細(xì)胞電化學(xué)機(jī)制及MCF-7細(xì)胞電化學(xué)體外測(cè)定環(huán)境激素活性方法研究.pdf

1、本文以MCF-7細(xì)胞和PC-3細(xì)胞為模型細(xì)胞，采用電化學(xué)法、HPLC法、化學(xué)計(jì)量學(xué)法測(cè)定了細(xì)胞的伏安行為，分析了細(xì)胞電化學(xué)活性物質(zhì)的種類和含量，研究和揭示了細(xì)胞電化學(xué)伏安響應(yīng)機(jī)理；通過對(duì)比細(xì)胞分泌液和細(xì)胞質(zhì)的伏安行為，建立了基于細(xì)胞質(zhì)伏安行為的電化學(xué)檢測(cè)環(huán)境雌激素活性新方法，使環(huán)境雌激素的篩選更有效、簡(jiǎn)單、快速和靈敏。
　　 研究結(jié)果概括如下：
　　 1、揭示了細(xì)胞電化學(xué)響應(yīng)機(jī)理。研究了活細(xì)胞懸浮液和細(xì)胞質(zhì)的電化學(xué)行為，

2、發(fā)現(xiàn)活細(xì)胞懸浮液的電化學(xué)信號(hào)來源于細(xì)胞分泌物中鳥嘌呤和黃嘌呤的氧化反應(yīng)，而不是通常人們推測(cè)的來源于活細(xì)胞本體或酶的電化學(xué)響應(yīng)。本文采用了超聲波和加熱滅活法破碎活細(xì)胞得到細(xì)胞質(zhì)，并檢測(cè)了其電化學(xué)信號(hào)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)的電化學(xué)信號(hào)遠(yuǎn)高于活細(xì)胞懸浮液，并且加熱滅活法獲得的細(xì)胞質(zhì)的伏安信號(hào)更強(qiáng)，這是由于該方法獲得的細(xì)胞質(zhì)中鳥嘌呤和黃嘌呤的含量較高。
　　 2、建立了電化學(xué)法評(píng)價(jià)細(xì)胞活性系統(tǒng)。為了揭示細(xì)胞電化學(xué)信號(hào)與細(xì)胞活性的關(guān)系，本文采用了經(jīng)

3、典天然抗癌藥物紫杉醇和系列非強(qiáng)效天然抗癌藥物黃酮類化合物作為細(xì)胞活性抑制劑，使用電化學(xué)法研究了藥物對(duì)細(xì)胞活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著藥物作用時(shí)間和劑量的增加，細(xì)胞活性下降，細(xì)胞質(zhì)中鳥嘌呤和黃嘌呤的濃度下降，細(xì)胞質(zhì)電化學(xué)信號(hào)也隨之下降，并具有時(shí)間和劑量依賴性。采用MTT和流式細(xì)胞儀常規(guī)檢測(cè)法驗(yàn)證電化學(xué)法的可靠性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的檢測(cè)結(jié)果與電化學(xué)法基本一致，說明基于細(xì)胞質(zhì)伏安行為建立的電化學(xué)評(píng)價(jià)細(xì)胞活性方法具有高靈敏性和可靠性。揭示了細(xì)胞質(zhì)電

4、化學(xué)行為與核苷酸代謝之間的關(guān)系。
　　 3、建立了細(xì)胞電化學(xué)檢測(cè)環(huán)境雌激素活性方法。比較了去激素MCF-7細(xì)胞與正常培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞電化學(xué)行為及其細(xì)胞質(zhì)中電活性物質(zhì)成分的區(qū)別。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，去激素MCF-7細(xì)胞質(zhì)中的黃嘌呤和鳥嘌呤濃度降低，使細(xì)胞分泌黃嘌呤和鳥嘌呤能力降低，導(dǎo)致細(xì)胞和細(xì)胞質(zhì)的伏安信號(hào)減弱，說明去激素MCF-7細(xì)胞的活性下降；研究了標(biāo)準(zhǔn)雌激素雌二醇、環(huán)境雌激素壬基酚和雙酚A對(duì)去激素培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)