié)果與討論以多數(shù)人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)。從2種標(biāo)本獲得4種菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（綜合性實(shí)驗(yàn)一） 。討論是對(duì)

17、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，應(yīng)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)，圍繞主題，突出重點(diǎn)。結(jié)論應(yīng)該明確。備注：請(qǐng)課代表將實(shí)驗(yàn)報(bào)告按實(shí)驗(yàn)室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師。,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,電子版文件命名原則：XX年級(jí)專業(yè)-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)-王XX-學(xué)號(hào)-實(shí)驗(yàn)報(bào)告題目實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)器材方法與步驟結(jié)果與討論以多數(shù)人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)。從2種標(biāo)本獲得4種菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（綜合性實(shí)驗(yàn)一） 。討論是對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，應(yīng)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)，圍繞主題，突出重點(diǎn)。結(jié)論應(yīng)該明確。備注：請(qǐng)

18、課代表將實(shí)驗(yàn)報(bào)告按實(shí)驗(yàn)室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師或 zhangwb@smu.edu.cn。,如何撰寫(xiě)科研論文,不論人們是否完全贊成“要么發(fā)表、要么銷(xiāo)毀”的格言，但毫無(wú)疑問(wèn)，科學(xué)研究的目的就是要把研究成果發(fā)表出來(lái)。一般來(lái)說(shuō)，評(píng)價(jià)科學(xué)工作者的工作，主要不是看他們?cè)趯?shí)驗(yàn)室內(nèi)靈巧的操作，也不是看他們?cè)趶V闊或狹窄的科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)掌握知識(shí)的多少，也不是看他們的智能或魅力，而主要是根據(jù)他們所發(fā)表的文章來(lái)估量。他們可能由此而成名，或仍然默默無(wú)

19、聞。因此，寫(xiě)出能充分展示自己工作、引起同行注意的論文是一個(gè)科研工作者必備的素質(zhì)。,一項(xiàng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不論它的結(jié)果多么驚人，只有到它發(fā)表出來(lái)時(shí)才算完成。因此對(duì)科學(xué)工作者來(lái)說(shuō)，他不僅必須“研究”科學(xué)，而且必須把科研成果“寫(xiě)”出來(lái)。要寫(xiě)好一篇科學(xué)論文，作者必須準(zhǔn)確地知道他要寫(xiě)的是什么以及為什么要這么寫(xiě)?？茖W(xué)論文是敘述原始研究結(jié)果而寫(xiě)成并發(fā)表的報(bào)告。具體地說(shuō)，一篇公認(rèn)的原始科學(xué)論文，必須是首次公布的，它應(yīng)提供足夠的資料，以使同行們能夠：(1)

20、評(píng)價(jià)觀察到的結(jié)果；(2)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；(3)評(píng)價(jià)推理過(guò)程，而且原始科學(xué)論文還必須能為人們所接受，基本上可供科學(xué)界永久地、不受限制地利用，要有嚴(yán)密的思維特性、邏輯性、清晰性和準(zhǔn)確性。,科研論文內(nèi)容P57標(biāo)題 摘要引言材料與方法結(jié)果討論參考文獻(xiàn),- THE END -,①試管用毛刷，上下、旋轉(zhuǎn)刷洗內(nèi)壁和管底。,②字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。,③管口朝向相同，流水沖洗10次。,④洗干凈的試管，倒扣在筐內(nèi)，晾干。,平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)