缺血性中風(fēng)動物模型研究

1、18缺血性中風(fēng)動物模型研究缺血性中風(fēng)動物模型研究20132013級碩士級碩士8班陳林偉陳林偉南京中醫(yī)藥大學(xué)南京中醫(yī)藥大學(xué)摘要摘要:實驗動物或細(xì)胞模型完全模擬人類的中風(fēng)十分困難，動物模型與臨床的擬合具有重要意義。腦缺血動物模型為研究腦缺血后病理過程.病理生理機(jī)制及評價潛在的治療干預(yù)效果等提供了極其重要的手段。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞:缺血性中風(fēng)；動物模型；大腦中動脈閉塞腦卒中，俗稱中風(fēng)，包括腦出血、腦血栓和腦梗塞等。缺血性中風(fēng)是由大腦主動脈或其分支血

2、栓形成，或內(nèi)栓子阻塞引起，且多為大腦中動脈(MCA)栓塞。利用實驗動物或細(xì)胞模型完全模擬人類的中風(fēng)十分困難，過去二十年，經(jīng)動物模型研究證明有效的700多種藥物中，除一種新自由基消減劑(NXY059)外，其余全都未能在三期臨床得到陽性結(jié)果，從而無法證明其有效性，故研究建立與人類發(fā)病機(jī)理相近、可長期觀察、結(jié)果穩(wěn)定可靠、便于操作、價格低廉而實用的符合人類中風(fēng)的動物模型成為一個迫切需要解決的問題。1實驗動物的選擇實驗動物的選擇在新藥研發(fā)與腦缺血

3、基礎(chǔ)工作中，選擇恰當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ褪欠浅Ｖ匾?。缺血性中風(fēng)動物模型中使用的實驗動物有兩大類：即靈長類和嚙齒類。對于中風(fēng)的生理病理的了解，最初來源于中風(fēng)患者。因此，靈長類動物對中風(fēng)的基礎(chǔ)研究具有重要作用。與人類相似的多腦回靈長類動物種屬(如獼猴)，在行為和感覺運動整合方面與人類有密切的相似性，是中風(fēng)基礎(chǔ)研究、探索性研究和臨床前評價的最佳動物模型。利用非人靈長類動物制備模型，已有了幾十年的經(jīng)驗積累，如狒狒。STAIR會議提出，藥物一旦用小動物做

4、出陽性結(jié)果，應(yīng)該在較高的物種進(jìn)行驗證，然后才能開始臨床試驗[1]。最近報道，利用狨猴模型發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)保護(hù)藥物氯美噻唑。國內(nèi)也有學(xué)者采用光化學(xué)法成功造成樹鼩局部腦缺血模型呤[2]，其造模方法亦被多人借鑒采納。但是，到目前為止，尚無標(biāo)準(zhǔn)化的、被廣泛接受的靈長類動物中風(fēng)模型。與靈長類較大的動物相比，嚙齒類動物模型，如大鼠和小鼠，具有價格便宜、來源充足、品種純化、制作模型方法簡單、存活率高、腦血管解剖和生理較接近于人類、易于監(jiān)測生理參數(shù)，腦標(biāo)本制

5、作容易等多面的優(yōu)勢[3]。但是嚙齒類動物的大腦與人和非人靈38組間、個體內(nèi)差異，都是評價模型成功與否的關(guān)鍵。3局灶性腦缺血模型局灶性腦缺血模型3.13.1大腦中動脈電凝阻斷模型大腦中動脈電凝阻斷模型通過將雄性SD大鼠小顱窗暴露大腦中動脈起始部，在大腦中動脈靠近頸內(nèi)動脈處將其電凝阻斷，造成供應(yīng)區(qū)缺血。為常用的永久性局灶性腦缺血模型。缺血成功率高，重復(fù)性好；但手術(shù)較復(fù)雜，且須開顱，破壞了顱腔完整性，如操作不當(dāng)，可直接損傷腦組織。理論上可制成

6、再灌注模型，但實際操作較困難[6]。3.2大腦中動脈線栓法再灌注模型大腦中動脈線栓法再灌注模型首次描述了線栓法阻塞大鼠大腦中動脈，將尼龍線自雄性SD大鼠的頸外動脈插入，然后將線引入頸內(nèi)動脈，使其穿過大腦中動脈起始部，阻斷大腦中動脈，造成大腦中動脈供應(yīng)區(qū)血流中斷，導(dǎo)致局灶性缺血。缺血一定時間后，將栓線慢慢抽出，恢復(fù)血流進(jìn)行再灌注。此法誘發(fā)的缺血再灌注和永久性缺血性損傷程度有所差別，永久性缺血后梗死體積較短暫性缺血要大。本法無需開顱避免了手

7、術(shù)操作對腦組織的直接刺激作用。方法簡單易行，適于對再灌注損傷的病理生理機(jī)制研究。目前該法已逐漸取代開顱法而成為最流行的方法。優(yōu)點是無需開顱，屬相對非侵入的方法。缺點是需要一定的手術(shù)技巧，在以往復(fù)雜的操作中常出現(xiàn)動物死亡率高、腦出血或蛛網(wǎng)膜下腔出血、梗死大小不衡定等情況。另外個體差異較大，死亡率高[7]。線栓法不利之處包括：1、血管破裂和隨后蛛網(wǎng)膜下腔出血；2、體溫過高；3、不適當(dāng)?shù)拇竽X中動脈阻塞。栓線的有機(jī)硅涂層和激光多普勒引導(dǎo)下插線可

8、以減少蛛網(wǎng)膜下腔出血的發(fā)生。自發(fā)高熱的產(chǎn)生，被認(rèn)為發(fā)生在大多數(shù)動物大腦中動脈阻塞持續(xù)2h或更長時間，是與下丘腦損傷有關(guān)[8]。在Longa法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，使得制作方法簡便，提高了造模的成功率和可重復(fù)性，制成穩(wěn)定均一的MCAO模型[9]。具體方法為大鼠麻醉后，分離頸總動脈(CCA)和頸外動脈(ECA)，將鼠頭沿長軸方向扭轉(zhuǎn)向左側(cè)45。，拉直ECA與頸內(nèi)動脈的夾角。使用頭端3mm硅膠包埋制成0.260.3mm膨大的線栓，插入自CCA與