醫(yī)學免疫學檢驗考試重點

1、1醫(yī)學免疫學檢驗考試重點醫(yī)學免疫學檢驗考試重點概論抗原抗體反應1免疫學基本概念及其生物學功能；免疫：機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能免疫三大功能：免疫防御、免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)視中樞免疫器官（骨髓和胸腺）外周免疫器官（淋巴結、脾臟、扁桃體）免疫細胞：淋巴細胞（T，B，NK）、單核巨噬細胞、其他免疫應答細胞（中性粒、嗜酸性、嗜堿性和肥大細胞）免疫分子：免疫球蛋白（IgM，IgG，IgA，IgE，IgD），補體，細胞因子，細胞黏附分子，人

2、類白細胞分化抗原免疫應答：機體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生的一系列反應，并以排出或分解該抗原為目的的反應過程。過程：抗原的識別、處理、信息傳遞（識別階段），免疫細胞的激活、增殖、分化（活化階段）以及產(chǎn)生一系列的免疫效應因子（效應階段）。臨床免疫學檢驗：研究免疫學檢測理論、技術、應用，免疫疾病發(fā)病機制、免疫診斷、及防治的一門醫(yī)學領域的應用學科。免疫學檢測技術的基礎是抗原抗體反應，免疫學技術有凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應、中和反應和標記免

3、疫反應五種類型。免疫檢驗：1）利用免疫檢測原理和技術檢測免疫活性細胞、抗原、抗體、補體、細胞因子、細胞黏附分子等免疫相關物質；2）體液中的微量物質如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元素。臨床免疫學：利用免疫學理論和技術研究疾病的免疫病理機制、診斷和鑒別診斷、療效評價、預后判斷和預防的多個分支學科的總稱。免疫性疾?。焊鞣N原因引起的機體免疫應答異常所致的疾病，包括超敏反應性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。感染免疫學：研究

4、病原微生物與宿主相互關系從而控制感染的學科，傳統(tǒng)免疫學核心。腫瘤免疫學：研究腫瘤免疫原性、機體抗腫瘤的免疫效應及機體的免疫功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相互關系以及腫瘤免疫診斷與防治的學科。移植免疫學：研究移植物與宿主相互關系從而選擇移植物和延長移植物存活的學科。2血清學反應的概念；抗體主要存在于血清中，體外的抗原抗體反應稱為血清學反應?？乖贵w反應：抗原與相應抗體在體內或體外發(fā)生的特異性結合反應，特異性取決于抗原表位和抗體超變區(qū)分子間的結構互

5、補性與親和性，并通過靜電引力、范德華引力、氫鍵結合力和疏水作用力等非共價鍵結合在一起。3抗原抗體的反應原理Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)分子間的結構互補性；分子表面特異的可逆的弱結合力；親水膠體轉化為疏水膠體親和力（affinity）是抗體分子上一個抗原結合點與對應抗原表位之間相互適應而存在的引力。這是抗原與抗體之間固有的結合力。親合力（avidity)是指反應系統(tǒng)中整個抗原分子與相應抗體之間的結合能力。親和力與親和性、抗體的結合價和抗原的

6、抗原決定簇數(shù)目相關。親和力越大，抗原抗體結合越牢固。K=抗原抗體復合物濃度（游離抗原濃度游離抗體濃度）K值大的抗體與抗原牢固結合，不易解離，說明該抗體有高親和力。親水膠體轉化為疏水膠體：血清學反應條件下，抗原抗體均帶負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。當抗原與抗體結合后，表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復合物成為疏水膠體。電解質作用下，中和膠體表面電荷，使疏水膠體靠攏，形成可見的抗原抗體復合物。34.

7、刺激淋巴細胞增生分化，從而增強和擴大免疫應答能力。應用佐劑的缺點：佐劑?；煊形⒘科渌镔|，這些物質進入體內后也可引起抗體的產(chǎn)主，影響抗血清的特異性；注射佐劑可引起局部形成肉芽腫和無菌性膿腫；反復注射，易發(fā)生超敏反應，使局部組織壞死，甚至引起動物死亡。4免疫血清制備動物的選擇1.抗原與免疫動物種屬差異越遠越好；2.動物個體選擇:適齡、健壯、無感染正常動物、體重合乎要求；3.抗原性質:酶類—豚鼠；甾體激素—家兔4.血清用途:R型:等價帶寬適

8、于診斷試劑.用家兔免疫產(chǎn)生.H型:等價帶窄適于免疫治療.用馬免疫產(chǎn)生.5.抗血清需要量選擇免疫方法1.免疫劑量：1)不能過大或過小，否則產(chǎn)生免疫耐受；2)首次免疫劑量不宜過大3)大:0.51mg只小:0.10.6mg只免疫途徑:1）皮內或皮下注射：a.采用多點注射(810點)；b.半抗原宜皮內多點注射；c.皮內注射易引起細胞反應，對提高抗體效價有利，但皮內注射較困難(因佐劑加入后粘度大)。2）腹腔和靜脈注射:多用于顆粒性抗原和加強免疫。

9、3）淋巴結內注射:適宜于微量抗原(先用完全佐劑在足掌作基礎免疫)。免疫時間：1）間隔約1020天（宜長、否則導致免疫耐受）；2）二次以后每次間隔7~10天（過長→刺激變弱→抗體效價不高。）3)一般接種58次，不超過2個月；4)半抗原的免疫間隔要求較長(30~40天)。如8次免疫后仍不產(chǎn)生抗體，則應更換動物。采血及試血頸動脈采血法：家兔、綿羊、山羊；心臟采血法：家兔、豚鼠、大鼠、雞；靜脈采血法：家兔、山羊、綿羊免疫血清的純化：免疫血清是成

10、分復雜的混合物，除有特異性和非特異性抗體，還有各種蛋白成分抗血清——硫酸銨鹽析多次（粗提）——親和層析，離子交換層析，凝膠過濾——IgG類抗體（不純）——親和層析，吸附法——特異性IgG抗體抗體的鑒定：1.效價的鑒定：抗體含量測定。根據(jù)抗原性質不同，顆粒性抗原可采用凝集試驗?？扇苄钥乖Ｓ妹庖唠p擴散法2抗體的純度鑒定：SDSPAGE。若只出現(xiàn)一條蛋白電泳區(qū)帶說明抗體純化已達到要求，而出現(xiàn)多條蛋白區(qū)帶則表明抗血清中混有雜蛋白，必須進一步純

11、化。3.特異性鑒定：抗體對相應或相似抗原識別能力一般用特異性抗原及其相似的抗原與待鑒定抗體進行免疫雙擴散試驗。如果出現(xiàn)交叉反應，說明有雜抗體存在?？蓱孟鄳乖针s抗體，即可得到單價特異性抗體。4抗體親和力鑒定：親和力高則靈敏度好:親和力測定主要有平衡透析法、酶聯(lián)免疫法和放射分析法。親和力的高低是由抗原分子和抗體分子的結合位點、抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。免疫血清的保存：1.4℃保存：可保存3～6個月2.低溫保存：20～40

12、℃，可保存2～3年?？贵w的保存濃度為20～30mgml為宜，加入110000的硫柳汞或11000的疊氮鈉防腐，并加入等體積的中性甘油，分裝小瓶，置20℃以下低溫保存。3.冰凍干燥保存：可保存5～10年4單克隆抗體的概念每一克隆B細胞所產(chǎn)生的理化性狀高度均一、組成均一、只與同一種抗原決定族反應的抗體。5淋巴雜交瘤技術的基本原理雜交瘤技術：在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞

13、雜交瘤。6單克隆抗體的制備流程1、親本細胞的選擇（骨髓瘤細胞：BALBC小鼠骨髓瘤NS1細胞株和SP20細胞株，致敏B細胞：免疫脾細胞，每次抗原用量100μg）2、細胞融合（細胞融合劑——PEG種類:分子量1000、1500、4000的PEG是最常用的細胞融合劑；作用機理：誘導細胞膜上脂類物質結構重排，使細胞膜易打開而有助于細胞融合；作用特點：隨機發(fā)生的，不同廠商、批號、分子量的PEG，其純度與毒性有所不同。）3、雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)