hiv抗體篩查試驗室內(nèi)質(zhì)控品制備和常檢測典型案例分析

1、北京大學人民醫(yī)院 紀和平北京市疾病預(yù)防控制中心 辛若雷,HIV抗體篩查試驗室內(nèi)質(zhì)控品制備和應(yīng)用及日常檢測案例分析,室內(nèi)質(zhì)控品,抗體檢測的統(tǒng)計學室內(nèi)質(zhì)量控制非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復性而設(shè)置的，包括強陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清；只設(shè)置一個弱陽性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗。

2、室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒炇易孕兄苽洹?室內(nèi)質(zhì)控品的使用和質(zhì)量要求,每一次實驗必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實驗的重復性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異。室內(nèi)質(zhì)控品的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv＜20%）；并且質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌，且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。,北京大學人民醫(yī)院,肝病研究所承擔HIV抗體檢測任務(wù)：首選試劑：生物梅里埃（3代）；備用試劑：萬泰3代；2019年檢測樣本量：篩查陽性樣本數(shù)26例（

3、0.3‰）；其中，確證試驗陽性樣本13例，不確定4例，陰性9例；2019年1-4月，篩查陽性15（1 ‰ ），陽性9例。2019年，檢驗科開始用雅培化學發(fā)光進行初篩，初篩陽性送肝病研究所進行復檢。,調(diào)制針對生物梅里埃（3代）_1,材料抗-HIV陽性滅活血清（可用梅里埃試劑盒中的陽性對照替代）；抗-HIV陰性的血清（可用梅里埃試劑盒中的陰性對照）或20%小牛血清；2 mL凍存管；生物安全柜；酶免儀、微量進樣器、15-50 m

4、L離心管；,調(diào)制針對生物梅里埃（3代）_2,基本操作流程先將抗-HIV陽性滅活血清混合進行常規(guī)檢測，讀取OD值。將抗-HIV陽性滅活血清用抗-HIV陰性的血清、或20%小牛血清稀釋至所需濃度（4-6倍），一般為陰性對照OD值的3-4倍。將配置好的質(zhì)控血清分裝到2 mL凍存管中，1 mL/管，置-20℃冰箱保存。按照室內(nèi)質(zhì)控要求計算出此批次質(zhì)控血清的SD值、CV值，并繪出質(zhì)控圖，標明批號備用。,2019年2月質(zhì)控圖,2019-2質(zhì)

5、控考評質(zhì)控圖,ELISA檢測HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備,目的　實驗室自制外部質(zhì)控血清，繪制質(zhì)控圖，滿足《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》要求和考評要求。方法　利用試劑盒內(nèi)的陽性對照血清，用健康人的血清按一定量混合稀釋成弱陽性，篩選出合適混合比例，分裝冷凍保存使用。結(jié)果　試劑盒內(nèi)的陽性對照血清與健康人的血清1：10左右混合比例比較適合。結(jié)論　自制質(zhì)控血清性能穩(wěn)定，經(jīng)濟、方便，便于推廣使用。,韋雪芳（廣西壯族自治區(qū)橫縣疾病預(yù)防控制中心HIV

6、初篩實驗室530300）；檢驗醫(yī)學與臨床，2019；8:2527-2528.,HIV抗體陽性血清梯度稀釋系列用于實驗室質(zhì)控和試劑評價探討（1）,方法 用陰性血清梯度稀釋HIV抗體確認陽性血清，用第三代ELISA檢測試劑進行檢測，尋找稀釋度與OD 值間的關(guān)系，然后應(yīng)用于實驗室質(zhì)控和試劑評價。HIV 抗體陽性混合血清：WB確證陽性樣本：WB全條帶（gp160、gp120、p66、p55/p51、gp41、p31、p24、p17）；H

7、IV 抗體陰性混合血清：篩查試驗陰性；用陰性血清稀釋陽性混合血清，篩查試驗確定最高稀釋度稀釋倍數(shù)：103-105；-20℃保存；,李紅星（商丘市衛(wèi)生防疫站）；河南預(yù)防醫(yī)學雜志，2019；16:133-135.,HIV抗體陽性血清梯度稀釋系列用于實驗室質(zhì)控和試劑評價探討（2）,結(jié)果 在一定稀釋度范圍內(nèi)-log[稀釋度]與OD 值呈線性關(guān)系。實驗系列用于質(zhì)控，各實驗室均正確報出樣品的陰陽性結(jié)果，但靈敏度（回歸曲線斜率/ 殘差標準差）不

8、同，依此對實驗室進行排序。結(jié)論 HIV 抗體陽性血清梯度稀釋系列可用于實驗室質(zhì)控和試劑評價。但靈敏度的合適范圍還需繼續(xù)探討。,李紅星（商丘市衛(wèi)生防疫站）；河南預(yù)防醫(yī)學雜志，2019；16:133-135.,北京大學人民醫(yī)院肝病研究所聯(lián)系電話：88325729,化學發(fā)光試劑應(yīng)用案例1,,韓××，山東青島人,19歲，MSM2019年3月初，到北京大學人民醫(yī)院呼吸科，以發(fā)燒、腹瀉住院治療；檢驗科雅培化學發(fā)光：S/C

9、O值29；送肝病研究所復核陰性（梅里埃、萬泰，三代）；主治醫(yī)生比較負責任，采血繼續(xù)送檢，梅里埃（1.9）、萬泰（0.3），均陽性；CD4細胞計數(shù)和CD4/CD8比值偏低；地壇醫(yī)院皮膚科就診，送檢確證。,化學發(fā)光試劑應(yīng)用案例1（續(xù)）,北京大學人民醫(yī)院&地壇醫(yī)院韓××，山東青島人,19歲，MSM,化學發(fā)光試劑應(yīng)用案例2,東直門醫(yī)院&性艾所賈××，33歲，MSM,,,雅培：2.5

10、1萬泰4：0.013,一個月后，梅里埃4：1.81萬泰4：1.49,,,,部分單位送檢樣本確證結(jié)果分析,2019年羅氏和雅培化學發(fā)光確證結(jié)果的比較,根據(jù)病例屬性情況，選擇適宜的篩查試劑；沒有最好的試劑，要選擇最適合的試劑。,統(tǒng)計數(shù)據(jù)截止到2019-4-10,HIV抗體不確定病例排查,HIV抗體不確定病例(特殊病例)的排查，可以通過核酸檢測予以輔助診斷，尤其是手術(shù)病例；可聯(lián)系協(xié)和醫(yī)院、地壇醫(yī)院、佑安醫(yī)院送檢，約1300元/例；