淺談甘油的原理與創(chuàng)新

1、1淺談甘油的原理與創(chuàng)新寧摘要:以帶小棒鏈霉菌XC135為出發(fā)菌株，經(jīng)紫外線照射60s，并結(jié)合甘油耐受性菌株的理性篩選，選育得到較佳誘變株XC548，效價(jià)達(dá)1970μgml。該菌株經(jīng)斜面連續(xù)傳代4次，效價(jià)穩(wěn)定在1800μgml以上。對該菌株的生理特性研究表明，其具有活力較強(qiáng)的甘油特異誘導(dǎo)的甘油轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(GTS)。以XC548菌株為試驗(yàn)菌株，當(dāng)培養(yǎng)基中甘油初始濃度為1.5%，并且在發(fā)酵60h時(shí)補(bǔ)加1.0%的甘油，搖瓶發(fā)酵的效價(jià)可達(dá)2668μ

2、gml，較出發(fā)菌株(318μgml)提高了7.4倍。該工藝應(yīng)用于15L發(fā)酵罐共十個(gè)批次的發(fā)酵試驗(yàn)，96h時(shí)克拉維酸的平均效價(jià)達(dá)2103μgml。關(guān)鍵詞：甘油；原理；創(chuàng)新Abstract:inStreptomycesclavuligerusXC135asstartingstrainafterUVirradiationof60scombiningwiththescreeningofglyceroltolerancestrainsbreedi

3、ngisrationalmutantXC548thetiterof1970μgml.Thestrainwasinclined4passageswasstableatmethan1800μgml.Studyshowsthatphysiologicalacteristicsofthisstrainwhichhasstrongglycerolglyceroltransptsystemactivityinduced(GTS).StrainXC5

4、48wasedastheteststrainwhentheinitialconcentrationofglycerolmediumf1.5%adding1%glycerol312000rmin離心10min后，用重蒸水適當(dāng)稀釋，供HPLC檢測。色譜條件為：色譜柱C18，ODS(4.6mm150mm)，柱溫25℃。檢測器：VWD(SPD10A)，檢測波長220nm，流動相：0.02molKH2PO4∶乙腈(400∶12，體積比)，流速0.

5、7mlmin，進(jìn)樣量10μl。菌絲濃度測定取10ml發(fā)酵液，4000rmin離心15min，測得沉淀物在發(fā)酵液中所占的比例即為菌絲濃度。pH測定pH電極測定。(4)菌種誘變處理單孢子懸液的制備將冷凍孢子移種子斜面，培養(yǎng)成熟后加入500μgml的無菌咖啡因溶液(作助變劑)，刮下孢子并打散，用無菌濾紙過濾即得。誘變處理吸取5ml單孢子懸液于無菌平板中，置于功率為30W，波長253.7nm的紫外燈直下30cm處開蓋振蕩照射60s，避光放置過夜

6、，取樣經(jīng)梯度稀釋后涂平板，28℃，避光培養(yǎng)9d左右，挑取單菌落轉(zhuǎn)接斜面。(5)甘油耐受性突變株的篩選將經(jīng)紫外線照射的孢子懸液稀釋后，分別涂布于含有一定甘油濃度的分離平板上，28℃培養(yǎng)9～12d。2結(jié)果與討2.1甘油耐受性突變株的篩選帶小棒鏈霉菌存在著甘油誘導(dǎo)的甘油轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(GTS)，在甘油耐受性高的菌株中GTS活力強(qiáng)，可高效轉(zhuǎn)運(yùn)甘油合成克拉維酸。為此，試驗(yàn)中采用耐受高濃度甘油的平板篩選UV誘變后的突變株。(1)菌株XC135對甘油的耐受