血漿eb病毒dna檢測(cè)對(duì)鼻咽癌診斷的價(jià)值研究_陳文學(xué)

1、血漿EB病毒DNA檢測(cè)對(duì)鼻咽癌診斷的價(jià)值研究陳文學(xué)鄒學(xué)森李金高龔小昌袁霞敖帆作者單位:330029江西省腫瘤醫(yī)院【摘要】目的探討血漿EB病毒水平對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值。方法收集112例鼻咽癌初診患者外周血，分離血漿，應(yīng)用熒光定量PCＲ法檢測(cè)EB病毒DNA。結(jié)果血漿中EB病毒DNA陽(yáng)性率與患者性別無相關(guān)性。3060歲鼻咽癌患者血漿中EB病毒DNA陽(yáng)性率明顯高于60歲以上者(P＜005)。鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA陽(yáng)性率為7411%，隨著鼻咽

2、癌患者臨床分期增加，血漿中EB病毒DNA陽(yáng)性亦增強(qiáng)。結(jié)論血漿EB病毒DNA水平與鼻咽癌患者臨床分期呈正相關(guān)關(guān)系，血漿EB病毒DNA的檢測(cè)可以輔助鼻咽癌的診斷?！娟P(guān)鍵詞】鼻咽癌EpsteinBarr病毒DNADOI:103969jissn10015930201412005中圖分類號(hào):Ｒ73962文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):10015930(2014)12152603DetectionofEBVirusinPlasmaintheDiagnosi

3、sofNasopharyngealCarcinomaCHENWenxue，ZOUXuesen，LIJingao，etalJiangxiCancerHospital，Nanchang，330029【Abstract】ObjectiveToexplethediagnosticvalueofEpsteinBarrvirus(EBV)DNAinplasmainnasopharyngealcarcinoma(NPC)MethodsＲealtime

4、quantitativePCＲwasusedtodetectEBVDNAinplasmaof112casesoffirstdiagnosednasopharyngealcarcinomaＲesultsEBVDNApositiverateofNPChadnocrelationwithgenderTheEBVDNApositiveratesofpatientsfrom30to60yearsoldwerehigherthanthoseofpa

5、tientsover60(P＜005)EBVDNApositiverateinNPCplasmawas7411%WiththeincreaseofNPCclinicalstage，theEBVDNApositiverateincreasedConclusionTheEBVDNAlevelofplasmaNPCclinicalstagehasapositiverelationshipDetectionofplasmaEBVDNAisuse

6、fulfthediagnosisofNPC【Keywds】Nasopharyngealcarcinoma(NPC)EpsteinBarrvirus(EBV)DNA(ThePracticalJournalofCancer，2014，29:1526～1528)EB病毒感染是鼻咽癌的發(fā)生的高危因素，眾多研究顯示鼻咽癌組織和鼻咽癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中均可檢出EB病毒［1］。1998年Mutirangura等［2］報(bào)道鼻咽癌患者外周血中可以檢測(cè)到EB病

7、毒DNA，且拷貝數(shù)明顯高于正常人。外周血EB病毒DNA檢測(cè)可能成為鼻咽癌早期診斷的一種方法。我們運(yùn)用熒光定量PCＲ方法檢測(cè)江西省112例鼻咽癌初診患者血漿中游離EB病毒DNA，分析在鼻咽癌診斷。1材料與方法11研究對(duì)象2012年3月－2013年12月本院收治的鼻咽癌初治患者112例，平均年齡485(21～72)歲。全部患者經(jīng)鼻咽活檢病理證實(shí)為鼻咽癌，病理類型均為低分化鱗癌。所有患者均接受鼻咽、頸部CT掃描，電子鼻咽鏡及胸部正側(cè)位片，腹部

8、B超及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查以明確分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，若患者有骨痛癥狀則行全身骨掃描。臨床分期按92分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期。抽取患者2ml外周血置于EDTA抗凝管，全血經(jīng)3000轉(zhuǎn)分鐘離心，分離獲得血漿，－20℃保存?zhèn)溆谩?2試劑和儀器EB病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)，熒光定量核酸擴(kuò)增儀(達(dá)安基因DA7600)。13方法131DNA的提取嚴(yán)格按照EB病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說明書操作進(jìn)行DNA提取。取50μl血漿置滅

9、菌管中，加入50μlDNA提取液，充分混勻，100℃恒溫處理(101)min，4℃過夜，次日12000轉(zhuǎn)離心5min，－20℃保存?zhèn)溆谩?32引物探針及反應(yīng)體系所擴(kuò)增的目的片段來自EB病毒的EBNA1片段。上游引物，下游引物及探針由達(dá)安基因試劑盒自帶，探針序列5標(biāo)記熒光發(fā)射基團(tuán)FAM，3標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)TAMＲA。133反應(yīng)循環(huán)參數(shù)設(shè)置93℃，2min93℃，45s，55℃，60s，10個(gè)循環(huán)93℃，30s，55℃，45s(采集熒625

10、1實(shí)用癌癥雜志2014年12月第29卷第12期ThePracticalJournalofCancer，Dec2014，Vol29，No12TNM分期與外周血EB病毒含量呈正相關(guān)關(guān)系。表2不同臨床分期鼻咽癌患者外周血EB病毒DNA水平TNM分期血漿EB病毒DNA陰性弱陽(yáng)性陽(yáng)性強(qiáng)陽(yáng)性陽(yáng)性率%Ⅰ期40000Ⅱ期7220364Ⅲ期1011247807Ⅳ期87219822合計(jì)2920471674113討論熒光定量PCＲ技術(shù)是近年來新興的分子診斷方

11、法。它具有常規(guī)PCＲ的高靈敏性，克服了常規(guī)PCＲ技術(shù)不能定量以及易污染的問題。熒光定量PCＲ技術(shù)運(yùn)用了熒光探針，可以直接探測(cè)到PCＲ擴(kuò)增過程中熒光信號(hào)的變化，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)定量。我們應(yīng)用熒光定量PCＲ技術(shù)檢測(cè)江西省內(nèi)鼻咽癌初治患者血漿中EB病毒DNA，結(jié)果顯示鼻咽癌患者的陽(yáng)性率為7411%。Lo［3］運(yùn)用熒光定量PCＲ方法檢測(cè)了57例鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA，55例為陽(yáng)性，陽(yáng)性率96%。Shotelersuk［4］運(yùn)用巢式PCＲ方法檢測(cè)

12、167例鼻咽癌患者，87例為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為521%。產(chǎn)生這種差異的可能原因?yàn)槿虢M患者分期比例不同，使用的檢測(cè)方法不同，不同地區(qū)鼻咽癌患者EB病毒感染特征不同有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，EBVDNA陽(yáng)性率男女之間無顯著性差異。30歲到60歲三個(gè)年齡組之間EB病毒DNA無顯著性差異，40～歲組與60～歲組EB病毒的陽(yáng)性率比較時(shí)P值接近檢驗(yàn)水準(zhǔn)，50～歲組EB病毒的陽(yáng)性率明顯高于60～歲組。文獻(xiàn)報(bào)道在鼻咽癌高發(fā)地區(qū)健康人群中EBVDNA感染與性別、

13、年齡之間無相關(guān)關(guān)系。我們的研究結(jié)果顯示鼻咽癌患者血漿中EB病毒DNA年齡分布特征與鼻咽癌的人群年齡分布(20～40歲開始上升，40～60歲達(dá)到發(fā)病高峰)很相似，這也提示EB病毒感染與鼻咽癌的發(fā)生有密切關(guān)系，EB病毒感染是鼻咽癌發(fā)生的高危因素。究竟EB病毒感染在鼻咽癌發(fā)生中起了多少作用，EB病毒感染是從幼年開始，鼻咽癌發(fā)病是成年以后，在這漫長(zhǎng)的過程中EB病毒是怎樣導(dǎo)致鼻咽癌發(fā)生的還有待于進(jìn)一步研究。本研究中分析了鼻咽癌患者血漿中EBVDN

14、A的含量與鼻咽癌分期的關(guān)系，結(jié)果顯示，血漿中EBVDNA與鼻咽癌患者臨床分期呈正相關(guān)關(guān)系，晚期鼻咽癌的EB病毒含量明顯高于早期鼻咽癌患者。EB病毒在宿主細(xì)胞中有兩種存在方式，EB病毒或插入宿主細(xì)胞染色體中或以環(huán)狀分子游離于細(xì)胞DNA之外。鼻咽癌病人腫瘤細(xì)胞來源的EB病毒DNA釋放入血的機(jī)制目前尚不十分清楚。Chan等［5］研究發(fā)現(xiàn)血漿中EBVDNA不是完整的病毒顆粒而是裸露的DNA片斷，故推測(cè)血漿EBVDNA是由壞死的腫瘤細(xì)胞釋放入外周

15、血。有學(xué)者認(rèn)為鼻咽癌患者血清EBVDNA水平與腫瘤組織細(xì)胞凋亡有正相關(guān)性，提示外周血游離的EB病毒DNA是凋亡的腫瘤細(xì)胞釋放的。買世娟報(bào)道早期和晚期患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞EB病毒陽(yáng)性率分別為7619%(1621)和7342%(5879)，無明顯差異，但血清血漿EB病毒陽(yáng)性率分別為619%(1321)和8861%(7079)，有明顯差異，提示血清血漿中檢測(cè)到的EB病毒DNA是來源于腫瘤組織，并與局部腫瘤負(fù)荷有關(guān)。我們的研究結(jié)果說明隨著鼻咽

16、癌的進(jìn)展(腫瘤體積的增大或腫瘤轉(zhuǎn)移)血漿中EBVDNA的陽(yáng)性率亦增高，血清血漿中檢出的游離的EB病毒DNA可能來源于含有EB病毒的腫瘤細(xì)胞或單核巨噬細(xì)胞破裂而釋放病毒進(jìn)入血循環(huán)。綜上所述血漿中EBVDNA水平增高與鼻咽癌臨床分期、腫瘤負(fù)荷及病情相關(guān)。血漿EB病毒DNA定量檢測(cè)可作為鼻咽癌診斷的手段之一。參考文獻(xiàn)［1］蔣衛(wèi)紅，趙素萍，尹志華，等定量和定位檢測(cè)EB病毒在鼻咽癌組織中的感染狀態(tài)〔J〕癌癥，2005，24(7):796800［2

17、］MutiranguraA，PnthanakasemW，TheamboonlersA，etalEpsteinBarrviralDNAinserumofpatientswithnasopharyngealcarcinoma〔J〕ClinCancerＲes，1998，4(3):665669［3］LoYM，ChanLY，LoKW，etalQuantitativeanalysisofcellfreeEpsteinbarrvirusDNAinpl

18、asmaofpatientswithnasopharyngealcarcinoma〔J〕CancerＲes，1999，59(6):11881191［4］ShotelersukK，KhprasertC，SakdikulS，etalEpsteinBarrVirusDNAinSerumPlasmaasaTumMarkerfNasopharyngealCancer〔J〕ClinCancerＲes，2000，6(3):10461051［5］Cha

19、nKC，ZhangJ，ChanAT，etalMolecularacterizationofcirculatingEBVDNAintheplasmaofnasopharyngealcarcinomalymphomapatients〔J〕CancerＲes，2003，63(9):20282032(收稿日期2014－08－21修回日期2014－09－28)(編輯:吳小紅)8251實(shí)用癌癥雜志2014年12月第29卷第12期ThePractic