第五章 植物組織培養(yǎng)技術(shù)實驗方案

1、第五章第五章植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)一、植物組織培養(yǎng)中的基本概念一、植物組織培養(yǎng)中的基本概念(1)植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù):在無菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官（根，莖，葉，花，果實等）、組織（形成層，花藥組織等）、細(xì)胞（體細(xì)胞，生殖細(xì)胞等）以及原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，并給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，使其長成完整植株的過程。(2)理論依據(jù)：理論依據(jù)：植物細(xì)胞的全能性，即指植物機體的每個細(xì)胞都含有該物種全套的基因組，具有

2、發(fā)育成完整個體的潛力。(3)外植體：外植體：從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細(xì)胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種子等器官以及他們形成的體細(xì)胞胚等材料。(4)分化：分化：在個體發(fā)育過程中，由一種相同的細(xì)胞類型經(jīng)細(xì)胞分裂后逐漸在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上形成穩(wěn)定性差異，產(chǎn)生不同的細(xì)胞類群的過程稱為細(xì)胞分化。(5)脫分化：脫分化：已經(jīng)高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪失原來的分化結(jié)構(gòu)和功能，

3、最后形成無組織的細(xì)胞團或愈傷組織的過程。(6)愈傷組織：愈傷組織：在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團無序生長的薄壁細(xì)胞。（具有細(xì)胞分裂能力）。(7)再分化：再分化：已經(jīng)脫分化的細(xì)胞在一定條件下，又可經(jīng)過愈傷組織或胚狀體，再分化出根和芽，形成完整植株，這一過程叫作再分化。(8)不定芽：不定芽：在高等植物正常的個體發(fā)育中，芽一般是只從莖尖或葉腋等的一定位置生出。所以這種象頂芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，稱為定芽。與此相反，凡從葉

4、、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽。(9)胚狀體：胚狀體：在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中，由一個或一些體細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，形成的與合子胚相類似的結(jié)構(gòu)。二、植物組織培養(yǎng)過程（菊花為例）二、植物組織培養(yǎng)過程（菊花為例）1、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制:方法：培養(yǎng)基干粉配制法稱取培養(yǎng)基干粉42g加水加熱煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的濃度分別加入激素。（其中生根用的植物激素NAA為0.2mg1000ml

5、）用1molLNaOH和1molLHCl調(diào)節(jié)pH至5.8。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至150ml組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋121℃，滅菌20min。2、菊花接種與培養(yǎng)：、菊花接種與培養(yǎng)：拓展實驗：選取不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽拓展實驗：選取不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽不同外植體的培養(yǎng)基激素配比如下：不同外植體的培養(yǎng)基激素配比如下：葉片：葉片：6—BA:2mgLNAA:0.5mgL將葉片切成將葉片切成0.5cm0.5cm小塊小塊莖段

6、：莖段：6—BA:3mgLNAA:0.2mgL將嫩枝切成將嫩枝切成1cm莖段莖段腋芽：腋芽：6—BA:3mgLNAA:0.2mgL將嫩枝切成將嫩枝切成1—2cm帶腋芽的莖段帶腋芽的莖段最后調(diào)節(jié)最后調(diào)節(jié)PH值至值至6.0（1）20天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖5：圖520天后菊花不同外植體形態(tài)（從左往右分別為：葉片愈傷、莖段愈傷、腋芽培養(yǎng)形態(tài)）（2）50天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖天后，菊花不同