小鼠骨髓染色體的快速制備

1、,小鼠骨髓染色體的快速制備,目的要求實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)用品方法與步驟實(shí)驗(yàn)報(bào)告,,目的要求,掌握小鼠骨髓細(xì)胞染色體的制備方法，識別小鼠染色體的數(shù)目及特點(diǎn)。,,,實(shí)驗(yàn)原理,骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后，使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟，可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本。,,實(shí)驗(yàn)用品,1．器材：解剖器具、注射器、離心機(jī)、離心管、恒溫水浴箱、載玻片、酒精燈等；2．試劑 0.1%秋

2、水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 3．材料：小鼠,,方法與步驟,取材前3～4 h，向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動(dòng)物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例。,,腹腔內(nèi)注射秋水仙素3~4小時(shí)后，斷頭處死小鼠。,,取出小鼠的后肢骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細(xì)胞的流失。,,滴加適量生理鹽水

3、進(jìn)行沖洗，并仔細(xì)地將皮膚、肌肉等組織清除干凈。,,加入適量低滲液，用剪刀將骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓細(xì)胞全部釋放出來。,,用濾網(wǎng)將獲得的液體過濾到離心管中，加低滲液至8ml左右，室溫下靜置20~30分鐘，進(jìn)行低滲。低滲結(jié)束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液進(jìn)行預(yù)固定，輕輕混勻后，離心。,,1200轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，棄上清，加入固定液，混勻后，室溫放置30分鐘，再次離心去上清，重復(fù)固定一次，離心后，向沉淀中加入1ml預(yù)冷的