細(xì)胞培養(yǎng)基種類與基本成分

1、細(xì)胞培養(yǎng)基種類與基本成分細(xì)胞培養(yǎng)基種類與基本成分培養(yǎng)基種類經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEMF12都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下：1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基（BasalMediumEagle），1955年Eagle設(shè)計(jì)，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用，

2、在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基又稱低限量Eagle培養(yǎng)基（MinimalEssentialMedium），1959年在Eagles基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基，但因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)

3、基DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，起初是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000mgL，后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500mgL，這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，也適

4、用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。4、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基Guilber和Iscove將DulbeccoMedium改良為IscovesMedium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPSL15

5、培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。培養(yǎng)基成分細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來(lái)源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)

6、鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)：氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2周以上時(shí)，還應(yīng)重新

7、加入原來(lái)量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來(lái)源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中無(wú)機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過(guò)提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素細(xì)胞通常可耐受260mOsmkg～320mOsmkg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透