標(biāo)準(zhǔn)菌驗(yàn)收

1、標(biāo)準(zhǔn)菌驗(yàn)收、制備、保藏、標(biāo)準(zhǔn)菌驗(yàn)收、制備、保藏、傳代、使用、銷(xiāo)毀的管理傳代、使用、銷(xiāo)毀的管理1.1.標(biāo)準(zhǔn)菌的來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)菌的來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（ChinaMedicalculturecollectionCMCC）提供的冷凍干燥菌種（0代）或由上級(jí)藥檢部門(mén)已接種好的菌種斜面（3代）。黑曲霉的0代菌種為保存于含15%甘油的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中的孢子懸液冷存管。中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心

2、提供的冷凍干燥菌種的標(biāo)簽CMCC（B）代表細(xì)菌（bacteria）CMCC(F)代表真菌（fungi）每種菌具有固定的代號(hào)。2.2.標(biāo)準(zhǔn)菌的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)菌的驗(yàn)收從菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的原始菌種管是玻璃安瓿裝的凍干菌，接收同時(shí)應(yīng)檢查是否有隨菌種附有的相關(guān)資料。接收菌種時(shí)應(yīng)檢查安瓿的數(shù)量和名稱，和每一支安瓿的完整性。在相應(yīng)的菌種接收記錄上記上所有的關(guān)于菌種的信息，如名稱、數(shù)量和接收日期等。在菌種安瓿及菌種管上粘貼標(biāo)簽，內(nèi)容包括：菌種名稱、菌種代號(hào)、

3、代次、接收日期、接收人、貯存條件、有效期至。新購(gòu)入的0代原始菌種儲(chǔ)存于－20℃，有效期為三年。從上級(jí)藥檢部門(mén)購(gòu)買(mǎi)的已接種好的菌種斜面（3代）應(yīng)檢查菌種管是否完好。儲(chǔ)存于2～8℃，有效期為3個(gè)月。3.3.標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇、復(fù)壯及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株的制備標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇、復(fù)壯及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株的制備3.13.1物品及試劑物品及試劑：接種針、酒精燈、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.23.2培養(yǎng)基培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基:用于黑曲霉復(fù)蘇、復(fù)壯.液體硫乙醇酸

4、鹽培養(yǎng)基:用于生孢梭菌復(fù)蘇、復(fù)壯.營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基:用于金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單胞菌復(fù)蘇、復(fù)壯。改良馬丁培養(yǎng)基:用于白色念珠菌復(fù)蘇、復(fù)壯.然后在30～35℃下培養(yǎng)2～3天；同樣的方法取真菌到玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，并在23～28℃下培養(yǎng)7天；培養(yǎng)后，觀察其菌落形態(tài)，應(yīng)符合該菌種形態(tài)特征。3.53.5污染處理污染處理假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長(zhǎng)，則說(shuō)明或操作有污染或菌種不純。將此

5、被污染了的培養(yǎng)物滅菌處理?？蓪ふ以蛑匦路蛛x挑選純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為第四代。并重新制備儲(chǔ)備菌種管3.63.6菌種的傳代與保藏菌種的傳代與保藏將菌種接種至一新鮮培養(yǎng)基上，每萌發(fā)一次即稱為一代，因此，當(dāng)原始菌種復(fù)溶并轉(zhuǎn)至新培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，即認(rèn)為已傳代一次，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代，冷凍干燥的原始菌種開(kāi)啟后轉(zhuǎn)種后為第1代，直到第3代為工作菌種。菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過(guò)5代。菌種的傳代保藏過(guò)程菌種的傳代保藏

6、過(guò)程3.3項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇為傳第一代，復(fù)壯為第二代。傳第三代時(shí)取1支凍存管自然解凍，將其轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時(shí)，工作用菌種為第3代。工作用菌種，分為兩類(lèi)：一類(lèi)用于定期傳代(W3)，一類(lèi)用于實(shí)驗(yàn)用（S3）。定期傳代用菌的傳代其操作步驟如下（斜面接種法）：（1）從冰箱冷藏室中取出菌種斜面后，應(yīng)在室溫放置約30分鐘。（2）將裝有新鮮配制的培養(yǎng)基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期，和傳代菌種一并移入潔凈工作臺(tái)，打開(kāi)紫外燈照射一小時(shí)。（

7、3）關(guān)閉紫外燈。點(diǎn)燃酒精燈，左手握住菌種斜面，將管口靠近火焰上方，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅約30秒，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過(guò)三次。（4）右手用無(wú)名指、小指及掌部夾住管塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕拔開(kāi)管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷后再至菌苔上，刮取少量菌苔，隨即取出接種棒并將菌種管口移至火焰上方。（5）塞上管塞，左手將菌種管放下，取營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面（或改良馬丁瓊脂斜面）一支，照上述